大肠杆菌噬菌检验操作SOP

资料整理资料整理大肠杆菌噬菌检验操作SOP编号：SOP-ZL007-00页码：1\5版本号：01修订号：00机密等级：秘密起草人起草日期颁发部门质量管理部审核人审核日期批准人批准日期生效日期分发清单研发部[]质量管理部[]综合管理部[]生产管理部[]市场销售部[]财务部[]目的规定新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测方法。指导操作者按本程序进行新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测操作。适用范围本程序包括大肠杆菌菌种培养、样品培养、点样、判定标准和增殖试验。适用于新生牛血清中大肠杆菌噬菌体检定操作的全过程。职责3.1．质量管理部：负责本程序的起草。3.2．质量管理部QC：负责本程序的操作。3.3.总经理：负责本程序的批准。定义无引用标准《中华人民共和国药典》四部2015版材料及设备6.1供试品及参考品/标准品6.1.1供试品：新生牛血清。记录批号。6.1.2参考品/标准品：大肠杆菌C3000菌种，记录批号。6.2化学药品及试剂6.2.1普通肉汤培养基，1-2支/批血清，记录批号、数量及效期。6.2.2阳性血清，1-2ml,记录批号、效期。6.2.3阴性血清，1-2ml,记录批号、效期。6.2.4营养琼脂培养基平皿，1-2个/批，记录批号、数量及效期。6.3设备6.3.1生物安全柜。6.3.2振荡培养箱。6.4玻璃器皿及辅助用具/易耗品6.4.1灭菌效期内的尖毛细吸管1-2支6.4.21ml吸管，4-6支/批供试品6.4.3有效期内的一次性使用无菌注射器，2支/批供试品6.4.4有效期内的一次性无菌滤器（0.45μm)，1个/批供试品6.4.5操作服，1件/人6.4.6无菌帽、无菌口罩和橡胶检查手套，1副/人6.4.7白金耳1个6.4.8酒精灯1个6.4.9砂片1片6.4.10点火枪一把或火机6.4.11效期内75%酒精棉（见《75%酒精棉配制程序》）流程图无内容8.1准备8.1.1尖毛细吸管﹑1ml吸管、操作服经蒸汽高压灭菌，记录高压设备运行流水号8.1.1.1将试验所需物料放入物料缓冲间。8.1.1.2人员按无菌操作室的要求更衣进入操作室，参见《人员进出QC洁净区程序》。8.2检测程序8.2.1大肠杆菌C3000菌种启封、传代。8.2.1.1大肠杆菌C3000菌液培养8.2.1.2将传代后的大肠杆菌C3000斜面菌种，肉汤培养基放入生物安全柜。8.2.1.3点燃酒精灯。8.2.1.4取一支接种环，放在酒精灯上灼烧月8.2.1.5待接种环冷却后伸入菌种试管内，取适量大肠杆菌C3000接种肉汤培养基。8.2.1.6熄灭酒精灯8.2.1.7将转种肉汤培养基的大肠杆菌C3000放于37℃振荡培养箱中振荡培养6小时。8.3.样品培养8.3.1将振荡培养箱中振荡培养6小时后的肉汤培养的大肠杆菌C3000、供试品以及阴性和阳性对照血清放入生物安全柜。8.3.2点燃酒精灯。8.3.3取下肉汤培养的大肠杆菌C3000试管塞子，酒精灯上消毒管口。8.3.4用1ml吸管吸取1ml培养好的菌液加入8ml肉汤培养基中，再分别加2ml供试品以及阴性和阳性对照血清，混匀，塞好塞子。8.3.5熄灭酒精灯。8.3.6将加样后的培养基置37℃振荡培养箱培养18小时。8.4点样。8.4.1把肉汤培养的菌液和新鲜的肉汤培养基放入生物安全柜内。8.4.2点燃酒精灯。8.4.2用1ml吸管分两次吸取2ml菌液加入到新鲜肉汤培养基中，盖好塞子，置37℃摇床培养2小时。8.4.3再把培养2小时后的菌液和营养琼脂培养基平皿放入生物安全柜内。8.4.4用一次性注射器取2ml培养好的菌液铺在营养琼脂培养基平皿表面，吸去多余液体，盖上盖子，置37℃1－2小时后点样。8.4.5把供试品菌液和制备好的培养皿放入生物安全柜内。8.4.6将经18小时培养的供试品菌液用0.45µm无菌滤器过滤后点样于培养皿中8.4.7熄灭酒精灯。8.4.8将点样后的培养皿置37℃培养箱培养6小时后观察结果。8.4.9清场。参见《QC清场管理程序》，填写清场记录。8.5增殖试验（当供试品为阳性做此项）8.5.1将经过培养的阳性供试品菌液和新鲜肉汤培养基放入超净台内。8.5.2取下试管塞，酒精灯上消毒管口。8.5.3用1ml的吸管分两次吸取经过培养的阳性供试品的菌液2ml，加入到8ml新鲜肉汤培养基中，置37℃振荡培养箱振荡培养2小时。8.5.4将振荡培养2小时的阳性供试品的菌液进行点样，点样培养参见8.4。8.5.5清场。参见《QC清场管理程序》，填写清场记录。8.6试验结果评估8.6.1在阴性、阳性对照都成立的前提下，培养皿中供试品处无噬菌斑为阴性，有噬菌斑为阳性。8.6.2当供试品呈阳性时，进行增殖试验。增殖试验为阳性判供试品为阳性，增殖试验为阴性判供试品为阴性。注意事项9.1.严格按照GMP要求规范操作，以防止检定结果不成立。9.2.注意不得混淆不同名称和批号供试品9.3.使用的计量器具应经过计量校验9.4出现超标结果，应在试验记录中如实记录。9.5出现OOS情况，应及时报告主管。参见《质量检验超出标准调查分析程序》，完成OOS记录。附录及派生记录10.1.大肠杆菌噬菌体检测记录F-SOP-ZL020-01相关文件《振荡培养箱使用与维护程序》《菌毒种细胞