奇异变形杆菌产超广产金属-内酰胺酶检测及其耐药性分析

奇异变形杆菌产超广产金属-内酰胺酶检测及其耐药性分析

奇变形杆菌是一种革兰氏阴性条件的病毒。它是肠球菌（肠球菌也是如此）感染的主要病毒。也可能导致革兰氏病、结膜感染、伤口、呼吸道感染、烧伤、其他部位的感染。1材料和方法1.1细菌培养和鉴定1.1.1受试菌株从义乌市第二人民医院2010年1月至2013年12月门诊、住院患者痰液、血液、导管、尿、分泌物等送检标本中分离出的奇异变形杆菌302株菌株作为受试菌,排除同一患者重复菌株。细菌的分离培养按照《全国临床检验操作规程》(3版)进行,细菌均经VITEK-2Compact自动细菌鉴定仪统一进行鉴定。1.1.2抗菌药物纸片亚胺培南(IPM)、美罗培南(MEM)、头孢哌酮/舒巴坦(SPS)为英国Oxiod产品,氨曲南(ATM)、氨苄西林/舒巴坦(AMS)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、头孢曲松(CRO)、头孢吡肟(FEP)、头孢西丁(FOX)、阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GEN)、呋喃妥因(NIT)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LEV),多粘菌素B(PB)、复方新诺明(TSU)、克拉维酸、邻氯西林及EDTA-Na1.2菌株鉴定及药敏试验1.2.1各类β-内酰胺酶活性检测采用冻融裂解法制备粗提酶液,应用改良三维试验法检测AmpC、ESBLs和MBLs三类β-内酰胺酶活性,按文献[3]进行。以大肠埃希菌DH5α2919为AmpC阳性对照,以肺炎克雷伯杆菌ATCC700603为ESBLs阳性对照。1.2.2Hodge试验挑取大肠埃希菌ATCC25922菌落数个,制成相当0.5号麦氏管(McFarland)浓度菌液,棉拭子浸透,挤去多余液体,均匀涂布在MH平板上,中间贴10μg/片厄他培南纸片,将实验菌株以厄他培南纸片为起点,用无菌接种环自纸片外缘向平板边缘以离心方向划线,35℃培养16~17h后观察结果,厄他培南抑菌圈内出现待检菌矢状生长者为阳性。阳性表明产KPC。1.2.3药敏试验奇异变形杆菌分离菌株采用Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法测定菌株对18种抗菌药物的抑菌环直径。标准菌株铜绿假单胞菌ATCC25873进行质控,按美国临床实验室标准化协会(CLSI)规定判断结果。1.2.4统计学处理耐药率差异采用四格表χ2ls检出情况2.1奇异变形杆菌分离株各种β-内酰胺酶及KPC检出率302株奇异变形杆菌分离菌株单产ESBLs60株,检出率为19.87%;单产AmpC40株,检出率为13.25%;单产KPC3株,检出率为0.99%;所有菌株中未检出MBLs;同产ESBLs及AmpC36株,检出率为11.92%;未发现其他双产酶菌株,未发现同产ESBLs、AmpC及KPC三种酶菌株。3抗菌活性的变化变形杆菌为肠道的正常菌群,广泛存在于泥土、水和被粪便污染的物质中,并可在一定条件下引起各种感染,是导致医源性感染的重要条件致病菌。随着抗生素的不断研发和大量应用,新的耐药菌株不断产生,细菌的耐药性问题也日益成为关注的焦点。β-内酰胺类抗生素,尤其是第三代头孢菌素,因其抗菌作用强、抗菌谱广、毒性低等特点,是治疗革兰阴性菌感染的最重要的抗菌药物,但这些新β-内酰胺类抗生素在临床上广泛应用后耐药菌株随之不断增加,耐药机制的研究备受关注。我们研究发现,奇异变形杆菌分离株单产ESBLs、AmpC及同产ESBLs及AmpC检出率分别为19.87%、13.25%和11.92%;所有菌株中未检出其他类型产酶菌株。提示,该菌产生ESBLs、AmpC等β-内酰胺酶但其不产生MBLs与文献奇异变形杆菌分离株的耐药率结果显示,对亚胺培南、美罗培南、多粘菌素B的耐药率在2.65%~10.26%;对氨曲南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢西丁、头孢吡肟和阿米卡星耐药率在29.80%~43.05%;其余抗生素的耐药率均高于50.00%。非产酶分离株对常用抗生素(呋喃妥因、复方新诺明除外)的耐药率均低于50.00%;其中单产ESBLs株对头孢西丁的耐药率为43.33%,单产AmpC株对头孢吡肟的耐药率为25.00%;产酶分离株对亚胺培南、美罗培南的耐药率较低,对其余常用抗生素的耐药率较高,提示亚胺培南、美罗培南对ESBLs和AmpC株有良好的抗菌活性,这可能与碳青霉烯类抗生素对极大多数由质粒或染色体介导的β-内酰胺酶都有较高的稳定性,与青霉素结合蛋白亲和力强,导致细菌生长繁殖和延伸受抑制,并溶解死亡;能有效渗透细菌外膜进入周质间隙,并且存在抗生素后效应有关;上述药物可作为相应敏感菌的抗感染治疗的首选药物。产ESBLs、AmpC及KPC菌株与非产酶菌株相比,对亚胺培南、美罗培南的耐药率差异无统计学意义(P>0.05),对其余大部分抗生素的耐药率均明显高于非产酶菌株(P<0.01),产酶菌株呈多重耐药,给临床抗感染治疗带来很大的困难。推测产酶菌株引起多重耐药的原因:(1)产ESBLs的奇异变形杆菌在携带编码ESBLs耐药基因的质粒的同时,也带有其他作用机制的抗菌药物如氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类等药物的耐药基因,且导致DNA旋转酶的gyrA基因发生点突变,从而对氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类药物呈现为多重耐药;(2)奇异变形杆菌产生的AmpC酶,属于质粒AmpC酶,常携带大质粒,同时编码对其他类抗生素的耐药性,表现对一代至三代头孢菌素、头霉素、氨基糖苷类及抗假单胞菌青霉素(几乎所有的抗生素)均耐药我们在研究中还发现,3株KPC阳性株仅对多粘菌素B敏感,对其余抗生素均表现为高度耐药性,给临床抗感染治疗带来极大的挑战。有学者研究认为总之,临床微生物实验室在做好奇异变形杆菌分离、培养和鉴定的同时,加强对奇异变形杆菌的耐药性及ESBLs、AmpC及KPC的监测;临床医师依据实验室药敏结果,采取合理有效的用药措施,显