作文模版大无标记成改

MaAThesisSubmittedToGansuAgriculturalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsMasterDegreeSupervisor:Prof.ZhangLiFacultyofAnimalScience&TechnologyGansuAgriculturalUniversity,Lanzhou,P.RCommencementinMay, 不同繁殖性能绵羊BMPR-IBmRNA英文缩 英文全 中文名

Marker-assistedselectionPolymorphicinformationcontenttativetraitlociRestrictedfragmentlengthpolymoephismSodiumdodecylsulfateSingleNucleotidePolymorphismsFolliclestimulatinghormonePolymerasechainreactionEthylenediaminetetraaceticacid,disodiumsaltStatisticalpackageforthesocialscienceGenerallinearmodelBasepairDeoxyribonucleicacidRibonucleicacidMillimolarconcentrationRevolutionsperminuteAgaroseGelElectrophoresisNationalCenterofBio-informationLuteinizinghormoneBonemorphogeneticproteinreceptorsSinglestrandconformationpolymorphismAdisintegrinandmetalloproteasewiththrospondinTrisBoricacidEDTAAcidcitratedextrosePhosphateBuffered

标记辅助选择多态信息含量数量性状位点单核苷酸多态促素促Tris硼酸电泳缓冲液TE 子标记技术广泛地应用于绵羊的初期筛选，大大提高了选择的效率和准确和ADAMTS-1遗传多态性进行分析，并利用生物信息学技术对绵羊的产羔数进行相关联分析；运用实时荧光定量PCR技术对ADAMTS-1在绵羊不同组织进行表达量分析，对于影响绵羊繁殖力的候选ADAMTS-1在转录绵羊BMPR-IB编码区864位点多态性及产羔数相关分试验羊品种检测到三种型AA、AB、BB，该编码区第846位点发生T>C的突变。湖羊母羊以及小尾寒羊母羊的优势型均为AA型，而羊母羊和高山细毛羊母羊AB型频率略高于AA型四种绵羊的优势等羊母羊和高山细毛羊母羊信息含量处于中度多态（0.25<PIC<0.5）。显羊中差异呈现显著（P<0.05）。BMPR-IB编码区第846位点突变在不同繁绵羊BMPR-IB3′部分非编码区多态性及产羔数相关分扩增发现，非编码区511位点杂合C>T，在CG型中，非编码区544位点杂合C>G，发现三种型CC、CT、CG。在高山细毛羊母羊群体中，CT型对于产羔数有显著影响（p值），而在其他两个群体中不同型对于产羔数影响不显著（p值），而CT型对绵羊ADAMTS-1mRNA在不同组织间差异表达及第五外显子多态性分析根据绵羊8个组织进行表达量分析可知所有群体的表达量显著高于其垂体、下丘脑。小尾寒羊多胎母羊的表达量是羊双胎母羊的1.54倍、羊单胎母羊的2.61倍。通过对ADAMTS-1第五外显子分析可知，在编AB、AC，显著性分析可知三种型均对产羔数不显著。所有绵羊群体χ2检验表明均处于Hardy-weinberg平衡状态，PIC值属于低度中度多态有重要的影响，初步认定是羊和小尾寒羊的多羔主效。绵羊；BMPR-IB；ADAMTS-1；产羔数；PCR-SSCPLittersizeisthemostimportanteconomictraitsinsheep,butthelittersizetraitheritabilityislowthresholdtraits,thetraditionalmethodsimprovementprogresshasbeenslow.Atpresent,withtheemergenceofnewbiotechnology,especiallymolecularmarkertechnologyiswidelyusedintheinitialscreeningofsheep,greatlyimprovingtheefficiencyandaccuracyofselection.ThisexperimentusingPCR-SSCPanddirectsequencingofBMPR-IBgeneandADAMTS-1genegeneticpolymorphismysisoftheeffectoffecundityofsheep,Andysisoflittersizeinsheepwereassociatedwithbiologicalinformationysis,TheexpressionofADAMTS-1geneindifferenttissuesofsheepwasyzedbyreal-timefluorescenttativetechnique,andtheeffectofADAMTS-1geneonthetranscriptionlevelwasverified.Theresearchaimedtoprovidesomereferenceforimprovingthesheepfecundity.Theresultsareas1ysisofPolymorphismat864LocusofBMPR-IBGeneCDSRegionandRelationshipwithLitterSizeinSheepTheresultsshowedthattherewerethreekindsofgenotypeAA,ABandBBintestedsheepbreeds,andT>Cmutationoccurredincodingregionof846.AAwasthedominantgenotypeinSmallTailHanewesandHuewes,whileABwasthedominantgenotypeinMongoliaewesandGansualpinemerinoews.Awasthedominantallelesinallfoursheepsamples.Theχ2andG2valuesofSmallTailHanewes,GansualpinemerinoewesandHuewesdidnotreachedthesignificantlevel(p>0.05),buttheχ2andG2valuesofMongoliaewesreachedthesignificantlevel(P<0.05),whichindicatedthatthreeotherewesallfittedwithHardy-WeinbergequilibriumexceptMongoliaewes.TheobservedvalueFoffoursheepbreedsinBMPR-IBgenewereinthe95%confidenceinterval,andclosertotheon-line.AccordingtothePICamongdifferentbreedswecouldgetthatSmallTailHansheepandHusheepbelongtolowpolymorphism(PIC<0.25),whileMongoliasheepandGansualpinemerinosheepbelongtomoderatepolymorphism(0.25<PIC<0.5).SignificanttestshowedthatGansualpinemerinosheephadsignificantdifferenceswithSmallTailHansheepHusheep,andMongoliasheephadsignificantdifferenceswiththeotherthreesheepbreeds(P<0.05).Themutationoccurredin846siteinBMPR-IBgenecodingregiondistributeddifferentlyinewegroupswithdifferentfecundity,whichmeantthatthislocuscouldbeconsideredasapotentialmolecularmarkerinsheep.2ysisofPolymorphismatPartial3′UTRBMPR-IBGeneandItsRelationshipwithLitterSizeinSheepBreeds341sheepinthreesheepbreedstotal,usingpolymorphismdetectionin3sheep'partofthenonencodingregionwasamplified,511heterozygousC>TinCGgenotype,544heterozygousnonencodingregionofC>G,foundthreegenotypesofCC,CT,CG.InAlpineMerinoewesgroup,CTgenotypehasasignificanteffectonlittersize,anddifferentgenotypesintheothertwogroupsinthelittersizewasnotaffected,butthegenotypeofCTinsheeplambingmarkerneedsfurthervalidation.DifferentialExpressionofSheepADAMTS-1GeneinDifferentTissuesandysisofExon5PolymorphoismTheysisofexpressiontyof8organsindicatedthattheexpressionofovaryinallgroupswassignificantlyhigherthanotherorgans,andtheexpressionleveloftherestorgansrankedfromhightolowwaskidney,heart,liver,lung,spleen,pituitary,andhypothalamus.TheexperimentshowedthattheovaryexpressionofADAMTS-1geneinSmallTailHanewes(multiple-births)was1.54and2.61timesofthatinMongoliaewes(twinbirths)andMongoliaewes(singlebirth)respectively.BasedontheADAMTS-1exon5geneysis,wefoundthatC1506TandG1509AappearedintheCDSregion,whichbothbelongedtothesynonymousmutation.ThreebandswerenamedasAA,ABandAC,andthesignificantysisindicatedthatthesethreegenotypeswerenotsignificantonlittersize.Theresultsofχ2fitnesstestshowedthatallsheeppopulationswereinHardy-weinbergequilibriumstate,andPICvaluebelongedtointermediateandmoderatepolymorphism(0.25<PIC<0.5).TheresultsofthisexperimentindicatedthatADAMTS-1geneyedanimportantroleonthelittersizeofMongoliaewesandSmallTailHanewes,whichwaspreliminarilyconsideredastheprolificacymajorgeneofthetwo.:sheep；BMPR-IB；ADAMTS-1；Littlersize；PCR-SSCP；Q-摘 第一章文献综 遗 营 ......................................................................................................................... DNA标 RFLP技 PCR-SSCP技 RAPD技 BMPR-IB研究进 ADAMTS-1研究进 相对定量分析（Relativefication, 利用内参进行标准化处 相对定量结果分析方 第二章绵羊BMPR-IBCDS区864位点多态性及其产羔数相关性分 第三章绵羊BMPR-IB部分3端非编码区多态性及产羔数相关分 第四章绵羊ADAMTS-1在不同组织间差异表达及第五外显子多态性分 致 作者简 择出各类优质遗传资源的绵羊品种。我国的绵羊存栏率约占世界存栏量的单羔，数绵羊品种的绵羊可四季、一胎产双羔或多羔。绵羊的繁殖性能是决定绵羊业生产效益的重要因一繁殖性能的高低直为畜牧业生产重要经济性状之一对于家畜来说其繁殖力的高低直接影响生新技术直接定位动物重要的经济性状分子标记以及相关联候选得到广泛的羊BMPR-IB和ADAMTS-1多态性位点之间的相关性，同时运用实时荧光定量分析法对ADAMTS-1在不同绵羊品种组织间的mRNA表达量进品种是日照季节且产单羔绵羊繁殖力较低严重制约我国绵羊生产年和高繁殖力是绵羊和持续发展的基础因此如何有效提高绵羊繁殖Booroola[3]，上述品种都具备常年且一胎多羔的优良性状。不同的绵羊品种表现出的繁殖力也不尽相同我国北方牧区的绵羊品饲养水平的高低直接影响绵羊的繁殖力增加母羊的率的措施是对配种前的母羊进行短期优饲。维生素的缺乏也会导致率的下降。母羊的产羔随着的增加而增加初产母羊的平均产羔数显著低于经产母羊，3-65-67岁种的遗传多样性，利用遗传多样性规律有利于物变异和一系列相关应用。DNA序列多态性，由于其数据不仅稳定且信息量巨大，不受环境等外界因素干DNA标记。：与否及在间表达的差异可以反映出群体的遗传状况蛋白质的标记主要包括两类蛋白的标记和同工酶酶标记法。利用同工酶在组中对应座的具置，同工酶标记可以划分为：等位同工酶和复等位同工酶。：DNADNA分子标记是一类利用物种自身核酸序列为基础的标记技术，且碱分子标记技术已经被广泛应用于生物技术的方方面面[6-8]。根据技术的不同DNA标记可以分为以下三类[9-11]Southern杂交技术为分子标记；第二代，以PCR技术为的分子标记；第三代，是利RFLP根据这些片段反映出组中不同酶切位点分布的状况，此技术最早是由Grodzicker等[12]于1974年建立的，RELP标记具有稳定性好、等位共显性、一次就可以标记处大量的位点等优势。RELPDNA的推广[13]PCRRELPPCR-SSCP1984年Noumi[14等大肠杆菌野生型和突变型1-TPase利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电（SC发现野生型与突变型的1-TPase在凝胶电泳中的迁移率有差异这一研究结果为变异的检测提供了理论基础和技术支持而后在1989年Orita等[5,16人利用这项技术进行多态性的检测并且SSCPPCR技术的普及和发展，Hoshino等[171992年对电泳后的凝胶染色进行了改良，提出利用银染法可以快速便捷的判定P-SSP技术建立并且日趋纯熟。P-SSCPA或者RNA80PR技术进行的第三代分子标记技术，其原理是利用软件设计某一物种组DNAPR设备进行目的片段特异性扩增，而后用扩增的目的片段在高温（9℃）进行变性处理，使得之前的DNA双链结构变成单链构象，变性后的两条单链结构因其碱基序列有一定的差DNA中碱基序列出现变异（碱基的替换、缺失或者插入）从而导致在泳道中的迁移率有一定差异从而检测出不同相同片段的遗传多态性。PCR-SSCPDNA纯度要求不高等优点，但该检测手法只是一种较为初步的检测，判型后还需要进一步。若产物存在污染则会出现假阳性，导致判型。由于大样本直接费用过于昂贵，而此技术对于大样本的检测成本较低，且在前的初次筛查有一定的辅助意义，因此可避免盲目导致的经费浪费[18,19]。RAPDRAPDWnliamsWelsh1990DNA多态检测技术[20,21]。RAPD检测DNA多态性的独特方式很快渗透于定位、遗传[22]RAPD基本原理是利用一系列随机排列的寡聚核酸（8～10个碱基）为引物，再通过PCR对靶DNA，显影。由于引物结合组上的特定位点组上被结合的特定区域如果发生，PCR引物退火温度低且允许一定的程序错配，RAPD引物的通用性较好可以适用于不同生物组分析每次反应只需要一个引物就可以扩增出许DNA（4）RAPD技术成本低且引物通用性好，可以在不同物种间进行检测[24]RAPD技术的不足：（1）RAPDDNA模板浓度、Mg2+浓度、实验重复性差和稳定性不高[25]；（2）RAPD分子标记通常可以识别显性标记，对于杂合位点识别能力较差[26]，使得该技术在定位或者连锁图谱的绘制上的准确性下降；（3）由于条带迁移的速度问题，不同果一个在同样的位置出现条带这可能是多个大小一致的条带所造RAPD技术的应用造成多方面的制约[27]。绵羊BMPR-IB和ADAMTS-1研究概BMPR-IB研究进骨形态受体蛋白IB作为转移生长因子β亚基(TGF-Β)受体的成员之一，是近年来研究较为热门的绵羊多羔主效。BMPR-IB在绵羊体内垂体、、耳、骨骼、、下丘脑、等组织中都具有较高的表达，同时参与GDF-5(Growthdifferentiationfactor-5)、BMP-2(Bonemorphogeneticprotein-2)、BMP-4(Bonemorphogeneticprotein-4)、BMP-6(Bonemorphogeneticprotein-6)及BMP-15(Bonemorphogeneticprotein-15)的信号转导过程[28]BMPR-1BCDS1509bp502个氨基酸残基，并被定位于绵羊第6号的4q22-23区间。BMPR-IB在不同物种间序列差异较小氨基酸序列高度保守，编码一个TGF-β亚基，是调节细胞分化和生长的一类多功，能蛋白质，并且存在多种细胞中。大量研究表明BMPR-IB被确定为绵羊高繁殖效，新西兰和法国学者发现Booroola绵羊BMPR-IB在编码区发生A>G突变使氨基酸子发生改变，导致编码的氨基酸由谷氨酰胺变成精氨酸（Q249R），BMPR-IB的胞内激酶信号区中，致BMPR-IB蛋白受体部分失活，最终导致其功能无法正常进行[29-31]。此次突变FecBBooroola绵羊拥有较高的繁殖力。在这一发现之后FecB在其他绵羊品种都有证实的Garole羊群[32]。2003FecB突变[33]。杨华等的研究结果可知FecB突变同样也出现美利奴羊，对于羊群的产羔数有显著地影响[34]。小鼠敲除BMPR-IB则会导致小鼠不育，可能是因为缺失型小鼠的，发现缺失BMPR-IB的小鼠会出现生产不规律的周期和假孕现象，同时还观察到细胞周围的颗粒细胞数目明显少于野生型的小鼠-IB缺失突变导致小鼠颗粒细胞分泌芳香化酶能力显著减弱，而在动物合成雌激键的作用，中此类酶缺失是导致机体不孕的原因之一。的影响较为明显其功能主要表现在对孕酮分泌起到抑制作用或者对颗粒分化的调控。BMPR-IB是影响动物繁殖力的主效因子，对于深入研究骨形态发生蛋白及受体在提高动物育种的效率和降低育种的成本有着重要促进意ADAMTS-1研究进哺乳动物的解聚蛋白样金属蛋白酶ADAMTS共有十九个蛋白水解酶构成，参与了多种病理与生理活动的过程，例如外基质的组装和降解、生成、血管生成、止血过程、关节炎和等[37]。近年来的相关研究发现，各类均与ADAMTS-1有着紧密的联系ADAMTS-1可以影响肿瘤转移和增生。在[38,39]、结肠癌[40]、肺癌[39]和软骨癌[41]等一系列中都有ADAMTS-1的发现。ADADMTS成员最早是作为小鼠炎症的上调，其没有跨膜结构域并且存在I型TSP基序[42,43]。ADAMTS-1作为成员之一，是在小鼠结肠26细胞中克隆得到的cDNA序列[44]ADAMTS-1可以分泌到细ECM蛋白调节[45,46]。ADAMTS-1通过C-末端金属蛋白酶亚结构与ECM蛋白结合，降解蛋白聚糖、蛋白多糖和多功能蛋白聚糖[47]，ADAMTS-1ADAMTS-1究中[49]，例如动脉硬化[50]，心肌梗塞[38]，脑缺血中[51]ADAMTS-1对上述疾病存在着一定的关联。ADAMTS-1对孕酮的合成有一定的影响，并且可以合成孕酮，其的表达与LH/HCG的合成有很大的关系，与此同时在颗粒细胞的表达中直接影响囊状的生成ADAMTS-1在雌性动物的卵丘细胞与细胞中均有表达此对于细胞的能育性有一定影响[52]Richards等[47]以敲除ADAMTS-1的小鼠为试验样本，结果表明被敲除ADAMTS-1的雌鼠与对照组相比，敲除ADAMTS-1的雌鼠官畸形进而表现为繁育能力低下，其壁变厚，且存在许多旋绕；内出现大量的异常发育的包囊；较对照组成熟数量下降明显，导致不能，注射hCG与PMSG后仍不孕。此类现象只发生在雌鼠中，在公鼠并不影响其繁殖性能[53]ADAMTS-1基因在雌性动物的调节过程中起着重要的作用。近年来，在国内鲍建军等[54]以小尾寒羊、洼地绵羊、羊和湖羊为试验对象，通过ADAMTS-1的外显子SNP位点与产羔性状进行分析研究；孙振梅等[55]和张琼娣[56]等以黔北麻羊、黑和半细毛羊为试验对象构建DNA样本池通过后续生物信息学分析可知，SNPs位点的突变对的RNAADAMTS-1可能会影响产羔性状。实时荧光定量PCR荧光定量PCR技术是PE公司于1995年研发成功的一种具有性意Q-PCRPCR时的一类技术，再利用每个样品的Ct值对模板的相对定量或者利用标准曲CtPCRPCRCtQPCRPCRPCR扩增的产物，把已知Q-PCR可以得到不同Ct值可以绘制出标准曲线。如果在一个实验中不到的Ct值带入系统生成出标准曲线中用以计算未知浓度的样品起始模板量、QPCR相对定量分析法广泛应用于拷贝数的变化检测中以及目的的mRNA表达水平的检测领域中。而绝对定量法应用于微生物和等微生物的定、内参是指一类维持基本机能在不同样本中的拷贝数基本保持不变的一类核酸序列常的内参有β-atinGPDACTSDH28sRNA1、18sRNA等。反转录试剂盒cDNA合成率的差异等，如果不进行统一标准化处理得到的数据样本的相对浓度目 目的以及内参在不同批次的检测过程中出现灵敏度不一致出现这种的原因可能与探针复性、淬灭系数和荧光能量转移（FET）效率的差异有一定的关系。一般选择典型的阳性样本（内参和目的均呈现阳性这类样本一般具有 过处理正常组织起始时间点等特点校正样本归一化处理的相对浓度是利用每个样本的目的和内参的比值除以校正样本同一目的与内参的比值[60。：内 浓内 浓内 浓

待测（待测样本）待测（校正样本2-△△CtReal-timePCR最为常见的一类分析方法。此类方法的特点量），5PCR扩增反应过程中保证稳定不变。目的的Ct值ΔCt(sample)=Ct(target,sample)－Ct(reference,ΔCt(calibrator)=Ct(target,calibrator)－Ct(reference,ΔCtΔCt=2－△△t

experimentalgroup：实验组；controlgroup：对照组；Ct：目标扩增产物达第二章绵羊BMPR-IBCDS区864位点多态性及所需的羊由省永昌县养殖示范户提供小尾寒羊由陇西县菜子镇旺旺母羊养殖农民专业合作社提供，高山细毛羊由张掖市肃南县畜牧站提供，湖羊由武威三洋农牧公司提供羊只均为2~3岁产胎胎次2~3胎的成年经产母羊为试验羊，经颈静脉血样后肝素钠抗凝，血样于-20°C保存备用。TapDNA聚合酶、DL2000LadderMarker、DL750LadderMarker、Biowest烷基硫酸钠（SDS）、N,N,N',N'-四甲基乙二胺（TEMED）、Tris碱二水乙二胺苏州金唯智生物科技合成。100mlACD7:1pH8.0100mL高压灭菌备用。（3）细胞裂解液：蔗糖11.01g，MgCl20.102g，1mol/LTris-HCl1mL，Triton1mL100mL。0.294g，Na2EDTA·2H2O0.375g，SDS1g，1mol/LTris-HCl1mL100mL。1绵羊组DNA的提绵羊血液组DNA提取方法参照见附录PCR本试验中所用引物均利用Olig6.0和Primer5.0引物设计软件相结合而设根据已经公布的绵羊BMPR-IBmRNA序列（GenBank登录号: 列见表2-1。表2-1BMPR-IB部分多态位点引Table2-1PolymorphismLociPrimerofBMPR-IB引 引物序列

864位镁离子的浓度等。PCR反应的优化是为了获得最佳扩增效率的条件，而且还要PCRDNA以及引物质量的下，维持其他条件不变，仅改变其中任意一个条件，将该PCRPCR25µL2-2PCRTable2-2PCRamplification试剂名 剂dd 10×PCRLoading Primer Taq 模板 共 PCR2-3PCRTable2-2TheBestamplifiedreactionprogramof数PCR2.2.3.1。1×TBE电泳缓冲液。7uL的变性剂，3uLPCRPCR管中混匀。混匀后的10°C恒温箱中，140V，18mA，3W，4固定结束后，加入适量的银染液，在摇缓慢摇动7min。再用蒸馏水漂2-4Table2-4FormulofPolyacrylamide30%液10%210根据聚丙烯酰胺凝胶电泳结果，人工判断型PCRPCR利用PopGene32软件计算等位频率、遗传杂合度（He）和有效等位基信息含量检测利用PIC软件检测；对于后的结果利用MEGA（version5.0）软件分析。采用SPSS19.0软件分析绵羊产胎数与型之间的显著性。频率是指在一个群体中某一等位的数量与所占据同一座的全部等位总数的一个比率。频率如下：p(A)

q(B)

nAB是该群体中AA、BB和AB型的个数型频率是一个群体中某个型的数所占全部数的百分比。型的为：型频率=型个数/检测群体总数。哈代-温伯格定律（Hardy-Weinberg平衡）是在一个随机交配的大群体中，对于一个处于Hardy-Weinberg平衡状态的群体，在一个座位具有两个 nAB′=(nAA+nAB+nBB)HnAA′=(nAA+nAB+nBB)PnAB′=(nAA+nAB+nBB)Q

HoHoi

；

HeHe1iiNe i中，Ne为有效等位数，Pi为第i个有效等位频率多态含在连锁分析时，的多态性通常利用多态信息含量来表示，当PIC>0.5时属于高度多态，0.25<PIC<0.5属于中度多态，PIC<0.25属于低度多态。多态信息含量如下： m1PIC1P22P2i

i1j中，Pi和Pj分别表示第i个和第j个等位在群体中的频率，n表示某一特定位点上等位数。将DNA组样品，用1.2%琼脂糖凝胶检测(图2-1)。条带单一无杂带，DNA完整性较好，可以进入下游试验。图2-1绵羊血液组DNA检Figure2-1GenomicDNAdetectionofsheepBMPR-IBPCR目的产物扩bp符合预期。图2-2绵羊BMPR-IB引物P1PCR产Figure2-2P1PCRamplificationofBMPR-IBgeneinPCR-SSCPSSCPP1和B两个等位，并且存在3种带型，分别为AA、BB、AB(图2-3)图2-3绵羊BMPR-IBSSCP检Figure2-3SSCPdetectionofBMPR-IBgeneinAA、BB、AB带型的样品各取两份送去测序公司发现1020位点(编码区864)出现突变T>C序列比对及峰值(图2-4、2-5)。图2-4绵羊BMPR-IB编码区序列对Figure2-4ThecomparisonofBMPR-IBgenecodingsequencesofinAA型(AABB型(BBAB型(AB图2-5绵羊BMPR-IBAA型、AB型、BB型比Figure2-5SequencecomparisonofAA,ABandBBgenotypesofsheepBMPR-频率和型频、对于六个绵羊群体（小尾寒羊多胎母羊、湖羊多胎母羊羊单双胎母羊多胎母羊以及小尾寒羊多胎母羊的优势型均为AA型而羊单双胎母羊和高山细毛羊单双胎母羊AB型频率略高于AA型绵羊的优势等位基因均为A。小尾寒羊多胎母羊、高山细毛羊单双母羊、湖羊多胎母羊的χ2值和G2值均未达到显著水平（p>0.05）,而羊单双胎母羊的χ2值和G2值达单双胎母羊多态信息含量处于中度多态（0.25<PIC<0.5）（2-6）。、、、利用SPSS21.0软件对BMPR-IB的编码区864位点的三种不同的分布差异性检测(表2-7)。检测所得可知在高山细毛羊单胎母羊和小尾寒羊多胎母羊之间高山细毛羊单胎母羊和羊单胎母羊之间高山细毛羊单胎母羊和羊单胎母羊之间、高山细毛羊单胎母羊和、、、、、高山细毛羊单胎母羊和湖羊多胎母羊之间高山细毛羊双胎母羊和小尾寒羊多胎母羊之间高山细毛羊双胎母羊和羊单胎母羊之间高山细毛羊双胎母羊和湖羊多胎母羊之间羊单胎母羊和湖羊多胎母羊之间、蒙母羊和羊双胎母羊之间差异显著（0.01<P<0.05）。而在高山细毛羊单胎母羊和高山细毛羊双胎母羊之间、羊单胎母羊和羊双胎母羊之、、、在不同型间最小二乘积所得如下。AA型、AB型、BB型2.4703(1.2166)、1.7347(0.8357)、1.3846(0.5064)。两两进行独立T检验比较可知AA型和AB、BB差异极显著不同型与品种互作效应的最小二乘积分析，3种型与四种绵羊有种互作效应(羊小尾寒羊湖羊无BB型高山细毛羊×AA(A×AA)、、 、、尾寒羊×AA(S×AA)3.0000、小尾寒羊×AB(S×AB)3.0000、羊×AA(M×AA)3.5333。不同型与品种之间互作效应后多重比较(表2-8)，A×AB与A×AA之间、A×BBM×AB之间、H×AAH×AB之间差异不显著（P>0.05），其表2-5型和频Table2-5GenotypeandalleleAB小尾寒羊多胎母 SmallTailHanewes(multiple羊单胎母 0000Mongoliaewes(single羊双胎母 Mongoliaewes00高山细毛羊单胎母 Gansualpinemerinoewes(single80.550高山细毛羊双胎母 Gansualpinemerinoewes湖羊多胎母 500

样本量/Sample

Genotype

等 频AlleleHuewes(multiple2-6Table2-6Geneticpolymorphism品 多态信息含

χ2Probabilityof

G2Probabilityof

观测F

95%95%Confidence小尾寒羊多胎母 SmallTailHanewes(multiple羊单胎母 Mongoliaewe(single羊双胎母 Mongoliaewes高山细毛羊单胎母 Gansualpinemerinoewes(single高山细毛羊双胎母 Gansualpinemerinoewes湖羊多胎母 Huewes(multiple表2-7不同型在绵羊群体中的分布差异检Table2-7Testofthedistributionofdifferentgenotypesinsixsheep GansualpinemerinoewesSmallTailHanewesMongoliaewe(singleMongoliaewesHuewes(multiple高山细毛羊单胎母 0.886<0.000Gansualpinemerinoewes(single高山细毛羊双胎母 <0.000Gansualpinemerinoewes小尾寒羊多胎母 —SmallTailHanewes(multiple羊单胎母 ——Mongoliaewe(single羊双胎母 ———Mongoliaewes注AA代表不显著P>0.05,AB0.01<P<0.05,AC代表差异极显著P<0.01。表内代表PNote:AAreferstonosignificantdifference(P>0.05),ABreferstosignificantdifference(0.01<P<0.05),ACreferstoextremelysignificantdifference(P<0.01).ThedataintablerepresentP表2-8品种与型互作与不同产胎类型绵羊分布差异的独立样本检Table2-8Testof ctionaleffectofbreedandgenotypeineweswithdifferentlaming品种型————————————————————————————注：A×AA高山细毛羊×AA型;A×AB高山细毛羊×AB型;A×BB高山细毛羊×BB型;S×AA小尾寒羊×AA型;S×AB小尾寒羊×AB型;M×AA羊×AA型;M×AB羊×AB型;H×AA湖羊×AA型;H×AB湖羊×AB型Note:A×AAindicatesGansualpinemerinoewesandAAgenotype;A×ABindicatesGansualpinemerinoewesandABgenotypy;A×BBindicatesGansualpinemerinoewes×BBgenotypy;S×AAindicatesSmallTailHanewes×AAgenotypy;S×ABindicatesSmallTailHanewes×ABgenotypy;M×AAindicatesMongoliaewe×AAgenotypy;M×ABindicatesMongoliaewe×ABgenotypy;H×AAindicatesHuewes×AAgenotypy;H×ABindicatesHuewes×ABgenotypy、在多种组织中都存在BMPR-IB的表达，该是调节和分化的重要蛋白受体。近年来，研究资料显示，BMPR-IB对于的调节主要在于抑制其分泌酮或控制颗粒细胞的分化成熟，进而间接影响动物的繁殖[61]。FecB的数增加，研究推测该突变可能导致对激素的敏感程度提高[62]，路复杂和功能多样性导致对调节机制的过程并不明确而且目前研究中对于绵羊编码区中的同义突变较少。本试验通过利用直接法和PCR-SSCP技术，对高山细毛羊单双胎母羊羊单双胎母羊、小尾寒羊多胎母羊和456只绵羊中，都存在AA型和AB型，而在高山细毛羊单、双胎势均为AA，在羊单、双胎母羊和高山细毛羊单、双胎母羊中发现ABAAPIC多态信息含量可知，属于低度多态的是小尾寒羊多胎母羊和湖羊多胎母羊(PIC<0.25)，而在羊单双胎母羊和作为连锁分析的标记位点，对提高选育高产胎率的绵羊有一定的价值。G2χ2现象可能与选育的有直接关系且受自然选择和人工选育影响较大。、绵羊的繁殖性状属于低遗传力性状之一由于该性状是受主 与微效，因相节控制的因此对于寻找主效多胎品系以此提高绵羊的繁殖性能有着重要的意义。有资料显示，BMPR-B是湖羊、小尾寒羊等高繁殖性能绵羊的主效[65。在中等繁殖力的绵羊品种中并不存在Q249R突变，本次试验就四456BMP-IB864T>C种型B该点突变属于同义突变并没有引起氨基酸的变化，且不同型在四种绵羊品种中分布差异不同高山细毛羊与小尾寒羊湖羊间差异极显著(<0.01)；羊与小尾寒羊、湖羊间差异极显著(<0.01)；甘肃高山细毛羊和羊之间的差异也存在显著性(0.01<0.05)但高繁殖力绵羊品种湖羊与小尾寒羊中差异并不明显(>0.05)。利用品种和产胎数互作后与基后子由A变为G，成为稀有子，导致蛋白翻译速度减慢，并且构象产生一定的差异，在特定情况下导致颗粒细胞的分化和细胞的发育[66因此可确定编码区864突变可作为控制绵羊繁殖性状的分析标记位点。，456BMPR-IB其中只有在高山细毛羊中发现BB型，而其他群体均只有两种型AA、BMPR-IB编码区864位点的突变在不同繁殖力绵羊品种间差异明显，第三章绵羊BMPR-IB部分3端非编码区多态性2.2.1试验样品2.2.2DNA的提取2.2.3绵羊血液样品的检测本试验中所用引物均利用Olig6.0和Primer5.0引物设计软件相结合BMPR-IB3端非编码区引物设根据已经公布的绵羊BMPR-IBmRNA序列（GenBank登录号: 列见表3-1。表3-1BMPR-IB部分多态位点引Table3-1PolymorphismLociPrimerofBMPR-IB引 引物序列 退火温

3′430bpPCR同第二章同第二章PCR同第二章同第二章同第二章BMPR-IBPCR目的产物扩BMPR-IB引物P2引物扩增产物条带清晰无杂带（图3-1），大小分别150bp符合预期大小图3-1绵羊BMPR-IB引物P2PCR产Figure3-1P2PCRamplificationofBMPR-IBgeneinPCR-SSCPCC、CT、CG(3-2)。图3-2绵羊BMPR-IBSSCP检Figure3-2SSCPdetectionofBMPR-IBgeneinCC、CT、CG带型的样品各取两份送去测序公司，三种型CC、CT、CG进行分析，在CT型中，BMPR-IB3端非编码区第511位点杂合C>T，在CG型中，非编码区544位点C>G（3-4）。CC型(CCCT型(CTCG型(CG图3-4绵羊BMPR-IBCC型、CT型、CG型比Figure3-4SequencecomparisonofCC,CTandCGgenotypesofsheepBMPR-IB频率和型频、对于三种绵羊品种（小尾寒羊多胎母羊羊单双胎母羊和高山细毛羊单双胎母羊341SSCP分析所得如下(3-2)等位均为C。高山细毛羊双胎母羊、羊单胎母羊绵羊χ2值和G2值均未达到显著水平（P>0.05）,而羊双胎母羊、高山细毛羊单胎母羊、小尾寒羊多胎母羊的χ2值和G2值达到显著水平（P<0.05）。说明羊双胎母羊高山细毛羊单胎母羊小尾寒羊多胎母羊群体Hardy-weinberg平衡状态。五个绵羊群体的观测值F在BMPR-IB中均处于95%置信区间内，且接近于、PIC多态信息含量可知，属于中度多态的是高山细毛羊表、SPSS21.0BMPR—IB3′430bp580bp扩增后三种型分布差异检测(表3-4)。高山细毛羊单胎母羊和高山细毛羊双胎母羊高山细毛羊单胎母羊和羊单胎母羊之间、高山细毛羊单胎母羊和羊双胎母羊之间差异极显著（P<0.01）。高山细毛羊单胎母羊与小、表3-2型和频Table3-2Genotypeandallele 样本量/只Sample

Genotype

等位频AlleleCTGCTG90.0.599Mongoliaewes(singleMongoliaewesGansualpinemerinoewes(singleGansualpinemerinoewes3-3Table3-3Geneticpolymorphism品 多态信息含

χ2Probabilityof

G2Probabilityof

观测F

95%95%ConfidenceSmallTailHanewes(multipleMongoliaewe(singleMongoliaewesGansualpinemerinoewes(singleGansualpinemerinoewes表3-4不同型在绵羊品种中的分布差异检Table3-4Testofthedistributionofdifferentgenotypesinfivesheep

Gansualpinemerinoewes

SmallTailHanewes(multiple

Mongoliaewe(single

Mongoliaewes高山细毛羊单胎母 Gansualpinemerinoewes(single高山细毛羊双胎母 Gansualpinemerinoewes小尾寒羊多胎母 —SmallTailHanewes(multiple羊单胎母 ——Mongoliaewe(single注AA代表不显著P>0.05,AB0.01<P<0.05,AC代表差异极显著P<0.01。表内代表PNote:AAreferstonosignificantdifference(P>0.05),ABreferstosignificantdifference(0.01<P<0.05),ACreferstoextremelysignificantdifference(P<0.01).ThedataintablerepresentP在不同型间最小二乘积所得如下。CC型、CT型、CG型之间的最小二乘积及标准差分别为1.63(0.689)、1.96(0.723)、1.50(0.675)。两两进行独TCTCC、CG3.512(0.0005)、4.328(<0.0001)。CCCG1.456(0.1470)。种互作效应(表3-5)。高山细毛羊×CC(A×CC)1.49、高山细毛、 、、、 、、之间互作效应后多重比较(4)，A×CCA×CT之间、A×CCM×CC之间、A×CCM×CT之间、A×AAM×CG之间、A×CTM×CC之间、A×CT与M×CT之间、A×CTM×CG之间、A×CTM×CC之间、S×CCS×CT之间、S×CCS×CG之间、S×CTS×CG之间、M×CCM×CG之间、M×CCM×CT之间、M×CTM×CG之间差异不显著（P>0.05），A×CCA×CG之间、A×CGM×CC之间、A×CGM×CG之间差异显著（0.05<P<0.01），表3-5品种与型互作与不同产羔类型绵羊分布差异的独立样本T检Table3-5Testof ctionaleffectofbreedandgenotypeineweswithdifferentlaming型———14.537(<0.0001 8.434(<0.0001)AC7.063(<0.0001)AC7.836(<0.0001)AC 0.218(0.8280)注：高山细毛羊×CC型;高山细毛羊×CT型;高山细毛羊×CG型;S×CC注：高山细毛羊×CC型;高山细毛羊×CT型;高山细毛羊×CG型;S×CC小尾寒羊×CC型;S×CT小尾寒羊×CT型;S×CG小尾寒羊×CG型;羊×CC型;M×CT湖羊×CT型;M×CG羊×CGNote:A×CCindicatesGansualpinemerinoewesandCCgenotype;A×CTindicatesGansualpinemerinoewesandCTgenotypy;A×CGindicatesGansualpinemerinoewes×CGgenotypy;S×CCindicatesSmallTailHanewes×CCgenotypy;S×CTindicatesSmallTailHanewes×CTgenotypy;S×CGindicatesSmallTailHanewes×CGgenotypy;M×CCindicatesMongoliaewe×CCgenotypy;M×CTindicatesMongoliaewe×CTgenotypy;M×CGindicatesMongoliaewe×CGgenotypy。，、的3′端非编码序列在转录后的加工过程中起着调控的作用其中涉mRNA的稳定性及翻译效率等一系列生理进程的调节，国内外目前关于对BMPR-IB的非编码序列鲜有涉及[67,68]。贾立新等[69]对BMPR-IB部分3′非编码区序列进行直接和PCR-SSCP技术检测高繁殖力和低繁殖力绵变。目前研究认为，在转录调控区域主要集中在的5′端，也就是说5′3′mRNA的转录后和翻译水平的调控并非必须[70]的3′端非编码区包含大量的碱基有着丰富的遗传信息[70]。3′miRNA中，存在3种型，CC型、CT型和CG型，在3′非编码序列第511位点和544位点发生了C>T突变和C>G的突变，第430bp到580bp扩增后三种型分布差异检测高山细毛羊单胎和高山细毛羊双胎之间高山细毛羊单胎和羊单胎之间、高山细毛羊单胎和羊双胎之间差异极显著。，、；；在不同型间最小二乘积所得结果如下：CC型、CT型、CG型之间的最小二乘积及标准差分别为1.63(0.689)、1.96(0.723)、1.50(0.675)。两两进行独立TCTCCCG3.512(0.0005)4.328(<0.0001)。CCCG1.456(0.1470)。由于试验有局限性，得出的结果仅增发现，存在CC、CT、CG三种型。个群体中不同型对于产羔数影响不显著，而CT型对于高山细毛羊产羔第四章绵羊ADAMTS-1在不同组织间差mRNA试验所需的羊由省永昌县养殖示范户提供小尾寒羊由陇西县菜子镇母羊养殖农民专业合作社提供，颈静脉血样，用ACD抗凝管-20°C保存；另外分别期的羊单胎母羊(4只)、羊双胎母羊(4只)和小尾寒羊多胎母(4只)的、垂体、下丘脑、心脏、脾脏、肺脏、肝脏、自Takara宝生物公司(大连)。1绵羊组DNA的提同第二章2.2.2绵羊组DNA的提RNA提取按照，按试剂盒（宝生物）DNARNA2.2.3.14.2.3.2同第二章2.2.3.2体积RNase反转录操作按照RT体积RNase将以上组分混匀，42℃2min

体积Reactionsolutionfrom RNase 15min85℃PCR扩增。参照GENEBANK中绵羊ADAMTS-1(登录号GU437212)cDNA全序列，使用Primer5.0设计引物。以β-actin(NM_ )作为内参(表4-1)。引物由苏州生物科技合成。4-1Table4-1primer

Accession

Primer

Product

镁离子的浓度等。PCR反应的优化是为了获得最佳扩增效率的条件，而且还要PCRDNA以及引物质量的下，维持其他条件不变，仅改变其中任意一个条件，将该PCRPCR25µL4-2PCRTable4-2PCRamplificationddPrimerTaqPCR

4-3PCRTable4-3TheBestamplifiedreactionprogramofYBRRPremixExTaqTMⅡ反转录酶(10μM)10μl(TaKaRa, )和μlRNase-ddH2O。分析荧光定量溶解曲线，判断是否存在引物二聚体，以4°C，30s。PCR同第二章同第二章频率和型频表达量通过2-△△Ct计算[76]。不同组织中ADAMTS-1表达量，P<0.05，所得数据以平均值±标准误(n=10)表示。心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、下丘脑、垂体、8个组织ADAMTS-1基(4-1)。图4-1绵羊母羊ADAMTS-1在8种组织的RT-PCR电Figure4-1RT-PCRelectrophoresispatternofADAMTS-1genein8organsof注:1;2心脏;3肝脏;4肺脏;5脾脏;6下丘脑;7垂体;8肾Note:1ovary;2heart;3kidney;4lung;5spleen;6hypothalamus;7pituitary;8利用实时荧光定量PCR法对绵羊ADAMTS-1在三个绵羊群体8个组织中的表达量进行定量分析，用实时荧光定量PCR法对绵羊ADAMTS-1在8组织中表达量进行分析，内参B-actin和目的ADAMTS-1溶解曲线(图4-2)，可知两个扩增产物的Tm值均一，溶解曲线上呈现明显的单峰，说明Q-PCR反应过程中，两种引物扩增特异性效果良好，没有出现非特异性扩增AB图4-2绵羊ADAMTS-1和B-actin的溶解曲Figure4-2MeltingcurveforsheepADAMTS-1geneandB-actin绵羊AAMTS-1的表达水平，三个绵羊群体的表达量高于其他组织（<0.05）,其余组织由高往低表达水平依次是肾脏、心脏、肝脏、肺脏、脾脏、垂体、下丘脑(图4-3)。同一组织不同绵羊表达水平分析可知，中小尾寒羊多胎母羊与羊单胎母羊、羊双胎母羊表达量差异显著羊双胎母羊和羊单胎母羊差异显（<0.05且小尾寒羊多胎的表达量是羊双胎母羊的1.54倍、羊单胎母羊的2.61倍。其余组织间差异不显著。AB图4-3绵羊ADAMTS-1在三个羊群中各组织的mRNA表达水Figure4-3TheexpressionmRNAlevelofADAMTS-1geneindifferentorgansofthreekindsof注:A中不同小写字母表示同一组织在不同绵羊群体下的表达量差异显著(p<0.05,mean±S.E.);B中不同大写字母表示同一绵羊群体下不同组织中的表达量差异显著(p<0.05,N=10,mean±S.E.)Note:DifferentlowercaselettersinAindicatesthattheexpressionofthesameorganwassignificantlydifferent(p<0.05,N=10,S.E.+mean)indifferentsheeppopulations;DifferentcapitallettersinBindicatesthattheexpressionlevelsofdifferentorgansinthesamesheeppopulationweresignificantlydifferent(p<0.05,N=10,mean+S.E.)依据试验目的所设计的引物分别对绵羊血液组样品进行扩增，利用2％4)4-4ADAMTS-1Figure4-4ThePCRdetectionofsheepADAMTS-1geneexonSSCPP1存在单核苷酸多态性，产生图4-5绵羊ADAMTS-1第五外显子SSCP检Figure4-5SSCPdetectionofsheepADAMTS-1geneexon峰值(4-6)。AA型(AAAB型(ABAC型(AC图4-6绵羊ADAMTS-1第五外显子AA型、AB型、AC型比Figure4-6SequencecomparisonofAA,ABandACgenotypesofsheepADAMTS-1geneexon对于三个绵羊群体(小尾寒羊多胎母羊、羊单双胎母羊)共计115样本羊信息含量处于中度多态（0.25<PIC<0.5）(4-5)。表4-4型和频Table4-4Genotypeandallele品 样本量/

等位频SampleGenotypeAlleleABC4SmallTailHanewes(multiple62Mongoliaewes(singlebirth)羊双胎羊双胎母羊Mongoliaewes(twins)

4-5Table4-5Geneticpolymorphism品 多态信息含量

群体杂合度

有效等位数

卡方检验值 PPolymorphisminformationPopulationheterozygosityEffectivenumberofalleleChi-squaretestProbabilityofSmallTailHanewes(multipleMongoliaewe(singleMongoliaewes绵羊品种和型及品种与型互作后对产胎数的影响进行方差分析，所得数据表明，不同型之间F=0.140，差异不显著（P=0.840P>0.05）不小二乘均数羊AA型1.498，羊AB型1.541，羊AC型1.500，小互作分析(表4-6)，可知小尾寒羊三种型与羊三个型互作差异极显著（P<0.01），而各自品种间型互作不显著（P>0.05），说明型对于绵表4-6品种与型互作与不同产羔类型绵羊分布差异的独立样本T检Table4-6Ttestof ctionaleffectofbreedandgenotypeineweswithdifferentlaming品种×

__________注:S×AA小尾寒羊×AA型,S×AB小尾寒羊×AB型,S×AC小尾寒羊×AC,M×AA羊×AA型,羊×AB型,M×AC羊×ACNote:S×AAindicatesSmallTailHanewes×AAgenotype,S×ABindicatesSmallTailHanewes×ABgenotype,S×ACindicatesSmallTailHanewes×ACgenotype,M×AAindicatesMongoliaewe×AAgenotype,M×ABindicatesMongoliaewe×ABgenotype,M×ACindicatesMongoliaewe×ACgenotypeADAMTS-1不仅在雌性官的发育中起着重要作用，同时还在类的ADAMTS-1缺失也会影响女性能力下降等，表明ADAMTS-1是过程中的重要蛋白酶，对于提升人类繁殖能力意义十分重要，把ADAMTS-1当作高繁殖力候选可以提高优良品种的选育工作效率。国内学者对于AAMT-1响繁殖性状有相关，徐姗姗等利用P-REP技术发现猪的ADAMTS-1第七外显子猪产仔数和产活仔数性状显著相关[77。乐凯根据获得的猪的AAMT-1的A序列，用眉山猪和大白猪A模版进行克隆，发现两个SP位点，位于第七外显子72bpC>G和第七内含子512bpG>。本试验利用P-SSCP技术和直接法，发现在绵羊AAMT-1第外显子，编码区1506bp和1509bp分别出现C>、G>A突变共有三种型A(C1506)A(G1509A)发现三个绵羊群体(小尾寒羊多胎母羊、羊单胎母羊、羊双胎母羊)共计15个样本中三个绵羊群体均处于Hardy-weinbeg衡状态说明羊和小尾寒羊均已适应当地环PIC（0.25<PIC<0.5表明三个群体在该位点的遗传变异高，选择余地较大不同母羊产胎性状与型相关性分析可知小尾寒羊三种型与羊三个型互作差异极显著（P<0.01）,而各品种间型互作不显（>0.05说明型对于绵羊的产胎数影响不显著而品种对于产羔数影响极显（<0.01就AAMTS-1第五外显子两个突变位点而言其对绵羊产胎数没有显著影响。牛的ADAMTS-1在牛前期的中存在表达研究发现促激素在前期有明显的提升，分析整个期的ADAMTS-1转录水平可知，整个期ADAMTS-1都有表达，但在早期提取出的组织中表达量显著高于其他时期[79]。Doyle等[80]ADAMTS-1PRC/EBPSp1/Sp3结合区域联合调控的，LH通过活化腺嘌呤环化酶并且产生cAMP调节ADAMTS-1，说明PR和组蛋白的Sp1/Sp3结合区域对于诱导PR来调节，说明LH和PR调节ADAMTS-1在颗粒细胞的表达是各自独立的通路却又相互协调本次试验利用期的三个绵羊群体并结合实时荧光，、可知中小尾寒羊多胎母羊与羊单胎母羊羊双胎母羊表达量差异显（<0.05羊双胎母羊和羊单胎母羊差异显（<0.05且小尾寒羊多胎表达量是羊双胎母羊的1.54倍羊单胎母羊的2.61倍。对于羊单双母羊群体表达水品差异分析结果与何小龙等[81]所得相同，并且发现小尾寒羊多胎母羊表达量显著高于羊单双胎群体其余组织的表达量差异不显著。，、的表达量是羊双胎母羊的1.54倍、羊单胎母羊的2.61倍，说明ADAMTS-1对绵羊多胎性状有重要的影响作用。在三个群体共计115只绵羊，ADAMTS-1外显子5中发现三种型，AAAB、AC，但是通过与产胎数互作分析后发现三种型对产胎数影响不显著本试验利用PCR-SSCP技术对于六个已知产胎数的绵羊群体BMPR-IB864BMPR-IB编码区864位点发生T>C的突变，属于同义突变。对于不同羊）与低繁殖力品种（羊母羊、高山细毛羊母羊）分布差异较为显著。该非编码区间都存在两个突变（BMPR-IB非编码区第511位点杂合C>T，BMPR-IB部分非编码区的多态性与三个群体的产羔数进行相关性分析个绵羊品种中不同型对于产羔数影响不显著，而CT型对于高山细毛羊本次试验利用实时荧光定量分析法对不同羊品种组织间ADAMTS-1差异表达量进行分析，发现小尾寒羊多胎母羊的表达量是羊双胎母羊的1.54倍、羊单胎母羊的2.61倍，初步确定ADAMTS-1在转录水平对于绵羊CDS区（编码区）1506C>T、1509G>A，均属于同义突变，三种带型分别命名为AA、AB、AC，显著性分析可知三种型LiuH,WangX,WarburtonML,etal.Genomic,Transcriptomic,andPhenomicVariationRevealstheComplexAdaptationofModernMaizeBreeding.[J].分子植物(Molecularnt),2015,8(6):871-884.Wild,J.P.(1984).Sheepandman.赵有璋(2011).羊生产学.