五子衍宗方主要药效学成分

项目完成单位：国家药物及代谢产物分析研究中心项目完成人：马辰五子衍宗方为中药经典古方，源自唐代《悬解录》。其功用主治为补肾益精，用于治疗肾虚腰痛，尿后余沥，以及不孕不育症等。中国药典以成方制剂五子衍宗丸形式收载，其处方组成为：菟丝子400g、枸杞子400g、覆盆子200g、车前子100g和五味子50g。在五子衍宗方中菟丝子和枸杞子为方中的君药。目前中国药典对五子衍宗丸仅有性状和定性鉴别，未有含量测定。菟丝子为旋花科植物菟丝子CuscutachinensisLam.的干燥成熟种子，为常用中药，具有滋补肝肾、固精缩尿、安胎、明目、止泻等作用，其中黄酮类化合物为主要成分。目前从菟丝子中提取并鉴定出结构的黄酮类成分有金丝桃苷、槲皮素、紫云英苷、山奈酚等。目前中国药典2000版一部中，未对菟丝子进行含量测定。菟丝子中含有的主要化学成分以槲皮素及其苷为主，其中金丝桃苷为含量较高的槲皮素苷，因此对菟丝子和五子衍宗方进行含量测定时，以金丝桃苷为指标成分，其理化性质及结构如下：物理性状：淡黄色针状结晶（乙醇），熔点227～230℃（237～239℃分解），比旋度[α]20D=-83。（C=0.2吡啶），易溶于甲醇、乙醇、丙酮及吡啶。金丝桃苷化学结构：一、五子衍宗方及菟丝子中金丝桃苷的含量测定1实验材料及仪器设备1.1药品及试剂金丝桃苷对照品：本所植化室提供，纯度达95%以上五子衍宗方药材（菟丝子、枸杞子车前子、覆盆子、五味子）：北京同仁堂药店磷酸（分析纯）；无水乙醇（分析纯）；乙腈（色谱纯）；Fisher甲醇：（色谱纯）；双蒸水1.2仪器设备良W特at哪er晕s讯26她90钩高效恒液相规色谱辱仪及猴99背6-编二极够管阵食列检控测器罗，M安il复le朋nn幻iu饶m3伐2色嗽谱软深件，身有机上相微律孔滤坊膜（占0.砌45拦µ罗m）肾针头支滤器缺，B缺UC婆HI辩4晨61竭电热瑞恒温姓水浴续箱叉2铅色谱删条件难选择耀菟丝盆子及络五子抓衍宗坦方中覆黄酮察类成惭分较卷多，繁其中早菟丝秋子中谢以槲贿皮素闷及其列苷为暂主，创五子简衍宗皮方中肢除菟投丝子既含有型黄酮虫类成竹分外铸，车已钱子堆中也绩含有暖车钱俗苷等新黄酮追类成诊分。兰参考蜻文献贪对菟雄丝子远及五诱子衍确宗中蔽的金晕丝桃描苷测蹄定的小色谱托条件壳进行既了优捉选。筐2.虫1检议测波往长的旨选择亿从金写丝桃执苷的鹅紫外伏光谱两Fi箩g.洽1绸可见篮，其棉在2慧54枕nm养和3款55专nm随均有爽较大遭的吸旺收，务文献阿中多夺以3当55顽nm核作为涛对金聪丝桃荣苷的章检测被波长券，主兽要考饶虑其透它干烈扰成祖分在副此吸守收较削低。个因此制本论溜文对己菟丝律子中厌含量豪测定故时，作首先宿考虑衡了3饶55妖nm掘作为联检测徐波长袭，而冤对五胆子衍顷宗方距进行歉含量滚测定诸时，蹦其他沉成分占对主龟峰有膨干扰木，而惹主要庸干扰找成分扭在2币54跳nm鼻却有游较低等的吸灭收，瘦并与昂主峰筹能昆实现闹基线悦分离萝。因储此对棚五子烈衍宗倘方中抵的金驻丝桃卷苷进梦行含勾量测吴定时善选用魂了2抹54弄nm碍。欧图1帽纸金丝即桃苷盯甲醇隔溶液誉的紫趣外光住谱余2.虑2流置动相鸣的选珠择恒首先猫以流咸动相耗甲醇用－0馅.5障%磷诵酸（誉50帽：5挑0，牙用三早乙胺元调p愉H至想3.足0）央，实盐验中轧发现英柱效自下降码很快邮，分梅析认脚为使体用三惭乙胺依调p惊H，询对色鼠谱柱婚的损猛害太惊大。递考虑锅到常套规C农18衬色谱充柱的和酸性侧适用景范围弦，在脊上述恰流动困相基驾础上际分别骗考察或了0锐.5遭%醋胁酸沉、所0.妥05传%泛三氟吗乙酸失以及遭0.况1%晃磷酸雾，从调保留推时间龟、妥分离似度和册拖尾弦因子爬角度翻进行停评价荣，优盒选了将最佳摄的流义动相油组成愤。最评终确友定王甲醇屠：乙姑腈：怜0.夫1%酿磷酸融(黄4债0:喊5:名55们)作童为金帝丝桃寨苷流拜动相险条件润。磁2.弊3色优谱条悟件隙色谱债柱：赵A脱ll核te脱ch程C缩18欧柱（训5疏μ讨m手，2运50故mm庄×谱4.筐6赢mm捧i算.d鸟）优熄流动吃相：自甲醇烟-乙模腈-陷0.途1%秧磷酸惑水溶西液（狸40前：5裤：5童5）丙剩酿流哀速：抢0.瞧8愁mL蛛/狭mi营n软，柱坐温：付25英℃少，凳检测孙波长字：3岭55桐nm富（菟兔丝子剩含量产）；歪25愤4n犯m（别五子陆衍宗蚁方含组量）营3涉实验山溶液阶制备拣3.朱1对坐照品名溶液疾的配钉制解精密晕称取题金丝细桃苷杂标准仅品1婚0m词g置咐于1兰0m考L的若容量杀瓶中张，加号入甲木醇溶眯解并绳稀释趋至刻曲度，扣备用塑。济精确储量取最上述葱金丝处桃苷贝溶液陈2m辉L于集10台ml余容量脉瓶中乡，配仅成2掘00牺µ曲g/司mL胞的标跪准溶库液。刚色谱埋图见顶Fi慨g.粮2蒸（3肌55峡nm蚊）和傲Fi械g.岔3摘（2羞54竞nm币）。笑图2宿迷金丝办桃苷遇的H猴PL碰C图菊（3棍55聋nm姑检测绩）颤图3歉事金丝做桃苷黎的H宰PL群C图贪（2卖54岩nm谜检测命）罗3.钳2菟订丝子言供试小品溶终液制笨备扔3.悠2.咏1提大取方瘦法考楼察须（1私）提休取溶么剂的衡选择碑取菟国丝子棚粉6买份（封过4膜0目耳筛）现各0鼓.4刷g，吊精密种称定恐，置甚15爆0m进L三迈角瓶修中，摧分别宗精密茫加入垦甲醇服、规95坡%乙留醇肿、谅80剂%乙铸醇富、帅60昂%乙污醇箭、熔50厨%乙皱醇和舍40孤%乙窑醇各吃50鸭mL铺，称思重，疲加热润回流绸提取跃2h诉，冷寄却至缠室温罗，补芹重，蜜摇匀阔，以灾0.埋45溉µ街m滤果膜过置滤，砌即得南，进芳样1途0有µ村L，拒计算晨提取很药材解含量河。结迎果见旁表T京ab质.1掩，实躲验数伪据表荒明以剪上溶垦剂中蒸60但%乙甘醇对眯金丝怎桃苷话的提争取率资最高牢。类表1厦盛对底菟丝宪子衡提取骨溶剂物的比赌较必表瓜S奶ol丢ve场nt说Me声OH材40锋%E智tO透H重50验%E觉tO踏H认60芬%E款tO荐H据80列%E贤tO缩H织95腰%E拥tO庸H虑sa帜mp潜le较w检ei是gh体t(枯g)董0.族40东07寨0.抖40核06被0.蜡40需13怖0.强39刷91伴0.欺40肢17柴0.酸40俯02话Co挂nt溉en箩t(刷%)悲0.欢34裂2松0.国35白0繁0.座35辽2视0.甲36庄5站0.蹈35圈3织0.下29滑7撤（2去）提灿取时雾间的祸比较趣精密堆称取忆菟丝挎子粉缴4份肚各0局.4荣g，催加入暂50嚷mL秆6乳0％胶乙醇兴，称童重，酸加热段回流焦，分籍别提涝取0尚.5大、曲1贤、学2巡、唯3娇、学4h雁，冷倍却至幅室温巾，补擦重，充摇匀姨，以厉0.踩45纯µ论m滤参膜过拿滤，祝即得救，进排样1切0洒µ圾L，那计算相提取穿药材申含量蔬。结宜果见馒表T赖ab缺.2怨，实察验数耽据表香明热锯回流蚀提取枪2h梢已经凤将菟定丝子华中的纺金丝无桃苷的提取气完全源。抬表值2拦性对疼菟丝币子密提取树时间吃的比泻较丰Ti扯me贵0.纸5h界1h今2h捧3h颤4h担sa症mp绪le珍w扁ei魔gh联t(瑞g)艰0.受39辫93校0.艳40缎12蒜0.惑40娇06明0.妖40束09亩0.饿40眉06衬Co射nt科en诞t(骑%)欲0.纺31礼5呢0.波31渔3病0.杯32贴2押0.粒31括8籍0.饲31葵1寻（3董）溶角剂用宪量比陡较扮精密浑称取冻菟丝偷子粉压3份码各0洋.4酬g，坑分别树加入宗35江、周50大、浓60饼mL逮6溉0％梨乙醇惑，称原重，萌加热抬回流沃提取闻2h落，冷让却至通室温秘，补困重，挤摇匀什，以搭0.妙45揉µ守m滤跪膜过剪滤，昂即得骗，进呈样1泪0拖µ仪L，境计算练药材精含量注。结立果见前表T籍ab息.3驻。其息中5旺0m镰L溶彩剂即朱能提威取完看全缝表3乔张对降菟丝誓子惧提取冰溶剂饰体积摊的比月较竹Vo炉lu体me颂35碌mL美50耍ml呈60俱mL谱sa扬mp丽le促w折ei括gh拥t(粗g)坛0.抛39成95授0.涌40难79务0.欢40毒08霜Co科nt怜en因t(抛%)高0.伍41挽0佛0.明41习1飘0.蹲35途2霜3.音2.夺2菟标丝子筋供试脏品溶绳液制航备聋根据春上述沟条件温选择局确定掩确定扔菟丝觉子提隐取方辩法为禁：取筒菟丝类子细免粉（伍过4慰0目笔筛）穴0.胆4g恒，精沃密称仿定，船置1讲50提mL状三角有瓶中按，精筹密加暮入6痕0%牺乙醇麦50甲mL风，称夏重，票加热雄回流况提取李2h雀，冷民却至哭室温上，补害重，者摇匀膜，以窃0.盼45紫µ久m滤幅膜过烤滤，绿即得邪，进惭样1厅0霜µ徐L。莲色谱蔑图见插Fi涝g.呢4伪图4脾项菟冶丝子战60院%乙酒醇提泥取液扎的H嫌PL甩C图甘（3牛55贺nm丑）饰3.姨3五葡子衍织宗方象供试多品溶旬液制领备辣3.默3.草1五爬子衍奔宗方传提取密方法情考察澡（1芳）提砌取溶泛剂的粱选择肝按处搬方比晶例精窑密称叙取菟秋丝子贤0.总4g钩、咽枸杞已子0程.4向g厉、学覆盆灭子0岭.2督g终、崖车钱志子0厕.1童g和砌五味爷子0端.0市5g何，以腐上药比材均鲁为细才粉（晨过4新0目与筛）覆4份聋，分假别精考密加码入甲堂醇蛮、竞80阴%乙溜醇钥、俘60恶%乙偏醇决、傍50鸽%乙穿醇和判40卖%乙迎醇各隙50竿mL星，称爱重，愤加热户回流味提取西2h理，冷歌却至即室温扇，补浴重，灰摇匀秃，以闭0.较45默µ颤m滤素膜过倒滤，能各进镇样1瓶0绝µ漫L，青求算沉溶剂伙提取待的含需量。才结果结见表悦Ta朴b.瞎4，誉表明第60坦%乙副醇对饱五子佣衍宗歇方中蒙金丝百桃苷幻的提疤取率水最高览。品表4研邮五子惑衍宗滤方提恨取溶荷剂的挪比较与S咬ol萍ve框nt歌Me丘OH拔50券%E滋tO含H闭60给%E充tO跑H敏80偷%E晃tO者H灿sa液mp谎le婆w约ei的gh围t总（g读）置1.虽16恶3光1.现16蒙6避1.脆16坐2轮1.理16名6梅co句nt淡en采t尊（％弟）镜0.弓11黑3脊0.衫10环6残0.稿11误5钢0.驰11晚3季（2型）提拔取时泰间段按王处方多比例扎精密冠称取品五子尚衍宗村方1泊.1放5g权，加或入5徐0m喇L朝60这％乙女醇，蒸称重阔，加把热回郊流，喜分别溪提取夸1睬、贺2遍、吴3贺、院4h据，冷悠却至构室温况，补朵重，夜摇匀告，以桂0.呢45锹µ字m滤尼膜过耻滤，种各进晓样1原0醋µ痛L，壶求算劈溶剂解提取再的含斯量。布结果融见表课Ta宜b.参5，钻实验群数据浅表明窃热回码流提瞧取2触.0猪h已豪经将恐五子徐衍宗易方中吧的金撇丝桃覆苷提唤取完灵全。庙表5藏林怕五子或衍宗挺方提户取时盗间的梦比较吹Ti鹿me卖1h逢2h探3h昌4h陕sa杰mp院le证w手ei哈gh相t（帝g）彼1.乖16什1胳1.楚15救7勾1.议16纱1.馅16蔬2桑C具on奉te时nt劝(％坐)竿0.居11骄7小0.驾11封9厅0.光11消8拒0.疼11把5铲（3锐）溶原剂用面量比偷较语按处骂方比赚例精质密称孟取五耗子衍众宗方让1.鼠15叮g，拘分别昨加入勺35活、圈50律、鉴60受mL徒6垫0％代乙醇迅，称舌重，轻加热旋回流片提取吉2h法，冷妈却至柿室温爪，补贪重，服摇匀疫，以晓0.锅45读µ候m滤芳膜过稍滤，垫各进碑样1绣0衫µ援L，卸求算常溶剂卵提取罩的含稻量。嫂结果么见表岸Ta微b.拘6。吐其中没50栗mL嚷溶剂涂即能侨将复笔方中餐的金珠丝桃俗苷提乐取完艘全。容表6朱冒五子婚衍宗服方提潜取溶邀剂体俘积的赔比较柴Vo覆lu默me居（偏mL搭)恶35刘mL谣50提ml爬60换mL朽sa光mp应le评w询ei拘gh乘t尿（g推）臣1.麻16咏4乘1.蹈16裕1姥1.脖15帖9勺Co关nt割en临t沫（％游）古0.宏11毁2搁0.匠11瓶4隔0.符11缝4属3.池3.三2五联子衍哈宗方身供试妙品制惊备谅根据亡上述绸条件过选择木，确定定五枣子衍缠宗方锻中金角丝桃娱苷的沈提取知方法蛮为：刘按处女方比说例精摆密称嘱取菟墓丝子货0.婚4g线、乖枸杞稠子0雨.4飘g蜡、桌覆盆榜子0惠.2摆g蒸、滤车钱蓝子0枝.1晓g和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