复合产酶菌株的构建及其耐药性分析

复合产酶菌株的构建及其耐药性分析

摩根细菌是一种阴性血清素菌。它通常起源于排尿道和伤口。近年来，它经常导致细菌血崩、脑膜炎、关节炎、心包炎、尿道感染和眼膜炎等医院感染。1材料和方法1.1材料表面1.1.1摩擦菌的检测从该院2008年7月至2013年12月门诊、住院患者呼吸道(痰液、灌洗液)、非呼吸道(血液、胆汁、导管、尿、脓、伤口分泌物、前列腺液等各类送检标本)6588份标本中分离出的摩根摩根菌102株菌株作为受试菌,排除同一患者重复菌株。细菌的分离培养按照全国临床检验操作规程第3版进行,细菌均经VITEK-2Compact自动细菌鉴定仪统一进行鉴定。1.1.2药品化学品检定所需药物资源亚胺培南(IPM)、美罗培南(MEM)、头孢哌酮/舒巴坦(SPS)为英国Oxiod公司产品,氨苄西林/舒巴坦(AMS)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、头孢曲松(CRO)、头孢吡肟(FEP)、头孢西丁(FOX)、阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GEN)、米诺环素(MIN)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LEV),莫西沙星(MXF)、复方新诺明(TSU)纸片均购自中国药品生物制品检定所。1.2方法1.2.1-内酰胺酶活性检测采用冻融裂解法制备粗提酶液,应用改良三维试验法检测AmpC、ESBLs和MBLs三类β-内酰胺酶活性,按文献[5]进行。以大肠埃希菌DH5α2919为AmpC阳性对照,以肺炎克雷伯菌ATCC700603为ESBLs阳性对照,克拉维酸、邻氯西林及EDTA-Na1.2.2厄他培南抑菌圈检测将0.5麦氏浊度单位的大肠埃希菌ATCC25922菌液均匀涂布在MH平板上,中间贴10μg/片厄他培南纸片,将实验菌株以厄他培南纸片为起点,用无菌接种环自纸片外缘向平板边缘以离心方向划线,35℃培养16~17h后观察结果,厄他培南抑菌圈内出现待检菌矢状生长者为阳性。阳性表明产碳青霉烯酶(KPC)。1.2.3菌株抑菌环直径摩根摩根菌分离菌株采用KirbyBauer纸片琼脂扩散法测定菌株对17种抗菌药物的抑菌环直径。标准菌株铜绿假单胞菌ATCC25873进行质控,按美国临床实验室标准研究所(CLSI)规定判断结果。1.2.4统计处理耐药率差异采用χ2结果2.1各类抗菌药检出率及kpc102株摩根摩根菌临床分离株中,单产ESBLs15株,检出率为14.71%;单产AmpC8株,检出率为7.84%;单产金属β-内酰胺酶(MBLs)3株,检出率为2.94%;所有菌株中未检出KPC;同产ESBLs及AmpC6株,检出率5.88%;未发现其他同产酶菌株。2.2产酶与非产酶菌的药物过敏试验的结果和比较产酶与非产酶菌株对17种抗生素的耐药率及比较,见表1(注:由于各产酶菌株株数较少,其耐药率未进行分类比较)。3大耐药菌株的耐药率摩根摩根菌寄生于人和动物肠道,广泛分布于自然界、医院环境中。广泛存在,当机体免疫功能低下、不合理使用广谱抗生素或免疫抑制剂以及各种侵入性操作等均可引起该菌感染。摩根摩根菌天然耐药性严重,如其对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、第一代头孢菌素、头孢呋辛和多粘菌素E均为天然耐药。摩根摩根菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药主要由于产生多种β-内酰胺酶引起我们对102株摩根摩根菌临床分离株研究结果显示,单产ESBLs检出率14.71%;单产AmpC检出率7.84%;单产MBLs检出率为2.94%;所有菌株中未检出KPC;同产ESBLs及AmpC检出率为5.88%;未发现同产其他型类的双产酶菌株及同产ESBLs、AmpC及MBLs三种酶菌株。产酶与非产酶菌株药敏试验结果显示,非产酶菌株亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、莫西沙星、米诺环素耐药率较低,均低于20.0%;其余抗生素的耐药率均低于50.0%。提示,此类菌感染时,抗感染治疗的抗菌药物选择范围较广。文献[7]认为,摩氏摩根菌对第三代头孢菌素和氨曲南体外抗菌活性较高,可以作为临床治疗摩根摩根菌感染的一线药物。摩根摩根菌产酶分离株对亚胺培南、美罗培南培南的耐药率低于13.0%,与非产酶菌株相比,差异无统计学意义(P>0.05);对其余抗生素的耐药率均明显高于非产酶菌株(P<0.05)。因此,摩根摩根菌产上述酶类分离株感染时,亚胺培南、美罗培南培南可作为的首选抗感染药物,这与碳青霉烯类抗生素对极大多数由质粒或染色体介导的β-内酰胺酶都有较高的稳定性,与青霉素结合蛋白亲和力强,导致细菌细胞的延长和溶解,能有效渗透细菌外膜进入周质间隙,并且存在抗生素后效应,具有快速杀菌作用有关。其次可以选择头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、莫西沙星、阿米卡星等抗生素。在实验研究中,我们还发现同产ESBLs+AmpC菌虽然耐药严重,但对亚胺培南、美罗培南培南较为敏感,可选择其为抗感染药物。但文中7株耐亚胺培南耐药的摩根摩根菌对文中所有抗生素呈高度耐药,提示,耐药菌株除存在产β-内酰胺酶的耐药机制外,可能还存在外膜蛋白缺失或数量的减少,引起外膜通透性的改变和(或)主动外排的机制总之,虽然摩根摩根菌