hplc法同时检测苯磺酸氨氯地平中7个杂质

hplc法同时检测苯磺酸氨氯地平中7个杂质

苯磺酸氨基丙烯酸酯是美国辉瑞制药公司在20世纪80年代中期开发的一种新型抗高血压药物二羟吡啶。它主要用于治疗高血压和心绞痛。这是治疗高血压的首选药物之一。该药在合成时以及制剂的生产、贮存过程中,可能会产生工艺杂质和降解杂质(共有7个),分别为氨氯地平杂质A、B、D、E、F、G、H。因此控制这些杂质在本品中的含量对保证用药安全具有重要意义。其有关物质检测方法EP9.01杂质对照品、苯磺酸氨氯地平片安捷伦1260高效液相色谱仪;十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。氨氯地平杂质A、B、D、E、F、G、H对照品(深圳博泰尔公司);苯磺酸氨氯地平对照品(中国食品药品检定研究院);苯磺酸氨氯地平片(规格5mg,批号1601201,亚宝药业);甲醇、乙腈为色谱纯;磷酸、氨水为分析纯;水为纯净水。2方法和结果2.1条件1色谱柱:C2.2溶液的制备2.2.1稀释剂取流动相A和B,以75∶25比例混合,作为稀释液。2.2.2空白辅料溶液称取按照处方比例混合的空白辅料细粉适量,置50mL量瓶中,加稀释液约40mL,超声处理30min,取出,放冷,用稀释液稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为空白辅料溶液。2.2.3标准物质：氨基氯二平取苯磺酸氨氯地平对照品适量,精密称定,用稀释液配成浓度为10μg·mL2.2.4标准物质的杂质对照溶液分别取氨氯地平杂质A、B、D、E、F、G、H对照品适量,精密称定,分别用稀释液配成浓度为2μg·mL2.2.5杂质浓度的配制称取苯磺酸氨氯地平对照品约14mg(相当含氨氯地平10mg),精密称定,置10mL量瓶中,加稀释剂适量使其溶解,再加入各杂质贮备液适量,用稀释液配成各杂质浓度分别为2μg·mL2.3方法学的检验2.3.1系统适用性试验和色谱峰干扰试验在“2.1”色谱条件下依次进样稀释液、空白辅料溶液、系统适用性溶液、氨氯地平对照品溶液、各杂质对照品溶液和供试品溶液,结果表明,稀释液和空白辅料溶液在氨氯地平及其7个杂质出峰位置处均无显著色谱峰干扰。见图1。2.3.2系统适用性考察在“2.1”色谱条件下,对氨氯地平对照品溶液连续进样6针,峰面积RSD为0.1%,小于5.0%,在系统适用性溶液中,氨氯地平和各杂质间的最小分离度为2.47,大于1.5,该系统适用性良好。2.3.3检测限和定量限取氨氯地平对照品溶液和各杂质对照品溶液,经逐级稀释制成检测限(LOD,S/N≥3)和定量限(LOQ,S/N≥10)溶液,在“2.1”色谱条件下进行检测,各组分的检测限浓度均小于供试品浓度的0.01%,各组分的定量限浓度均小于供试品浓度的0.03%,能够满足所有杂质的质量控制要求,方法灵敏度良好。见表1。2.3.4定量限取氨氯地平对照品溶液和各杂质对照品溶液适量,分别从各杂质定量限到限度浓度150%范围内,取不少于5个浓度的对照品溶液,按“2.1”色谱条件测定,以各对照品的峰面积为纵坐标(Y),以各对照品浓度为横坐标(X,μg·mL2.3.5杂质校正因子根据“2.3.4”项下方法分别对各组分做两条线性回归方程,用氨氯地平与各杂质线性回归方程斜率比值计算杂质校正因子,取两次校正因子的平均值来确定各杂质的校正因子,经计算可知,杂质A、D、G、H的校正因子分别为0.7、2.2、0.8、1.3;杂质B、E、F的校正因子均为1.0。二次的校正因子的测定误差极小,说明该方法的耐用性好,使用自身对照准确度高。2.3.6色谱条件下杂质的测定由于样品中常不含有所有杂质,为证明该法对所有符合质量标准的产品适用,在测定样品时同时测定加入杂质(加入100%限度)的样品,在“2.1”色谱条件下由两位实验员分别于不同时间使用不同仪器和色谱柱、平行制备6份供试品溶液和6份限度杂质100%供试品溶液,结果显示,在实验员A和B的6份供试品溶液中,杂质D%和总杂%的RSD(n=6)和RSD(n=12)均小于18.0%;在6份杂质限度100%供试品溶液中,各杂质回收率均在80.0%～120.0%,且RSD(n=6)和RSD(n=12)均小于10.0%,精密度良好,能够满足质量的控制要求。2.3.7加样回收率各组分的检测结果在处方比例混合的空白辅料中,分别加入从LOQ到限度浓度150%范围的各组分,计算各加样回收率,各组分在LOQ水平对应回收率在86.5%～124.9%,在限度50.0%～150.0%对应得回收率在93.2%～115.7%,12份回收率的RSD%均小于7.3%,结果表明方法准确度较高。见表3。2.3.8溶液稳定性考察取“2.2.3”配制的氨氯地平对照品溶液和“2.2.6”配制的供试品溶液,在“2.1”色谱条件下考察溶液稳定性,结果表明,氨氯地平对照品溶液在室温下放置69h稳定性良好(与0h相比回收率为101.3%),供试品溶液在57h内稳定性良好(与0h相比各杂质变化率均小于10.0%),溶液稳定性良好。2.3.9耐试验通过调整色谱柱、柱温(±5℃)、波长(±2nm)、流速(±0.1mL·min3滤膜材质的选择3.3三乙胺是HPLC法常见的添加剂,但其噪音很大,而且对柱有一定的损害,现在使用封尾处理的色谱柱可以达到相同的效果,鉴于此没有采用《中国药典》3.1实验分别采用PTFE材质和尼龙6材质为滤膜进行吸附考察,发现后者过滤时出现保留时间为42min的未知峰,且该峰与杂质A相邻,分离度大于2.2,经过查证为滤膜引入的峰,且与弃去初滤液的体积有关。滤膜材质选择不当