中药制剂中各类化学成分分析

第五章

中药制剂中各类化学成分分析

掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、醌类成分的定性、定量原理与方法。熟悉中药制剂中挥发性成分、木质素类成分的定性、定量原理与方法。了解其他成分（有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、单萜及二萜类、多糖类）的分析方法。【目的要求】学习方法结构性质分析方法结构：母核、官能团、分子量等物理化学性质：溶解性、酸碱性、挥发性、氧化还原性、旋光性、光谱特性等分析方法：总类成分：化学分析法、分光光度法单一成分：各种色谱法（GC、HPLC、HPCE、TLCS、SFC等）第一节生物碱类成分分析一、概述1、概念：生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合物（如氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。中药名称主要生物碱成分中药名称主要生物碱成分山豆根制川乌马钱子延胡索苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、金雀花碱乌头碱、次乌头碱、新乌头碱马钱子碱、番木鳖碱（士的宁）、伪马钱子碱、伪番木鳖碱延胡索乙素、延胡索甲素、原阿片碱、黄连碱苦参麻黄黄连黄柏防己苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化苦参碱麻黄碱、伪麻黄碱、去甲麻黄碱、甲基麻黄碱小檗碱、巴马丁、药根碱、黄连碱小檗碱、药根碱、木兰花碱粉防己碱、防己诺林碱、轮环藤酚碱、木兰碱2、含生物碱成分的常用中药：1、溶解性大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂；与酸结合成盐后水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性有差异；季铵型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于有机溶剂；含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛性碱液。二、理化性质2、沉淀反应大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于水的复盐或分子复合物。生物碱沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子有机酸马钱子散中生物碱成分的鉴别取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时，滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋钾试液1~2滴，即生成黄棕色沉淀。

3、显色反应生物碱在一定pH条件下可与一些酸性染料（多为磺酸肽类）生成有色络合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出结构中具有酯键的酯碱如乌头碱等可与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色；这些特点可用于中药制剂中生物碱成分的分析

4、紫外光谱特性结构中具有共轭体系的生物碱均有紫外吸收结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的pH有关。1、一般理化鉴别沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，此反应一般在酸性水溶液中进行制备样品供试液时必须净化处理，防止假阳性结果三、定性鉴别2、薄层色谱法①吸附剂：硅胶、氧化铝；②展开剂：多以氯仿、苯等低极性溶剂，加入其他溶剂调整展开剂的极性；③由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成盐，使Rf值很小或拖尾、形成复斑等。④显色剂：常用改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂之后再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更加清晰。如有荧光，不用显色⑤亦可用碘蒸汽、硫酸铈、碘铂酸等其他的试剂显色。3、纸色谱法可用于生物碱盐或游离碱的鉴别4、HPLC：保留时间定性5、GC：可用于小分子生物碱的鉴别（一）总生物碱的含量测定1、化学分析法①主要使用酸碱滴定法。②强碱滴定生物碱盐时，在70%~90%的乙醇介质中终点比在水中明显，因此常将生物碱盐溶于90%乙醇，再用标准碱乙醇液滴定。③若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法进行④要求：总生物碱的纯度较高，用于药味少成分简单制剂的测定四、含量测定2、分光光度法（1）直接测定法①不经过化学反应、利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色测定的方法。②一般用于药味较少、干扰小的中药制剂中总生物碱的含量测定。（2）酸性染料比色法原理：

BH++In-

→BH+·In-（水相）→BH+·In-（有机相）关键：酸性染料的选择：甲基橙、溴麝香草酚兰（BTB）和溴甲酚绿等；pH值的选择：与生物碱和酸性染料的性质有关。有机溶剂的选择：一般用氯仿、二氯甲烷水分的干扰及消除（3）雷氏盐比色法原理：

BH++[Cr(NH3)2(SCN)4]-→

BH[Cr(NH3)2(SCN)4]测定方法：（复盐沉淀）复盐沉淀→溶于丙酮（或甲醇）→直接比色测定样品＋定量过量的雷氏盐→过滤→滤液→比色测定λmax=520nm（4）异羟肟酸铁比色法用于含有酯键结构的生物碱的测定（二）单体生物碱成分含量测定1、TLCS①生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定；②选用的吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似；③使用改良碘化铋钾等作为显色剂时，必须完全挥干展开剂后（尤其在碱性环境下展开的）才可喷洒，否则背景深、反差小，影响测定。2、HPLC①以反相高效液相色谱应用较多；②在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅醇基的影响，使生物碱分析易产生保留时间延长、峰形变宽、拖尾；③可在流动相中加入硅醇基抑制剂、离子对试剂等措施以克服游离硅醇基的影响，满足定量分析的要求；④中药制剂中生物碱成分进行高效液相色谱法测定时，使用较多的是紫外检测器。3、GC①只适用于有挥发性的，遇热不分解的生物碱类，如麻黄碱、槟榔碱、苦参碱和颠茄类生物碱等②制备供试品溶液时一般应采用冷提取，净化过程也要避免加热以防成分的流失，最后需用氯仿等低极性有机溶剂为溶媒制备成供试液。五、常见生物碱成分分析化合物名称结构式

理化性质、结构及光谱特征常用定量分析方法小檗碱（黄连素）Berberine(Umbellatine)（C20H18NO4；336.37）异喹啉类原小檗碱型生物碱、季铵型生物碱、有共轭体系。黄色结晶、碱性较强，易溶于热水或热乙醇，微溶或不溶于苯、氯仿、丙酮，其盐酸盐水中溶解度小。mp：1450℃UV：225，270，331。

重量法、滴定法分光光度法薄层扫描法薄层荧光扫描法高效液相色谱法脉冲极谱法流动色谱分析法酶法化合物名称结构式

理化性质、结构及光谱特征常用定量分析方法士的宁（番木鳖碱）Strychnine（C21H20N2O2;334.40）单萜吲哚类生物碱、环叔胺显碱性、酰胺不显碱性。难溶于水，可溶于乙醇，甲醇。易溶于氯仿，微溶于乙醚。mp：268～290℃。UV：282。重量法滴定法分光光度法一阶导数分光光度法薄层扫描法高效液相色谱法

化合物名称结构式

理化性质、结构及光谱特征常用定量分析方法乌头碱Aconitine（C34H47NO11;645.76）二萜类酯型生物碱。易溶于氯仿、苯、无水乙醇和乙醚，难溶于水、微溶石油醚mp：204℃UV:281,273,230,202．滴定法酸性染料比色法一阶导数紫外分光光度法薄层扫描法高效液相色谱法第二节黄酮类成分分析一、概述1、定义：黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮（2-phenylchromone）类化合物，现在则是泛指两苯环通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。中药名称主要黄酮类成分中药名称主要黄酮类成分黄芩黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素山柰山柰酚、山柰素槐米芦丁、槲皮素广藿香商陆素、芹菜素葛根葛根素、大豆苷、大豆苷元、7-木糖苷葛根素白果山奈酚、槲皮素、芦丁枳实橙皮苷、川陈皮素、新橙皮苷、5-邻-去甲基川陈皮素高良姜高良姜素、山奈素、槲皮素茵陈茵陈黄酮、芫花素、槲皮素补骨脂补骨脂查耳酮、异补骨脂查耳酮山楂槲皮素、金丝桃苷金线草槲皮素、山奈酚2、含黄酮类成分的常见中药1、结构特征苯甲酰基桂皮酰基240~280nm300~400nm二、结构特征及理化性质2、溶解度①黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异。②游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中；③黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶于苯、氯仿等。3、酸碱性酸性：黄酮类化合物因分子中多有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酸性强弱：7,4‘-二羟基>7-或4‘-羟基>一般酚>5-羟基碱性氧原子的性质

4、显色反应盐酸-镁粉（锌粉）反应金属盐类试剂的配合反应可用于鉴别，但要避免假阳性结果

1、理化鉴别盐酸-镁粉（锌粉）反应金属盐类试剂的配合反应2、色谱鉴别吸附剂：硅胶、聚酰胺硅胶色谱分离弱极性化合物较好；聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳；纤维素薄层则适用于分离多糖苷混合物。显色反应：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。三、定性鉴别1、总成分的含量测定直接测定：常用芦丁作对照测定显色测定：常用铝盐做显色剂2、单体黄酮成分的含量测定TLCSHPLC四、含量测定第三节三萜皂苷类成分分析一、概述1、概念三萜皂苷是三萜皂苷元和糖、糖醛酸所组成，是一类结构比较复杂的化合物。第三节三萜皂苷类成分分析三萜是由30个碳原子组成的萜类化合物，大多数三萜化合物均可看作由6个异戊二烯单位联结而成。游离三萜类化合物通常多不溶于水，而与糖结合成苷后，则大多可溶于水，振摇后可生成胶体溶液，并有持久性似肥皂溶液的泡沫，故有三萜皂苷之称。萜类是概括所有异戊二烯的聚合物以及它们衍生物的总称,通式(C5H8)n2、含三萜皂苷类成分的常用中药

二、结构及理化性质甘草酸人参皂甙(A型)二、结构及理化性质1.溶解度可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中，几乎不溶于或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂。在含水丁醇或戊醇中溶解度较好，且又能与水分成二相，可利用此性质从水溶液中用正丁醇或戊醇提取皂苷，借以与亲水性的糖、蛋白质等分离。三萜皂苷元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等有机溶剂，而不溶于水。2、显色反应醋酐-浓硫酸反应（Liebermann-Burchard反应）；五氯化锑反应(Kahlenberg反应)；三氯醋酸反应(Rosen-Heimer反应)；冰醋酸-乙酰氯反应(Tschugaeff反应)；氯仿-浓硫酸反应(Salkowski反应)。金属盐类反应：+铅、钡、铜盐→沉淀药物分析学科三、定性鉴别1、理化鉴别①泡沫反应：多用于检验含有皂苷的原料药；②化学显色反应：仅在组成药物较少的中药制剂中使用。2、TLC吸附剂：硅胶，氧化铝、硅藻土等。展开剂：氯仿-甲醇-水（13：7：2）（10℃以下放置，下层）氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）（同上）显色剂：不同浓度的硫酸乙醇液最常用。四、含量测定（一）总成分分析1、重量法

①该法主要用于含皂苷的原料药质量控制。②在中药制剂中，当处方中药味含皂苷类成分较多时，常用正丁醇作溶剂，测定正丁醇浸出物。2、比色法：①常用显色剂有：香草醛-硫酸、香草醛-高氯酸、醋酐-硫酸、高氯酸、浓硫酸以及亚甲蓝等。②注意测定单体皂苷（或皂苷元）与总皂苷的换算系数。（二）单体成分分析1、TLC薄层洗脱-比色法薄层扫描法2、HPLCHPLC-UV：人参皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外区的末端；有紫外吸收的甘草酸、远志皂苷，灵敏度高。HPLC-ELSD：检测三萜皂苷类成分的应用日渐广泛五、常见三萜皂苷类成分第四节醌类成分分析一、概述中药中醌类化合物主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四种类型。其中以蒽醌类化合物最为多见，包括蒽醌及其不同还原程度的产物和二聚物，如蒽酚、氧化蒽酚、蒽酮、二蒽酮、二蒽醌等。这些化合物在中药中可游离存在，也可与糖结合成苷，称为蒽苷。二、结构特征及理化性质1、结构类型及特征苯醌类苯醌类化合物从结构上可分为邻苯醌及对苯醌两大类。因前者不稳定，故天然存在的苯醌化合物多为对苯醌的衍生物，且在醌核上多有-OH、-OCH3、-CH3等基团或更长的烃类侧链。

对苯醌邻苯醌萘醌类萘醌化合物从结构上考虑可以有α(1,4)、β(1,2)及amphi(2,6)三种类型。但迄今为止从自然界得到的几乎均为α-萘醌类。

α-（1，4）萘醌β-（1，2）萘醌amphi-(2,6)萘醌

菲醌类天然菲醌衍生物包括邻醌（A）及对醌（B）两种类型。（A）（B）蒽醌类蒽醌类成分包括蒽醌衍生物及其不同还原程度的产物，如氧化蒽酚、蒽酚、蒽酮及蒽酮的二聚物等。蒽醌氧化蒽酚蒽酮蒽酚2、含醌类成分的常用中药五、常见醌类成分化合物名称

结构式

理化特征

常用定量方法

大黄酸(Rhein)（C15H8O6，284.21）

为黄色针状结晶（升化法），mp321℃～322℃，330℃分解。几乎不溶于水，溶于碱和吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。UVλmaxMeOHnm(ε)：229(36800),258(20100),435(11100)。高效液相色谱法薄层扫描法

化合物名称

结构式

理化特征

常用定量方法

大黄素(Emodin)（C15H10O5，270.23）为橙色针状结晶，mp265℃～267℃。几乎不溶于水，溶于乙醇及氢氧化钠、碳酸钠、氨水等碱液中。25℃时溶于（g/100mL）:乙醚0.140、氯仿0.071、四氯化碳0.010、二硫化碳0.009。UVλmaxEtOHnm(Logε)：220（4.55），252（4.26），265（4.34），289（4.34），437（4.10）。

高效液相色谱法薄层扫描法

二、理化性质1、物理性质：存在的形态，升华性，光不稳定性2、溶解性：游离醌类多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂，微溶于或不溶于水。结合成苷后极性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在热水中也可溶解，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等非极性溶剂中。3酸碱性蒽醌类化合物分子中多具有酚羟基，故具有一定酸性，在碱性水溶液中易溶，但加酸酸化时又可重新沉淀析出，所谓碱提取—酸沉淀即是根据这个道理进行的。根据以上性质，醌类化合物的提取可采用碱提取-酸沉淀法。

4、显色反应醌类的颜色反应主要取决于其氧化还原性质以及存在的酚羟基的性质。(1)碱性条件下的呈色反应：羟基蒽醌类在碱性溶液中会引起颜色改变并加深。(2)与金属离子的反应:+Pb2+/Mg2+→配合物(3)与对亚硝基二甲基苯胺反应：

9、10位未取代的羟基蒽酮化合物+对亚硝基二甲基苯胺→紫，绿，蓝，灰

1、显色反应2、升华法3、TLC吸附剂：硅胶展开剂：乙酸乙酯-甲醇-水（100︰16.5︰13.5）适于分离蒽醌苷元和蒽醌苷，不含水或甲醇的混合溶媒适合于分离蒽醌类的苷元。显色方法：喷碱性试剂，喷醋酸镁甲醇液、氨气熏及在紫外灯下观察荧光，可见光下直接观察色斑。三、定性鉴别1、游离蒽醌的测定：弱极性溶剂提取后，加碱比色2、结合蒽醌的测定：极性溶剂提取，水解测苷元先酸水解后，非极性溶剂提取苷元后测定3、单体成分的含量测定TLCSHPLC-UV四、含量测定例2、复方丹参片中丹参酮ⅡA含量测定—高效液相色谱法色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（73：27）为流动相；检测波长为270nm。对照品溶液的制备：精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50mL棕色量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1mL中含丹参酮ⅡA40µg）供试品溶液的制备：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µL，注入液相色谱仪，测定，即得。第五节挥发性成分分析一、概述挥发性成分是指中药中一类具有芳香气并易挥发的成分，其化学组成复杂，主要包括挥发油类成分和其他分子量较小、易挥发的化合物。中药名称

挥发油中主要成分

中药名称

挥发油中主要成分

厚朴辛夷肉桂陈皮川芎薄荷广霍香β-桉油醇、α-蒎烯、柠檬烯、醋酸龙脑酯柠檬烯、丁香酚、桉油精、α-蒎烯桂皮醛、桂皮酸、乙酸苯丙酯柠檬烯、柠檬醛藁本内酯、3-丁叉苯酞、香桧烯薄荷酮、薄荷脑、乙酸薄荷酯广霍香醇、苯甲醛、丁香酚、桂皮醛羌活

细辛

豆蔻

丁香

α-蒎烯、β-蒎烯、柠檬烯、萜品烯醇-4、甲基丁香酚、黄樟醚、细辛醚优香芹酮、α-蒎烯、β-蒎烯桉油精、龙脑、樟脑草烯松油烯、蒎烯丁香酚、水杨酸甲酯、α-蒎烯、β-蒎烯、乙酰丁香酚含挥发油成分的常用中药二、结构及理化性质薄荷醇桂皮醛柠檬烯1、溶解性：易溶于有机溶剂2、显色反应：酚类+三氯化铁→蓝，蓝紫，绿羰基+苯肼、羟胺→结晶体醛类+硝酸银胺→银镜内酯类+亚硝酰铁氰化钠+NaOH→红色并逐渐消失奧类+浓硫酸→蓝，紫三、定性鉴别TLC吸附剂：硅胶、氧化铝展开剂：石油醚、正己烷（加少量乙酸乙酯或苯）显色剂：茴香醛-浓硫酸试剂（通用型），若干扰较多，选用专属性强的显色剂GC：对照品对照法定性GC-MSGC-FTIR四、定量分析总成分分析：蒸馏法单体成分分析：GC（首选）HPLCTLCSGC-MSGC-FTIR第六节其他成分分析木脂素成分分析一、概述木脂素是一类在生物体内由二分子苯丙素衍生物聚合而成的化合物。含木脂素类成分的常用中药：中药名称

主要成分

中药名称

主要成分

五味子

牛蒡子连翘远志

五味子甲素五味子乙素五味子醇甲五味子醇乙牛蒡子苷牛蒡子苷元拉帕酚连翘脂素连翘脂苷中国远志脂酚厚朴细辛杜仲黑芝麻厚朴酚

和厚朴酚细辛脂素

芝麻脂素（+）-1-羟基松脂素葡萄糖苷芝麻脂素

二、结构及理化性质CH3CH3OCH3OCH3H3COH3COH3COH3CO牛蒡子苷(元)五味子甲素1、溶解性游离—易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、乙醇等成苷时—可溶于甲醇、乙醇等2、显色反应通用型显色剂：磷钼酸乙醇、硫酸乙醇Labat反应：+硫酸+没食子酸→蓝绿Ecgrine反应：+硫酸+变色酸→蓝紫三、定性分析TLC吸附剂：硅胶展开剂：亲脂性溶剂（苯、氯仿，加甲醇等）显色：香草醛试液，浓硫酸试液，磷钼酸乙醇溶液、碘熏四、含量测定总成分：变色酸比色法单体成分：TLCSHPLC药物分析学科五、常见木脂素类成分香豆素是具有苯骈吡喃酮母核的内酯类衍生物广泛存在于芸香科和伞形科的植物中。1、主要结构及理化性质补骨脂素茵陈内酯异羟肟酸铁反应：酚羟基-三氯化铁显色反应：紫外光谱特性：λmax=300nm，母核有供电子基团取代可产生荧光香豆素类成分2、定性鉴别荧光法薄层荧光鉴别七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素的鉴别取本品10g，研细，加醋酸乙酯20ml、盐酸0.5ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。薄层条件：硅胶G薄层板，展开剂正已烷—醋酸乙酯（4:1），显色剂为10%氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯365nm下检视。3、含量测定可见-紫外分光光度法：荧光光度法：专属性强TLCS：薄层荧光扫描HPLC：C18，甲醇-水，UVDorFDGC：分子量小，具有挥发性乌蛇止痒丸中蛇床子素的含量测定色谱条件固定相：OV-1，2m×3mmID玻璃柱；气体流速：N230ml/min，H250ml/min，Air500ml/min；柱温：200℃；进样器和检测器温度：260℃。供试品溶液和对照品溶液的制备精密称取内标物正廿三烷适量，加氯仿溶解，制成每1ml约含6mg的溶液，作为内标溶液。取乌蛇止痒丸适量，研成细粉，精密称取约5g，置索氏提取器中，精密加入内标溶液5.0ml，加氯仿80ml，回流至近无色。将提取液浓缩至数毫升，通过3g小型硅胶柱，用氯仿洗脱至10ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，作为供试品溶液。称取蛇床子素约25mg，加入内标溶液5.0ml，振摇使溶解，摇匀，作为对照品溶液。校正因子的测定精密吸取对照品溶液，连续进样3～5次，每次2μl，按峰面积计算校正因子。样品测定精密吸取供试品溶液，连续进样3～5次，每次2µl，用校正因子计算样品含量。1、定性鉴别吸附色谱分配色谱2、含量测定酸碱滴定法→总有机酸分光光度法高效液相色谱法薄层色谱法其他方法有机酸类成分1、鉴别TLC：硅胶、纤维素、硅藻土

PC：展开剂：正丁醇、水混合体系显色剂：苯胺-邻苯二甲酸的正丁醇饱和水溶液等CE：滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳HPLC：氨基柱GC-MS：酸水解→中和→柱前衍生→GC-MS

2、提取分离：水提醇沉※防止水解，注意消除酶、酸、碱等的影响多糖3、含量测定1）总多糖的测定（例题P153）3,5-二硝基水杨酸比色法→棕红色（550nm）苯酚-硫酸法→蓝绿色（480-490nm）蒽酮-硫酸法→黄绿色（620nm）2）单体多糖的含量测定高效凝胶液相色谱法→确定分子量高效液相色谱法→确定组成色谱柱：氨基键合相硅胶柱，或普通硅胶柱检测器：示差折光检测器第七节含动物药的中药制剂分析一、牛黄及其制剂分析天然牛黄人工牛黄：由牛胆粉、胆酸、猪去氧胆酸、胆红素、胆固醇、无机盐等配制而成人工培育牛黄（一）牛黄的化学成分胆色素：胆红素等胆汁酸类：胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸等脂类蛋白质、肽、氨基酸类无机元素（二）胆汁酸的性质和化学反应多以肽（甘氨胆酸、牛磺胆酸）的形式存在溶解性成盐－－易溶于水游离－－易溶于乙醇、乙醚，可溶于乙酸、丙酮、碱液Pettenkofer反应（冰水冷却）--紫色胆酸（CA）（三）胆红素的性质及化学反应溶解性：溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳、碱液，微溶于乙醇、乙醚，成盐后易溶于水不稳定性，易被氧化VandenBergh反应：（重氮化反应）蓝紫色(强酸性)→红色(pH2-5)→绿色(pH>5.5)

重氮化试剂：对氨基苯磺酸（四）定性鉴别胆酸、去氧胆酸胆红素提取溶媒三氯甲烷、乙醇、甲醇三氯甲烷、乙醇混合液吸附剂硅胶G硅胶G展开剂异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸显色剂硫酸乙醇溶液、磷钼酸乙醇溶液（五）含量测定1、胆酸的测定分光光度法--去氧胆酸TLCS--胆酸2、胆红素的测定分光光度法（重氮化反应）HPLC二、麝香及其制剂分析（一）化学成分及性质大环化合物甾族化合物胆固醇、酯、蜡蛋白质、肽、氨基酸无机盐其他成分麝香酮（三）定量分析GCHPLC（二）定性鉴别GC紫外光谱法乙醇提取液→220nm,270nm乙醚提取液→231nm,265nm正己烷提取液→220nm,265nm薄层色谱法梅花点舌丸中麝香的薄层鉴别取本品3g，研细，加乙醚10ml，密塞，振摇10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液。薄层条件：硅胶G，石油醚-二氯甲烷(2:3)，二硝基苯肼试液麝香保心丸中麝香的气相色谱鉴别取本品2g，研碎，加乙醚5ml，振摇，超声处理5分钟，离心，取上清夜，作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加乙醚制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(附录VIE)试验，以聚乙二醇(PRG)-20M和甲基硅橡胶为混合固定相，涂布浓度分别为1.64%和1.32%，柱长为2m，柱温为180℃。分别取对照品溶液与供试品溶液适量，注入气相色谱仪。供试品色谱中应呈现与对照品色谱保留时间相同的色谱峰。三、蟾酥及其制剂分析（一）化学成分蟾蜍甾二烯游离型--蟾毒配基结合型—蟾蜍毒素等强心甾烯蟾毒类吲哚碱类蟾毒配基（二）定性鉴别1、显色反应--只针对原料2、PC3、TLC4、UV固定相甲酰胺丙二醇-水4：1展开剂苯-氯仿6：4显色剂20%三氯化锑氯仿液，加热显色（三）含量测定1、分光光度法（例题P172）差示分光光度法：不经分离直接测定百分吸收系数法：2、TLCS：应用较为广泛3、GC：经过适当的预处理，FID，内标或外标定量4、HPLC：UV检测，灵敏度高四、斑蝥及其制剂分析（一）化学成分斑蝥素、脂肪、树脂、甲酸、色素、挥发油、甲壳质、无机元素（二）定性鉴别