藤降压片对左旋硝基精氨酸致高血压大鼠模型降压效用及机制研究

藤降压片对左旋硝基精氨酸致高血压大鼠模型降压效用及机制研究

目前，具有明确药理效果和医学证据的抗高血压药物主要是多国产生物科学剂群的化学药物，其中大部分不具备自主知识产权。抗高血压药物的开发相对落后。目前，抗高血压药物，如黄菊抗高血压药、复方钩藤抗高血压药、清痛抗高血压药，其收入较低，疗效、工艺、口感、个人剂量等也存在明显不足。因此，抗高血压药物的开发仍是一个重要的课题。中药有效组分制剂藤菔降压片是以国家高血压中医临床研究基地钩藤莱菔子验方和医疗机构内制剂藤菔降压片(鲁药制字Z20110021)为依据,遵循中药组分配伍的研究思路,获取该复方抗高血压的主要有效组分并应用药理模型研究其配伍比例而研制的中药新药。本研究选择左旋硝基精氨酸(L-nitro-ariginine,L-NNA)诱导的高血压大鼠模型为研究对象,以藤菔降压片为干预手段,观察该制剂的抗高血压效应以及对血清内皮素(Endothelin,ET-1)、一氧化氮(Nitricoxide,NO)、肾素(Renin)、血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)和醛固酮(aldosterone,ALD)水平的影响,从而探索其可能的作用机制,以期为临床试验提供依据。1实验材料1.1体质量、材料SPF级雄性Wistar大鼠68只,体质量165~212g,购自山东鲁抗医药股份有限公司,合格证书:SCXL(鲁)20080002。1.2实验药物1.2.1钩藤总核苷酸/莱子水溶液衍生物藤菔降压片由山东中医药大学药学院周洪雷教授提供,规格为360mg/片,每片含钩藤总生物碱18mg和莱菔子水溶性生物碱21.6mg。使用前生理盐水溶解,分别按照3∶2∶1的比例配制质量浓度为75、50、25mg/mL混悬液,置4℃冰箱保存备用。1.2.2%氯化钠溶液北京诺华制药有限公司产品,批号x1041;0.9%氯化钠溶液:山东威高药业有限公司产品,批号2110813021。使用前生理盐水溶解含缬沙坦1.44mg/mL的混悬液,置4℃冰箱保存备用。1.2.3l-硝基精氨酸l-naSigma-Aldrich产品,生理盐水溶解,质量浓度3.05mg/mL,过滤,除菌,置4℃冰箱保存备用。1.3免疫检测试剂内皮素(ET-1)酶联免疫检测试剂盒、一氧化氮(NO)酶联免疫检测试剂盒、肾素酶联免疫检测试剂盒、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)酶联免疫检测试剂盒、醛固酮(ALD)酶联免疫检测试剂盒,以上产品均为美国R&DSVSTEMS公司产品。1.4无创血压检测仪器ALC—NIBP型清醒大鼠血压心率测定仪,上海奥尔科特生物科技有限公司产品;ALC—HTP动物恒温系统(上海奥尔科特生物科技有限公司);ALC—NIBP无创血压测量分析系统(上海奥尔科特生物科技有限公司);ELX808型酶标仪(美国BIO—TEKISTRUMENTS公司);ME235P电子分析天平(德国赛多利斯公司);DT5—3型低速自动平衡离心机(北京时代北利离心机有限公司)。2实验方法2.1l-硝基精氨酸l-na诱导的高血压大鼠根据文献记载2.2大鼠单次注射藤降压片、藤降压片、藤降压片单次注射剂量单次注射单次注射剂量试验将L-NNA诱发的高血压大鼠均按照体质量随机分为5组,即模型对照组、阳性对照组、藤菔降压片高剂量组、藤菔降压片中剂量组、藤菔降压片低剂量组,并选择同批次大鼠腹腔注射等量生理盐水作为正常对照组。2.3藤降压片给药剂量阳性对照组给予缬沙坦混悬液2.88mg/(200g·d),藤菔降压片高剂量组给予150mg/(200g·d),藤菔降压片中剂量组给予100mg/(200g·d),藤菔降压片低剂量组给予50mg/(200g·d),正常对照组和模型组给予等量的生理盐水,给药途径为灌胃,每周给药6d,连续给药4周。每周测量体质量1次,并根据体质量的变化调整给药量。2.4测试指标2.4.1单次给药后，对各组大鼠进行了尾动脉血压和心率的检测采用无创性尾动脉脉搏间接测压法。2.4.2在连续4周后，对各组大鼠进行了尾动脉血压和心率测试采用无创性尾动脉脉搏间接测压法。2.4.3连续4周后，各组大鼠血清内皮素2.4.4统计处理方法计量资料用均数加减标准差(ue0af±s)表示,数据采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析。3结果3.1单次给药后24小时的血压和心率的比较3.1.1单次给药后24小时收缩压变化的比较3.1.2沙坦对沙坦血压的影响与治疗前比较,给予藤菔降压片高剂量、中剂量和低剂量后4~8h有明显的降压效应(P<0.05),3组降压的最大幅值分别为(6.2±3.4)mmHg、(7.6±6.6)mmHg和(8.1±7.9)mmHg。给予缬沙坦后舒张压的变化趋势与藤菔降压片接近,介于大剂量组和小剂量组之间;各剂量组降低舒张压的效应无明显差异(P>0.05)。见表2。3.1.3心率变化的趋势与治疗前比较,给予藤菔降压片高剂量、中剂量和低剂量后心率呈降低的趋势,多无显著性改变(P>0.05)。给予缬沙坦后心率变化趋势与藤菔降压片无显著变化(P>0.05);各剂量组之间,给藤菔降压片后心率变化无明显规律。见表3。3.2给药4周，两组血压和心率的比较3.2.1单次给药4周各组mmhp与治疗前比较,给予藤菔降压片高剂量、中剂量和低剂量1周、2周、3周和4周后均有明显降压效应(P<0.05),在给药4周降压幅度分别达(21.8±2.6)mmHg、(20.1±2.0)mmHg和(19.9±2.3)mmHg。给予缬沙坦后降压效应在给药2周、3周、4周优于低剂量组(P<0.05)。各剂量组之间,中剂量组降压的效应优于低剂量组(P<0.05),给药4周高剂量组降压效应优于低剂量组(P<0.05)。见表4。3.2.2单次给药4周各组mmg的比较与治疗前比较,给予藤菔降压片后高剂量、中剂量和低剂量组均有明显降低舒张压效应(P<0.05),在给药4周降压幅度分别达(14.9±5.3)mmHg、(14.5±6.1)mmHg和(15.3±6.1)mmHg。给予缬沙坦后舒张压的变化趋势与藤菔降压片接近,降压效应无明显差异。各剂量组之间,在给药3周中剂量组的降压效应优于低剂量组(P<0.05)。见表5。3.2.3沙坦降压片与沙坦心率试验与治疗前比较,给予藤菔降压片大剂量、中剂量和小剂量后心率无明显降低效应(P>0.05)。给予缬沙坦后心率的降低幅度与藤菔降压片无明显差异(P>0.05)。各剂量组之间,降低心率效应无明显差异(P>0.05)。结果见表6。3.4各组血清no、肾素、ang水平比较与正常组比较,模型组血清ET-1和ALD水平无明显变化(P>0.05),模型组血清NO水平显著降低(P<0.05),血清肾素和AngⅡ水平显著升高(P<0.05),说明血循环ET-1和ALD不是形成该高血压模型的病理机制,而血液NO、肾素和AngⅡ参与了该高血压模型的病理进程。与模型组相比,中剂量组血清NO水平显著升高(P<0.05),仍低于缬沙坦组(P<0.05)。与模型组相比,高、中、低剂量组血清肾素水平均显著降低(P<0.05),而且劣于缬沙坦组(P<0.05)。与模型组相比,高、中、低剂量组血清AngⅡ水平均显著降低(P<0.05),而且高、中剂量组与缬沙坦组相当(P>0.05),高剂量组效应优于低剂量组(P<0.05)。结果见表7。4藤降压片的降压机制本研究在复习古今文献的基础上,根据高血压的临床特点并总结临床治疗高血压病的经验,提出肝气升发太过、无以制约、妄动奔驰、亢阳上扰是高血压病的重要病机,肝阳上亢证是高血压病常见证候类型左旋硝基精氨酸为一氧化氮合酶抑制剂,通过降低NO合成、诱导血管内皮功能障碍,从而诱导高血压的发生与发展综上所述,藤菔降压片具有良好的抗高血压实验效用,其机制与升高NO水平以改善血管内皮依赖性舒张功能、降低肾素和血管紧张素Ⅱ水平以抑制RAAS系统活性有关。至于藤菔降压片更深层次的降压机制尚有待探索。(ET-1)、一氧化氮(NO)、肾素、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮(ALD)水平的检测采用酶联免疫吸附法。与治疗前比较,给予藤菔降压片高剂量、中剂量和低剂量后2h即有降压效应,至6h达到峰值,与治疗前相比均有显著差异(P<0.05),