精液常规分析的步骤及注意事项

精液常规分析的步骤及注意事项本文档共37页；当前第1页；编辑于星期二\18点10分简介┌精子（5%）精液组成┤┌精囊腺液（60%）－凝固因子、果糖└精浆（95%）├前列腺液（20%）－液化因子├尿道球腺液（3%）└睾丸液、附睾液

——精子精液的两个主要量化指标：1．精子总数，反应睾丸的生精状况和睾丸后管道系统的通畅程度。2．体积反应腺体的分泌能力。本文档共37页；当前第2页；编辑于星期二\18点10分精液质量分析的主要影响因素1．样本收集是否完整。射精时前面富含精子部分的精液避免丢失，后面部分精液主要是由精囊腺的分泌物构成，所以，前面部分精液的丢失比后半部分丢失对精液分析结果影响更大。2．在射精时，附属腺体分泌物冲淡含高度浓度精子的附睾液。精子浓度不能直接反应睾丸的精子产量，因为还受其他生殖器官功能的影响，而精子密度对于年轻人和老年人没有区别，但精子总数（精子密度X精液体积）可能存在差异，至少人群中有部分人存在随着年龄增大而精液体积和精子下降的现象。3．精子的活力和染色体不受禁欲时间长短的影响，除非附睾功能受到影响。由于前次射精不彻底，附睾没完全排空，有部分精子残存，精子老化会影响精子质量，其程度很难确定，所以也很少做考虑。4．睾丸体积的大小不仅能反应睾丸的生精水平还影响到每次射精的精子总数和精子形态。本文档共37页；当前第3页；编辑于星期二\18点10分结论1、精液质量的巨大生理变化是上述所列多种因素的反映，因而同精液相关的所有分析都要精确全面。2、仅凭一次精液检查不能确定精子质量。3、检查两到三次有助于获得可靠的基本数据。（WHO5版精液分析要求）4、虽然对整个精液样本进行了分析，但其结果并不能确定那些少数到达受精部位精子的受精能力，精液分析能为临床提供有关患者个人状况的一些重要信息。5、样本的采集和检查都按照规范化程序进行，其结果才有价值。本文档共37页；当前第4页；编辑于星期二\18点10分基本步骤1、将精液样本容器放置在温控台或水浴箱里（37℃）等待液化。2、在30到60分钟期间，评估精液的液化情况和物理性状。3、测量精液体积。4、检测精液的pH值。5、准备湿片观察显微镜下精子的活动情况，评估精子活动率。6、制作精液涂片评估精子形态。7、对精液进行稀释后做精子密度评估。8、对精子进行计数。9、如需检测精浆生化指标则对精液进行离心。本文档共37页；当前第5页；编辑于星期二\18点10分标本的采集采集注意事项1、手淫法采集标本，精液射入一清洁广口的塑料或玻璃容器内。2、减少外界温度和样本收集到检测期间过长对精液检测结果的影响3、标本接收要求：禁欲2-7天，如需复查每次禁欲的天数应尽可能恒定。标本要完整，如果不完整，需在禁欲2-7天后重新采集标本检测。标本采集到检测不能超过3小时。4、采集容器上标记受检者姓名、编码、采集日期和时间。本文档共37页；当前第6页；编辑于星期二\18点10分标本的采集家中采集样本1、对于除了在自家以外的环境下取精的确困难者，可以在家中进行样本采集。2、给患者以明确的书面或口头形式的有关精液样本的采集和转运指导说明。3、应强调采集样本必须完整，如有部分丢失应在报告中加以说明。4、对已标上姓名和身份证号的容器进行称重，然后交给患者。5、患者应记录采集的时间，并在一小时内送至实验室。6、在送至实验室途中样本应保持在20～37℃的环境中。7、报告中应注明样本采集的地点是在家还是在其他实验室以外的地方。8、一定不可使用普通避孕套收集精液，因为它们一般含有干扰精子活力的成分。本文档共37页；当前第7页；编辑于星期二\18点10分

采集容器的要求标本的采集

选择数份精子浓度高和活力好的精液标本，将每份标本的一半放在已知无毒性的容器内（对照组），另一半放在待检测的容器内，在4小时内、室温或者37℃下每间隔1小时重复评估1次精子活力。如果每个时间点在对照组与测试组之间没有差异（配对t检验，P>0.05)，即可认为待检测的容器对精子是无毒性的，达到精液采集的要求。采集容器需对精子无毒性采集容器保持在20—37℃环境中，避免精子射入容器后，大的温度变化对精子产生影响。本文档共37页；当前第8页；编辑于星期二\18点10分

标本保温采集后的标本需放在37℃保温标本的保温本文档共37页；当前第9页；编辑于星期二\18点10分

标本的液化

肉眼观察

精液送检15分钟后观察其液化状态，看其是否变得均质和稀薄，若未液化，则在60分钟之内继续观察。若标本60分钟后不液化，则需对标本进行处理并作记录。

观察液化方法：肉眼观察：标本变得均质和稀薄，不见异质性混合团块。显微镜观察：显微镜镜下观察精子不动。液化期间，置37℃孵箱中，在二维遥控器上，不断地轻轻混匀样本容器，有助于产生均质的精液标本。本文档共37页；当前第10页；编辑于星期二\18点10分精液液化延迟的处理方法1、用带有规格为18或19号注射针头的注射器对精液进行反复抽吸6～10次。肉眼观察本文档共37页；当前第11页；编辑于星期二\18点10分

2、加入与精液体积相等的菠萝蛋白酶液或者生理培养液(如杜氏磷酸盐缓冲液）即对标本进行1：2（1+1）稀释。

精液液化延迟的处理方法肉眼观察注释：这些处理可能会影响到精浆的生化性质，精子活力以及精子外形，如有使用必须记录。用菠萝蛋白酶以1+1（1:2）的方式稀释精液必须在评估了精子浓度后以其结果作为说明。本文档共37页；当前第12页；编辑于星期二\18点10分1、精液液化后，采用塑料吸液管吸取精液，评估标本的黏稠度，使精液借助重力滴下，观察其拉丝的长度。正常精液为液滴不间断的从吸液管口滴下。2、如果黏稠度异常，液滴会形成超过2cm的拉丝。3、不完全液化标本呈均质黏性，且黏稠度不随时间而变化。

精液黏稠度的评估方法肉眼观察

本文档共37页；当前第13页；编辑于星期二\18点10分

将一玻璃棒插入标本，提起玻璃棒，观察拉丝长度。精液黏稠度的评估方法肉眼观察本文档共37页；当前第14页；编辑于星期二\18点10分

精液外观肉眼观察肉眼观察

正常液化精液标本呈现均质性，灰白色的外观。

如果精子密度非常低，精液可显得透明一些。

如有红细胞，精液可呈红褐色；病人如有黄疸或服用某些维生素，精液可呈黄色。本文档共37页；当前第15页；编辑于星期二\18点10分

空样本容器可能具有不同的重量，所以每一容器必须提前分别称重。

将空白采集管放置电子天平上，按下“去皮键”，则此时重量显示为零。肉眼观察

精液体积精确测量精液体积是任何精液评价的基础本文档共37页；当前第16页；编辑于星期二\18点10分

精液体积测量肉眼观察

精液体积

将盛有精液的采集管放入已去皮的电子天平上，此时显示的为精液标本的重量。

由重量计算出精液体积（精确到0.1ml),假设精液的密度为1g/ml。

不推荐将精液从移液管吸到量杯中测量体积，因为不能完全回收精液，会低估精液体积。本文档共37页；当前第17页；编辑于星期二\18点10分

精液pH

肉眼观察1、精液液化后要在0.5-1h内检测，因为pH值会受射精后精液中CO2逸出的影响。2、选用的pH试纸。3、充分混匀精液标本。4、在pH试纸上均匀地涂上一滴精液。5、等待浸渍区的颜色变得均匀（<30秒）。6、与标准比色卡比对，读数。注：pH试纸的准确性应该按照已知标准进行检测。对于粘稠的样本，可取小份样本用专为测量粘稠溶液设计的pH量尺进行检测。本文档共37页；当前第18页；编辑于星期二\18点10分

标本的混匀

标本混匀

可通过向样本中插入一个宽孔的一次性无菌塑料吸液管，抽吸10次来达到混匀标本的目的。

也可上下颠倒混匀10次，注意力度要轻柔。

或采用专用仪器混匀。

不可用高速涡旋器，以免对精子造成损伤。

如果标本未混匀，则两次测量结果将出现明显偏差。本文档共37页；当前第19页；编辑于星期二\18点10分标本混匀上下颠倒，轻轻的混匀10次本文档共37页；当前第20页；编辑于星期二\18点10分

标本的取样

充分混匀后立即取样，吸取5μl标本取样本文档共37页；当前第21页；编辑于星期二\18点10分标本滴加

标本的滴加1、移液器吸取约5μl标本置于点样区域（图A）2、轻轻地从标本上方压下盖玻片，使盖玻片的边缘刚好盖住标本（图B和C）。滑动盖玻片至图D所示的位置。这样可以消除计数区域内的气泡。BACD本文档共37页；当前第22页；编辑于星期二\18点10分

标本镜下初检镜下初检1、观察精子是否分布均匀，有无气泡。

有气泡——重滴2、观察精子是否聚集或凝集。

聚集或凝集——记录3、观察有无精子。

无精子——离心镜检4、观察浓度是否适宜。

过高——稀释100倍镜下本文档共37页；当前第23页；编辑于星期二\18点10分无精子症隐匿精子症和可疑无精子症

本文档共37页；当前第24页；编辑于星期二\18点10分无精子症1、充分混匀精液标本。2、取1ml精液，以3000g离心15分钟。3、弃去大部分上清液，在剩下约50ul精浆里重新混匀精子沉淀物。4、在两张玻片上，各加入10ul沉淀团悬液，覆盖22mm×22mm盖玻片。5、200倍镜下Z字形观察玻片。x轴y轴隐匿精子症任一重复样本观察到精子无精子症两张重复玻片中均未观察到精子本文档共37页；当前第25页；编辑于星期二\18点10分

离心过程中作用于精子的力（相对离心力，RCF）取决于旋转速度（N，每分钟的转数，r.p.m)和从转子中心到被力测量点（通常是离心管底部）之间的距离（半径，R，cm).RCF:1.118×10-5×R×N2无精子症离心机

15ml离心管的台式离心机一般达不到3000g，可使用配有离心管的速度更高的离心机。本文档共37页；当前第26页；编辑于星期二\18点10分标本稀释标本稀释1、3000g离心10min取精浆做稀释液或者用生理培养液做稀释液。2、使用正向置换式移液器将适量的固定液加入两个稀释小瓶。3、充分混匀精液标本。4、混匀后用移液器立即吸出适量的精液标本。5、将精液移到固定液里，抽吸、吹打固定液。6、再次充分混匀精液。仪器检测浓度超过100×106/ml，建议稀释本文档共37页；当前第27页；编辑于星期二\18点10分标本镜下初检如果标本浓度适中，计数池内精液不再漂移，则转换成20倍物镜开始分析。标本检测本文档共37页；当前第28页；编辑于星期二\18点10分标本检测智能化仪器检测1、提前10分钟开启仪器，待恒温加热板加热至指定温度。2、将滴加的计数板放置仪器中，选择检测模式，仪器自动进行检测。检测注意事项：1、一份标本检测两次。2、每份标本满足200条精子检测需求。本文档共37页；当前第29页；编辑于星期二\18点10分标本检测精子活力分类·运动活跃型（PR）：精子运动活跃、线性运动或者在较大的范围内运动（不考虑运动的速度）。·非运动活跃型(NP)：精子运动但不活跃，如精子在较小的范围内运动，精子头部轻微移位或尽有鞭毛摆动。·完全不动型（IM）：精子完全不动。本文档共37页；当前第30页；编辑于星期二\18点10分标本检测每次计数>200个精子，计数两次，取均值。差异大时，需重新计数。两次精子计数可接受的误差本文档共37页；当前第31页；编辑于星期二\18点10分相差环的调节

仪器维护与保养对中调节：①用对中望远镜换下目镜；②转动对中望远镜的上部，调节聚焦，让亮环（环形槽）和暗处在视野中清晰可见；③转动两个对中螺丝，让亮环和暗环同心重叠，如图（c）；④卸下对中望远镜，重新装上目镜，开始相衬观察；本文档共37页；当前第32页；编辑于星期二\18点10分

显微镜灯的保养

仪器维护与保养光线强度耐用度照明效果节能卤素灯在光线黑暗的情况下，偏黄的卤素灯亮起来没那么显眼，最大输出1200流明，相当于1200根蜡烛平均寿命500小时光线均匀，滤色片一般卤素大灯55wLED灯光谱几乎全部集中于可见光断，发光率可达80~90%，输出6200流明，相当于6200根蜡烛寿命可长达100000小时光线误差小，无需滤光能耗仅为卤素灯1/20本文档共37页；当前第33页；编辑于星期二\18点10分仪器维护与保养

显微镜灯的保养OLYMPUSNIKONMOTICCX23CX41BX43BX53E200CI全系列灯泡类型LED卤素灯6V30WLED卤素灯12V100WLEDLEDLED灯泡注意事项：1、确认光源亮度处于最小位置，打开显微镜灯光，预热5分钟再开始使用。2