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文档简介

三苯基氯化四氮唑。

用途:是脂溶性光敏感复合物,最初用于检测种子生存力量,后来用于染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。

是呼吸链中吡啶核苷结核酶系统的质子受体,与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色,正常脑组织和有活力种子胚组织活细胞中的脱氢酶可以将还原成不溶性的红色稳定的三苯基甲臢;而缺血组织细胞或胚种细胞内脱氢酶活性因死亡或生活力衰退下降,不能反应,故不会产生变化而呈现苍白色。

因此可以依据染色部位和染色深浅程度来鉴定脑组织或者种子的活力。

操作说明:仅供参考=,不含溶解。

%-2%,一般浓度不宜大于2%,详细浓度依据不同试验要求而定,配制好的溶液要避光保存。

一、动物组织染色以小鼠脑组织染色为例,取小鼠脑组织,用生理盐水洗净,-20℃冷冻20左右。

:一般切成5-6片,每隔2切一片。

第一刀在脑前极与视交叉连线中点处;其次刀在视交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。

第1页,。

℃避光染色30,染色过程中可每隔10当心的翻动脑片。

。

并拍照记录。

结果推断:正常组织被染成红色,梗死区呈灰白色。

二、30-35℃浸泡2~6,使种子充分吸胀。

,沿种胚中心线纵切为两半,将每粒种子的一半分别置于两个培育皿中,备用。

3.可选可将其中一半种子置于沸水中煮沸5,杀死细胞,作为阴性对比。

,以浸没种子为度。

-35℃的恒温箱内保温30-1。

,用自来水冲洗2~3次,马上观看种子着染色状况。

结果推断:有活力的种子被染成红色,阴性对比和无活力种子不被染色。

留意事项:,时间过长会影响脑组织表面脱氢酶的活性从而影响染色效果。

。

~3次,若溶液变红色则不行再用。

。

翻动脑片时肯定要当心,以免破坏脑片形态。

,不行久放。

若需长期保存,可

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