医学免疫学- 免疫学检测技术

免疫学检测技术Immunodiagnosis第一节抗原或抗体检测I.Detectionofantigensorantibodies一、抗原-抗体反应的特点Specificity（一）高度特异性

Cross-reaction:commonantigen

交叉反应：共同抗原

Antiserumabsorption

抗血清吸收

1stantibody&2ndantibody

一抗；二抗Reversibility/invertibility:（二）可逆性non-covalent,surface-binding,dissociable

非共价、表面结合，可解离complementarycapacity:affinity;avidity互补程度：亲和力；亲合力Visibility（三）可见性的条件Compatibleconcentrationsofantigenandantibodycombinedinproportionatornearequivalence[Antigen:multivalent;Antibody(IgG):divalent]

比例适合：抗原多价，抗体2价。交织成网。Phvalue;Temperature;Ionicconcentration

条件适宜：酸碱度、温度、离子浓度Adequateconcentration,bindingstrength;reactiontime

足够浓度、结合强度和反应时间Prozonephenomenon

前带现象二、抗原-抗体反应的应用Terms术语Serologicalreaction血清学反应Qualitativeanalysis定性Quantitation定量Orientation定位Titration滴定Titer效价/滴度三、常用的抗原-抗体反应技术经典技术中和反应补体结合反应凝集反应沉淀反应I)Agglutination（一）凝集反应：颗粒性抗原或包被有可溶性抗原的颗粒

+相应抗体

肉眼可见的凝集块1.直接凝集颗粒性抗原+相应抗体玻片凝集：抗原定性（ABO血型）试管凝集：抗体定量（肥达反应）2.间接凝集包被有可溶性抗原的颗粒

+相应抗体

红细胞（间接血凝）；乳胶（间接乳凝）

Coombs’Test:红细胞（Rh抗原）+不完全抗体+抗人球蛋白3.派生的试验

反向间接凝集反应：包被抗体的颗粒+抗原间接凝集抑制反应：（乳胶妊娠试验）

抗体+未知抗原+包被有相应可溶性抗原的颗粒凝集？HaemagglutinationII)Precipitation（二）沉淀反应可溶性抗原+相应抗体

肉眼可见的沉淀物

使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散1.单向免疫扩散：抗原的定量（Ig、C3）2.双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析3.免疫电泳：电泳+双向免疫扩散（抗原分析）4.对流电泳：双向免疫扩散+电泳（抗原/抗体定性）5.火箭电泳：单向免疫扩散+电泳（抗原定量）免疫比浊：抗体+递增量抗原比浊（抗原定量）III)ImmunolabellingTechniques

（三）免疫标记技术标记物：荧光素、酶、放射性核素、电子致密物质、化学发光物质标记对象：抗原或抗体用途：定性、定量、定位免疫荧光法（IFA）

荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位（1）直接荧光法（2）间接荧光法：荧光素一抗荧光素二抗对每种抗体作标记不必标记每种抗体特异敏感测Ag测Ag/Ab免疫荧光法2.酶免疫测定（EIA）:ELISA与酶免疫组化（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原（2）间接法ELISA：查抗体（3）BAS-ELISA：Biotin-Avidin-酶放大系统（4）ELISPOT测定法：__包被物待测物测定结果___

抗CK抗体CK分泌细胞单一CK已知抗原B细胞特异B细胞（5）酶免疫组化*酶标抗体+组织/细胞（未知抗原）+形态学检查*免疫组化技术：可对抗原定性、定量、定位酶免疫组化：HRP免疫金银组化：胶体金颗粒免疫电镜技术：HRP、胶体金、铁蛋白双抗体夹心法、间接法ELISA间接法ELISAELISA操作图可调移液器8孔道可调移液器3.放射免疫测定（RIA）常用125I，测定微量物质4.化学发光免疫分析常用鲁米诺，测定超微量物质5.免疫印迹法（WesternBlotting）先做凝胶电泳将蛋白质分区再将蛋白质转移至固相载体后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定第二节免疫细胞的测定一、淋巴细胞的分离与类型鉴定（一）血细胞分离

外周血密度梯度离心法外周血单个核细胞（淋巴细胞+单