【金银花的真伪鉴别研究6000字（论文）】

金银花的真伪鉴别研究目录TOC\o"1-2"\h\u10152一、前言 14788二、金银花的真伪鉴别 226424（一）来源鉴别 223969（二）性状鉴别 316307（三）显微鉴别 39736（四）薄层色谱鉴别 430744三、高效液相色谱法测定金银花中有效成分的含量 612971（一）实验材料与仪器 628892（二）实验方法 611262（三）方法学考察 76952（四）含量测定 89956四、讨论 81842五、结论 928210参考文献 10摘要：目的：为了规范金银花的市场应用，我们开始对金银花进行真伪鉴别与质量研究。方法：通过薄层色谱法制作薄层板,放在紫外灯下观察荧光斑点；用二甲基乙腈-0.4%的磷酸水溶液(13:87)作为流动相,十八烷基硅烷键合硅胶作为填充相对绿原酸进行高效的液相色谱法。结果：通过几种鉴别的方法可以鉴别出金银花的真假。绿原酸的浓度在0.10~1.0μg范围内与峰面积之间呈良好的线性关系;精密度RSD为1.58%；重复性RSD为0.934%。结论：薄层色谱法更容易看出真伪区别且金银花中绿原酸可以作为判断质量差异的重要因素。关键词：金银花；薄层色谱鉴别法；绿原酸；高效液相色谱法一、前言金银花是一种大家都很熟悉的中药。它在三月开花，五出，微香，带红色的花梗。它的花朵在初期开始时是淡淡的白色,一两天后就会变成淡黄色,所以它被称为金银花。又有一面第二朵小花,两朵雄蕊在枝头外露,成对相间,形影不离,仿佛雌雄同舞，故又称鸳鸯藤。金银花属寒、甘,入肺、心、胃中,具有清热、解毒、消炎的作用。主治膨胀下病,温病发热,肿瘤等症。对于头晕、口渴、多汗烦症、肠炎、腹泻、麻疹、肺炎、乙脑、流耳、化脓性扁桃体炎等均有一定的疗效。金银花属于忍冬科，而忍冬属植物约有200多种[1]，由于同一属有许多种，往往一件东西有多个名称，所以商品市场也总是混乱。并且收录在《中华人民共和国药典》中。金银花是一种金银花科植物金银花的干燥花蕾或初次盛开的花,具有清热解毒,疏散风热的作用[2]。随着忍冬科植物的广泛应用和人民生活水平的不断上升,医药、食品行业和其他行业的也开始不断从金银花中做了大量的实验研究,它已广泛应用于食品、医药、保健品等领域,但越来越多的伪造也争相出现。将金银花,山银花和细毡毛忍东从来源鉴别，性状鉴别，显微鉴别及薄层色谱法进行详细分析。金银花主要分布于中国的各个省份,种植的地区主要是集中于山东、湖北、江西、河南、河北、广东、陕西等。由于温度、湿度、采收时间和加工方法的不同，不同来源的金银花质量也会产生差异，从而导致金银花中有效成分含量的差异。有效成分含量的差异也会产生提取结果一定的误差，对品质也会产生一定的好坏影响。刘杨等对绿原酸的含量研究实验结果表明,不同地源的金银花中绿原酸的含量也是各自不相同的,从高至低分别为山东平邑金银花>山东平邑地产金银花>山东平邑大毛金银花>安国四季金银花>山东平邑九丰一号>重庆万县金银花>河南南阳金银花>山东平邑鸡爪花>金翠雷四季金银花>陕西高洛金银花>山东平邑四季金银花>河北平邑四季金银花[3]。金银花中可以提取出富含绿原酸,异绿原酸,木犀草素等多种化学物质。2010年修订版《中国药典》明确规定,含有红色绿原酸的植物酶不得超过少于1.5%,而含有木犀草嘧啶酶的植物酶不得超过0.05%。绿原酸作为金银花具有抗菌和耐疫的主要药物和防病毒的重要药理组合物。金银花材料好坏，由绿原酸含量的高低决定。绿原酸主要用途是一种经由植物体在体内进行一种有氧生物呼吸的代谢过程中通过植酸酶的途径氧化产生的一种苯丙醇有机化合物,它也是由于一种咖啡酸与阿尔奎尼酸发生反应而氧化生成的环氧缩酚酸。绿原酸的稳定性较低。调制的溶液需要在10℃下保存，需要茶色的瓶子。因此判断金银花材料的好坏可看绿原酸含量的高低。高效液相色谱法(HPLC)是目前实验室中常用的含量测定方法。方法操作简单，结果准确。因此,在深入彻底研究各种金银花的活性质量时,可以考虑采用高效率的液相色谱分析法技术来准确测定各种金银花中各种绿原酸的活性含量[4-5]，使测定数据准确。二、金银花的真伪鉴别（一）来源鉴别金银花：属于忍冬科(忍冬)植物忍冬干燥时的花蕾或初开时的花朵。山银花：是忍冬科水生植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬或黄棕色毛忍冬的一种干燥花蕾或初开时的花。细毡毛忍冬：属于忍冬科忍冬属植物。（二）性状鉴别金银花：呈杆状，上厚下薄，微弯，长2~3cm，上直径约3mm，下直径约1.5mm。表面呈现黄白色或者是绿白色(颜色随着时间的逐渐变暗),密被短柔毛。偶尔出现的叶形苞片。绿色的花萼,先端5浅裂,裂片上多有毛,约2mm。花冠呈圆筒状而半开放,先端为唇形;雄蕊5,附生于筒体中,呈金黄色;雌株1,子房内为无毛细胞。闻起来清新，尝起来淡而微苦。山银花：腺毛头下部呈圆锥形或盘状，顶端多凹陷，侧视有10~100个细胞，排列3~5层，直径大约32~152µm，含红褐色物质，柄2~4个细胞;厚壁无腺毛，长可达848µm，具双或单螺纹。[6]细毡毛忍冬：幼枝,叶柄和花梗都呈淡黄褐色,展开时常出现的有长糙毛和短柔皮毛,并疏生腺毛,或完全没有细毛,老枝为棕色。叶纸呈细卵球形、卵球行、长圆形至半卵圆型披针形至厚薄的披针形,长3~13.5厘米,尖端锐尖逐渐增大为再尖,基部呈圆形或切面的心形,两侧稍大于不等,有或中脉呈糙缘毛,上面初期时中脉出现有糙缘毛,后则转变为无毛,小脉和侧纹下陷,下面由纤细的短柔毛组成,灰色或淡颜料的薄毯毛，脉长糙伏毛或近无毛，老叶毛变薄和网状脉突出；叶柄长03~1.2cm[7]。金银花和忍冬科其他药材比较,其苞片叶状且远比叶小。形状、长度、直径、柔毛、颜色、苞片、花尊特征等是药材性状鉴别的主要特征。资料显示,正品金银花和其常见混淆品及伪品有多种不同,建议将一些地方应用时间较长、功能相似的土银花等收入药典或中药材质量标准。2015版《中国药典》中记载金银花和山银花的主要特性无差异,而在2005版的《中国药典》将2种花分开使用。文献考证,发现两者有一定差异。对不同产地金银花的花结构形态特征比较观察，发现不同金银花种间花的形态具有明显区别，种内形态特征与地理分布具有一定相关性。（三）显微鉴别1.金银花本品粉末为浅黄色。花粉颗粒呈球形,表面分别有细微的刺和椭圆形的颗粒雕纹,有3个萌发的洞。腺毛主要有两种:一种是作为倒锥形的大脑头,顶部是扁平,由10到33个细胞所构成;另一类几乎都是椭圆形的脑袋,由4至20个细胞所构成。两个腺头的分泌物和细胞都包括了黄褐色的分泌物,腺柄由多个细胞所构成。非腺毛大多数为单细胞性黑色素毛,一壁较厚、短,有壁疣，而且偶尔还会长出角质丝线；另一类是有细长弯曲的壁,其表面可能存在细小的疣状突起。在薄壁组织的细胞内包括微小的草酸钙簇。柱头顶端的表皮细胞内部均有长柔毛。2.山银花毛梢呈倒锥形或盘状，顶端有凹陷或略微平，侧视约20~100个小分枝细胞，排列3~5层，直径约3~15µm；茎部有2~4个小球形的细胞，基部的球形细胞大多是粗而又生长。厚壁的非腺毛约长3~63µm，体部直径11~40µm，壁厚3~13µm。脚周围的表皮小孔有细胞膨出[8]。3.细毡毛忍冬腺毛可以分为类正方形、长圆型、倒正方形、或者是类圆形,直径32~100µm。从侧面来看,它们由2~17个细胞组成,呈浅棕色。腺体茎叶柄长64~600µm,由2~4个细胞共同组成,直径19~64µm。厚壁单细胞非腺毛生长45~1320µm,直径8~33µm,壁厚3~11µm,表面有明显的丝状突起。草酸钙簇晶体的分子直径为10~54µm[9]。有资料显示，制作永久切片观察鸡血藤与金银花结构之间的显微结构，发现在鸡血藤中没有观察到射线和导管，而金银花中没有观察到皮层薄壁组织。与此同时，比较金银花及其13个种混伪品的显微特征,指出其在腺毛种类、大小及草酸钙簇晶特征等方面有一定不同。此外，从药材形态、显微特征等方面比较了盘叶忍冬花蕾与金银花，发现盘叶忍冬花蕾的腺毛和非腺毛在数量上比金银花少，盘叶忍冬的花粉粒比金银花小，可据此加以区分。耿世磊等⒂报道,忍冬属不同植物的花蕾在形态上均极为相似，但电镜下该属不同植物的叶表皮特征存在显著差异，认为叶表皮形态特征可作为鉴定分种的依据（四）薄层色谱鉴别1.实验仪器暗箱式紫外分析仪，烘箱，电子天平。2.实验材料金银花，山银花，细毡毛忍冬，绿原酸标准品，甲醇，研钵，牛角勺、薄层层析硅胶G，CMC-Na水溶液，量筒，层析滤纸(中速)、药勺、醋酸丁酯-甲醇-水、玻璃板(载玻片)、点样毛细管、烧杯。3.实验内容（1）配制0.5%CMC-Na的有机水溶液，备用。称取适量薄层层析硅胶G置于研钵中，加入少许0.5%CMC-Na的水溶液，比例一般为1:3(g/ml)左右。在研钵中朝同样的方向进行研磨,去除硅胶表面的空隙和气泡,将硅胶调整到均匀的糊状,用牛角勺提取适量的物品于干燥湿润的玻璃板上,用牛角勺均匀地涂抹,然后轻轻振动玻璃板,让硅胶均匀地分布在整个玻璃板的表面,保持平整光滑。将涂好的薄层板平放自然干燥，或干燥后放入烘箱，105℃活化30分钟，冷却至室温后置于烘干机中备用。（2）将金银花、山银花及细毡毛忍冬各自放入研钵中细细弄成粉末。（3）分别取0.2g的金银花、山银花及细毡毛忍冬，并分别加入甲醇溶液5ml。将溶液过滤12h后为供试品溶液，将绿原酸标准品加入甲醇中，制得1mL约1mg的溶液作为对照溶液。（4）采用毛细管点样法在5µm处选择3种测试溶液和对照溶液,点置于一块含有0.5%CMC-Na的硅胶g薄层板上。应要注意点样量的适中。如果太少，有些成分无法检测到；如果太多，很容易产生尾砂、斑点重叠等现象，导致分离失败。样品间距0.5~1cm。（5）以醋酸丁酯-甲醇-水(14:5:5)上一种有机溶液作为展开试剂。将展开试剂倒入一个展开气缸中。展开前，将薄层压板在色谐缸放置一段时间，使溶剂蒸气达到饱和，然后展开，当展开剂前沿达到板的3/4时，取出薄层板。展开后的薄层板放入烘箱烘干先在自然光下观察随后置紫外光(365nm)下观察荧光斑点。观察结果如下图1所示。图1.色谱图1.金银花2.山银花3.细毡毛忍冬三、高效液相色谱法测定金银花中有效成分的含量（一）实验材料与仪器1.实验材料金银花药材，绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所）,甲醇乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他均为分析纯。2.仪器电子天平，岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，超声波清洗器，锥形瓶。（二）实验方法1.供试品溶液提取金银花粉末(经过4号筛)约0.5g,精密地称定,置于一个塞锥型玻璃瓶中,精密地加入50%的甲醇50ml,称定体积和重量,超声波热处理(功率50w,频率35KHz)30分钟,放冷,再称定体积和重量,用50%的甲醇来补足所需减少的体积和重量,摇匀,滤过。精密测定量取出滤液5ml,置25ml褐色测定量瓶中,加50%的甲醇稀释至一定刻度,摇匀,即得。2.对照品溶液准确称取绿原酸10mg，加入50%的甲醇并将其转移到100ml的大容量玻璃瓶中，再依次加入50%的甲醇直到大容量玻璃瓶的刻度，摇匀备用即可。3.色谱条件填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；乙腈-0.4%磷酸水溶液（13：87）为流动相；波长为327nm。（三）方法学考察1.测定波长绿原酸检测波长的方法确定为:取绿原酸对照品溶液10μl，扫描波长，结果显示，在波峰达100mAV时，绿原酸的检测波长范围一般为300～340nm，最佳的检测波长为327nm[10]。2.线性关系分别精密提取绿原酸对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0放入10ml的容量瓶中,再在瓶中分别加入50%甲醇至刻度线，摇匀各取10μl进样。以绿原酸含量X(μg)为横坐标，峰面积Y(mAU·s)为纵坐标，绘制标准曲线如下图2。其回归方程为Y=-5855.37+2421287X.r=0.999841说明绿原酸进样量与峰面积在0.10~1.0μg范围有较好的线性关系。图2回归曲线图3.稳定性实验取同一种金银花的供试品溶液进行测定，分别在0h,2h,4h,6h,8h,10h,12h进样，检测绿原酸的含量测定，测得峰面积的RSD为1.25%。说明绿原酸在放置12小时后，含量依旧较为稳定。4.精密度实验根据上述色谱条件，精密的吸取对照品溶液5μl，重复进行5次，所得RSD为1.58%，所以精密度较高。5.重复性实验取对照品溶液10μl，并连续重复进样6次。测得绿原酸对照品峰面积为1892354、1871252、1884324、1893575、1846438、1874585。所得RSD为0.934%，所以重复性好。6.加样回收实验对同一批次的金银花药材粉末进行精密标记并称取6份，每份1.0g，再精密的加入一定量的对照品溶液。根据2.1的方法先进行供试品溶液的配制，再根据色谱条件测定绿原酸含量然后计算加样回收率。如表1。表1绿原酸加样回收率的测定结果编号称样量（g）样品含量（mg）对照品含量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD(%)11.00118.24318.28636.52699.9821.00118.24318.27836.51099.9431.00218.32218.35436.66099.9199.840.13741.00318.40318.40136.75799.7451.00318.40318.39636.73099.6261.00318.40318.37636.75599.87（四）含量测定分别选择三种金银花的样品，按照2.1的方法进行溶液的配置，取供试品与对照品溶液10μl，进行3次实验，再根据色谱条件和回归线方程求得各种绿原酸的质量，从而确定各种绿原酸含量。其含量分别为2.43%、2.79%、2.52%。四、讨论通过来源鉴别都是同属于忍冬科，鉴别效果不大；在对性状鉴别方面主要是通过观察形状、颜色、花萼等特点；在显微鉴别方面主要通过制片来检查腺毛、非腺毛为主等特点；在薄层色谱法上，选择对照药材中的主要成分绿原酸对照品再添加上金银花对照药材来鉴别。这四种方法相较而言，薄层色谱法更容易看出真伪区别并且操作方法简单。金银花中化学组成较复杂，包含了绿原酸类、三萜皂苷类、挥发油和木犀草素等。但目前市场上仅仅将绿原酸含量为一个指标进行研究,因此缺乏与金银花质量差异相对应的专属性[11]，且绿原酸含量的高低也主要取决于各种植物的品质与其生态、气候、土壤等对其物候、地理条件和生长期的影响。因此还需再去研究其他的一些活性成分来共同研究决定金银花的质量。五、结论在真伪鉴别中，通过来源、性状、显微、薄层色谱鉴别，我们可以发现伪品与正品有相似之处，但还是可以准确鉴别出来。要切记不能混用，以免危害到自己的身体。在金银花中绿原酸的含量相对来说是较高的，也是最具有活性的。同时绿原酸也可以作为判断金银花质量差异的重要因素。本次实验主要是通过高效液相色谱法来检测绿原酸的含量，方法操作简单，稳定性好，精密度高，重复性好可以为金银花的质量研究提供数据参考。

参考文献[1]范帅帅