微生物的培养和应用

微生物的培养和应用第1页，课件共68页，创作于2023年2月一、微生物培养基的配制

1、培养基定义：培养基（培养液）是为人工培养微生物而制备的，提供适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。

思考：微生物细胞的元素组成是什么？第2页，课件共68页，创作于2023年2月2·类型（1）按物理状态分：固体培养基、液体培养基、半固体培养基。区别：加入琼脂的量决定培养基的形态。熔点：96度凝固点：40度注意：一般细菌不能利用琼脂。应用微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面第3页，课件共68页，创作于2023年2月

微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落用途：纯化、计数、鉴定第4页，课件共68页，创作于2023年2月液体培养基：工业生产表面生长均匀混浊生长沉淀生长第5页，课件共68页，创作于2023年2月半固体培养基：观察运动无动力有动力(弥散)第6页，课件共68页，创作于2023年2月例、下列叙述不正确的是A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同C微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌B.C.第7页，课件共68页，创作于2023年2月（2）按成分分：天然培养基、合成培养基和半合成培养基。依据：成分是否明确判断下列培养基按成分属于何种培养基？牛肉膏、蛋白胨培养基

葡萄糖铵盐培养基

马铃薯蔗糖培养基第8页，课件共68页，创作于2023年2月（3）按功能分：基础培养基、选择培养基和鉴别培养基。基础培养基：含有微生物生长所需的基本物质。选择培养基：培养基加入某种物质或缺少某种营养物质而抑制不需要的微生物生长，促进需要微生物生长。举例说明：加链霉素培养基作用加青霉素培养基作用无氮培养基作用鉴别培养基：区别微生物伊红——美蓝产气杆菌菌落大、灰棕色大肠杆菌菌落小、绿色金属光泽抗生素，抑制细菌第9页，课件共68页，创作于2023年2月按功能状态分选择培养基鉴别培养基基础培养基种类用途例选择培养基鉴别培养基从众多微生物中分离所需的微生物鉴别不同种类的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌伊红—美篮培养基使大肠杆菌的菌落呈深紫色，可以鉴别大肠杆菌第10页，课件共68页，创作于2023年2月几种选择培养基：加入青霉素的培养基:

分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:

分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:

分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:

分离自养型微生物第11页，课件共68页，创作于2023年2月微生物生长需要条件

1、夏天为什么食物容易腐败？如何处理可以防止腐败？

2、为什么真空包装的食品不容易腐败？

3、醋酸是否具有杀菌作用？以上反应了微生物生长受到哪些条件影响？细菌30～37霉菌25～28放线菌25～281～2d3~4d5~7d大肠杆菌乳酸菌破伤风杆菌

大多数细菌为好氧型霉菌5.0～6.0细菌6.5～7.5放线菌7.5～8.5第12页，课件共68页，创作于2023年2月微生物的类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌、霉菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻等原核细胞第13页，课件共68页，创作于2023年2月3.培养基营养成分：不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐等营养物质。讨论：为什么大多数培养基都含有这四类物质？？（1）基本成分：第14页，课件共68页，创作于2023年2月碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等自养微生物异养微生物第15页，课件共68页，创作于2023年2月1000mL牛肉膏蛋白胨固体培养基配方培养基组分提供的主要营养牛肉膏5.0g碳源、氮源、磷酸盐和维生素蛋白胨10.0g

氮源和维生素NaCl5.0g

无机盐H2O

定容至1000ml

氢元素、氧元素（2）特殊营养：细菌生长必需，而往往自身不能合成的化合物，如维生素、某些氨基酸、碱基等（3）pH、氧气等要求第16页，课件共68页，创作于2023年2月

碳源可作为碳源的物质有:含碳无机物:含碳有机物：蛋白质脂肪酸不同微生物所利用的碳源不同异养型微生物的碳源为自养型微生物的碳源为碳酸盐、碳酸氢盐、二氧化碳糖类（主要）含碳有机物（有机碳）含碳无机物（无机碳）第17页，课件共68页，创作于2023年2月氮源可作为氮源的物质有:含氮无机物：

b.含氮有机物：蛋白胨牛肉膏尿素氮气氨气硝酸盐铵盐第18页，课件共68页，创作于2023年2月二、无菌操作1、获得纯净培养物的关键：2、无菌操作

防止外来杂菌的入侵第19页，课件共68页，创作于2023年2月1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是

A光合细菌B根瘤菌

C硝化细菌D乳酸菌2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是

A糖、有机酸等B二氧化碳、碳酸盐

C蛋白质D无机氮化物A.CA.C第20页，课件共68页，创作于2023年2月二.无菌技术（思考）1.什么是无菌技术？包括哪些方面？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？3.消毒和灭菌有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？5·哪些地方有菌可能导致菌体感染？操作者培养基、接种工具、器皿空间无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防止杂菌污染的方法。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。第21页，课件共68页，创作于2023年2月1、灭菌和消毒

1.）灭菌：强烈的因素杀死所有微生物，包括芽孢和孢子。思考：哪些因素可以灭菌、消毒？物理——高温、紫外线化学——酒精、氯气、石碳酸2.）消毒：温和的因素杀死一部分对人体有害的微生物。举例：煮沸问题：一段时间后为什么会腐败？不包括芽孢和孢子

第22页，课件共68页，创作于2023年2月3）.常用的消毒方法：煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法4）常用的灭菌方法：灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌：100kPa121℃15-30min牛奶接种室、接种箱或超净工作台接种工具，接种环、接种针或其他金属用具玻璃器皿（吸管、培养皿）第23页，课件共68页，创作于2023年2月思考：以下应当用何种方法灭菌、消毒？操作者培养基接种工具器皿空间牛奶——手用酒精消毒——高压蒸汽灭菌——灼烧——干热灭菌——紫外线——巴氏消毒70～75度30min80度15min第24页，课件共68页，创作于2023年2月灼烧灭菌

微生物的接种工具(接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧第25页，课件共68页，创作于2023年2月干热灭菌

160－170℃；1－2h能耐高温的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)高压蒸汽灭菌100kPa121℃15-30min通常用于培养基的灭菌第26页，课件共68页，创作于2023年2月总结：无菌技术

1、实验操作空间、操作者、衣着和手要

和

。2、将用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等进行

。3、为了避免周围环境中微生物污染，实验操作应在

附近进行。4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。清洁灭菌酒精灯消毒第27页，课件共68页，创作于2023年2月例：下列关于腐乳制作的描述中，错误的是A．在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与

B．含水量大于85%的豆腐利于保持湿度，适宜制作腐乳

C．加盐和加酒都能抑制微生物的生长

D．密封瓶口前最好将瓶口通过火焰以防杂菌污染第28页，课件共68页，创作于2023年2月六、培养基的配制（一）、细菌培养基的配制1.计算:100ml蒸馏水中各物质的量。2.称量：注意牛肉膏的粘稠度大。3.溶化：牛肉膏连同称量纸一同放入不断搅拌4.调节pH:7.0~7.2思考：判断该培养基的作用是什么？第29页，课件共68页，创作于2023年2月第30页，课件共68页，创作于2023年2月第31页，课件共68页，创作于2023年2月5.分装：培养基高度1/5不要污染试管口

棉塞塞紧第32页，课件共68页，创作于2023年2月6、包扎第33页，课件共68页，创作于2023年2月7.灭菌：思考：灭菌的温度、压力、时间分别是多少？8.搁置斜面/倒平板

第34页，课件共68页，创作于2023年2月图中哪些措施是防止杂菌污染的？第35页，课件共68页，创作于2023年2月培养基灭菌后，需要冷却到50度左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？刚刚不烫手。为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？防止瓶口附近的微生物污染培养基第36页，课件共68页，创作于2023年2月平板冷凝后，为什么要将平板倒置？使培养基表面的水更好的挥发，防止皿盖上水珠落入培养基在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

空气中的微生物会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，最好不要用该培养基培养微生物。第37页，课件共68页，创作于2023年2月六、接种技术

无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程称为接种。1、接种工具第38页，课件共68页，创作于2023年2月常用的接种方法斜面划线法第39页，课件共68页，创作于2023年2月第40页，课件共68页，创作于2023年2月问题：上述结果反应了什么情况？问题：可对菌液如何处理？第41页，课件共68页，创作于2023年2月稀释涂布平板法VS稀释混合平板法第42页，课件共68页，创作于2023年2月菌种的保存1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。2、长期保存：甘油冷冻管藏法第43页，课件共68页，创作于2023年2月从哪里可以获得微生物呢？微生物的大本营：土壤从众多微生物中分离某种微生物有什么方法？根据微生物所需营养物质、氧气、pH不同利用选择性培养基选择。对微生物进行分离的培养基是？

——固体培养基固体培养基上不同菌的区别是什么？

——菌落菌落作用：分类、鉴定的依据七、微生物的分离、数量测定第44页，课件共68页，创作于2023年2月菌落细菌的菌落特征因种而异菌苔：菌落连成片

第45页，课件共68页，创作于2023年2月主题：分离土壤中分解尿素的微生物1、原理：分离：以尿素为唯一氮源的选择性培养基进行选择。计数：稀释倒平板法第46页，课件共68页，创作于2023年2月第47页，课件共68页，创作于2023年2月2、实验步骤：第48页，课件共68页，创作于2023年2月第49页，课件共68页，创作于2023年2月第50页，课件共68页，创作于2023年2月第51页，课件共68页，创作于2023年2月问题：统计细菌和统计分解尿素所用的细菌的稀释倍数相同吗？细菌：4、5、6放线菌：3、4、5真菌2、3、4问题：统计的菌落数往往比活菌实际数目偏低？每克样品中的菌落数=C（菌落数）*M（稀释倍数）/V（涂布体积）第52页，课件共68页，