动物检疫学高致病性禽流感专家讲座

高致病性禽流感(avianInfluenza)

1动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第1页高致病性禽流感是禽流行性感冒简称，它是由A型流感病毒引发一个禽类传染病。禽流感病毒感染后能够表现为轻度呼吸道和消化道症状，死亡率较低；或表现为较严重全身性、出血性、败血性症状，死亡率较高。2动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第2页

非致病性禽流感

不会引发显著症状，仅使染病禽鸟体内产生病毒抗体。

低致病性禽流感

可使禽类出现轻度呼吸道症状,食量降低、产蛋量下降，出现零星死亡。

高致病性禽流感

最为严重，发病率和死亡率高。感染鸡群经常“全军覆没”。

按病原体致病性，禽流感可分为:3动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第3页高致病性禽流感因其在禽类中传输快、危害大、病死率高等特点，被国际兽疫局定为A类传染病，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。现为通报性疫病，我国将其列为一类动物疫病。4动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第4页近年来出现了禽流感病毒感染人事例：1997年中国香港禽流感暴发，有12人感染H5N1型禽流感病毒，6人死亡，这是世界上首次证实禽流感感染人类；年4月荷兰发生H7N7型禽流感，人类感染者达89人，并出现了死亡病例；年11月27日，香港一男童感染禽流感；5动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第5页年12月至年2月，韩国、中国台湾、日本、越南、印尼、巴基斯坦、老挝、泰国、中国大陆、美国和加拿大等国家和地域相继暴发禽流感，其中在越南和泰国又出现了禽流感（H5N1）感染人类病例，并出现了死亡。年禽流感大暴发，给世界人民带来极大恐慌。6动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第6页4月，我国青海湖自然保护区候鸟感染H5N1毒株，约6000多只候鸟死亡。亚洲、欧洲、亚洲都有H5N1亚型HPAI暴发。最近国内外有H5N1血清型引发禽流感发病率和死亡率都很高，危害巨大。7动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第7页病原禽流感病毒属于正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒。病毒基因组属于单股负链RNA。经典A型流感病毒粒子呈圆球形，有囊膜，对乙醚、氯仿、丙酮等脂溶剂敏感。8动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第8页鸡瘟病毒9动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第9页依据流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)抗原性差异，可将其分为不一样亚型。迄今为止，A型禽流感病毒HA已发觉16种，NA有9种，分别以H1--H16、N1—N9命名。全部禽流感病毒均属A型，不一样毒株致病性有差异。10动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第10页禽流感病毒能在鸡胚上生长繁殖。以尿囊腔、羊膜腔或绒毛囊膜上感染时，强毒株病毒初代感染鸡胚后26-36h死亡。禽流感病毒经过鸡胚继代后增强毒力。除鸡胚外，本病毒也能感染鸭胚和鸽胚。犬肾细胞（MDCK）广泛用于流感病毒分离培养。非洲绿猴肾细胞（Vero）也适合用于A型流感病毒分离培养。11动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第11页流感病毒能凝集鸡、豚鼠、猫、小白鼠、马、绵羊、人和其它动物红细胞。对干燥和低温抵抗力强。低温和冻干状态下可保留病毒。不耐热，病毒经55℃、1h灭活，60℃经20min灭活，100℃2分钟即被灭活。12动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第12页惯用消毒剂轻易将其灭活，如氧化剂、稀酸、漂白粉和碘剂等都能快速破坏其活性。13动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第13页流行病学各种家禽（火鸡、鸡、珠鸡、石鸡、鹤鹑、雉、鹅及鸭）和野禽（包含鸭、鹅、矶鹬、燕鸥、鹭、海鸥、天鹅等）均易感。从迁徙水禽，尤其是鸭中分离病毒最多；流感在家禽中对火鸡和鸡危害最严重。

14动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第14页现在发觉，禽流感病毒能直接感染人，并可引发发病甚至死亡。在试验室人工试验中，猪、水貂、猴、猫等均可被禽流感病毒感染。15动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第15页禽流感病毒可经过消化道和呼吸道进入人体传染给人，也可经过眼结膜和破损皮肤引发感染。人类直接接触受禽流感病毒感染家禽及其粪便或直接接触禽流感病毒也能够被感染，并可引发发病甚至死亡。16动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第16页流行特点：发病急、传输快、流行范围广，常呈地方性或大面积流行，其中高致病性禽流感发病率与死亡率均可高达100%。

该病一年四季均可流行，但以冬季和气温骤冷骤热季节更易暴发。17动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第17页临床检疫

1、临床症状禽流感症状依感染禽类品种、年纪、性别、并发感染程度、病毒毒力和环境原因等而有所不一样，主要表现为呼吸道、消化道、生殖系统或神经系统异常。18动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第18页病鸡头部肿胀，冠和肉髯发黑，眼分泌物增多，眼结膜潮红、水肿，羽毛蓬松无光泽，体温升高；下痢，粪便黄绿色并带多量黏液或血液；呼吸困难，歪头；产蛋率急剧下降或几乎完全停顿，蛋壳变薄、褪色、无壳蛋、畸形蛋增多；鸡脚鳞片下呈紫红色或紫黑色。在发病后5d～7d内死亡率几乎到达100%。少数病程较长或耐过未死病鸡出现神经症状，包含转圈、前冲、后退、颈部扭歪或后仰视天等。

19动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第19页20动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第20页肉髯发绀21动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第21页鸡冠和肉垂肿胀发绀22动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第22页23动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第23页24动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第24页脚磷片下出血25动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第25页26动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第26页27动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第27页神经症状

呼吸症状28动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第28页禽流感病鸭含有神经症状29动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第29页30动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第30页2、病理改变

最急性型病鸡常无眼观改变。急性者可见头部和颜面浮肿，鸡冠、肉髯肿大达三倍以上；皮下有黄色胶样浸润、出血，胸、腹部脂肪有紫红色出血斑；心包积水，心外膜有点状或条纹状坏死，心肌软化；病鸡胸部肌肉有出血点或出血斑。消化道改变表现为腺胃乳头水肿、出血，肌胃角质层下出血，肌胃与腺胃交界处呈带状或环状出血；肝、脾、肾瘀血肿大，有灰黄色小坏死灶；31动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第31页呼吸道有大量炎性分泌物或灰黄色干酪样坏死；胸腺萎缩，有不一样程度点、斑状出血；法氏囊萎缩或呈黄色水肿，有充血、出血；母鸡卵泡充血、出血，卵黄液变稀薄；严重者卵泡破裂，卵黄散落到腹腔中，形成卵黄性腹膜炎，腹腔中充满稀薄卵黄。输卵管水肿、充血，内有浆液性、黏液性或干酪样物质。32动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第32页33动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第33页34动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第34页35动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第35页36动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第36页37动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第37页38动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第38页39动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第39页40动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第40页脚鳞出血（严重病例）41动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第41页发病鸡胸肌出血产蛋鸡输卵管中粘液渗出物流感病鸡心冠脂肪出血42动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第42页43动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第43页44动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第44页禽流感病鸭胰腺白坏死点

45动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第45页鹅流感胰46动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第46页试验室检疫诊疗技术：我国已建立琼脂扩散（AGP）技术、亚型分型技术、病毒分子诊疗与检测技术。国家监测标准：《流行性感冒诊疗标准及处理标准》

47动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第47页1、样品采集：（1）病料样品：最少从5只病禽和病死禽中采集病料样品。样品应包含：泄殖腔（新鲜粪尿样）棉拭子和气管棉拭子（置于缓冲液体中）；气管和肺混样；肠管及内容物混样；肝、脾、肾、脑等其它组织样品（不能混样）。48动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第48页组织和气管拭子悬液中加入青霉素（IU/ml）、链霉素（2mg/ml）或庆大霉素（50µg/ml）。肠管及内容物、粪便样品和泄殖腔棉拭子所用抗生素浓度应提升5倍。49动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第49页（2）血样：分别采集最少10只病禽，并单独存放，不能混合。50动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第50页2、电镜观察禽流感病毒普通为球形，直径为80~120nm，但也常有一样直径丝状形态，长短不一。病毒表面有10~12nm密集钉状物或纤突覆盖，病毒囊膜内有螺旋形核衣壳。两种不一样形状表面钉状物是HA（棒状三聚体）和NA（蘑菇形四聚体）。

51动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第51页3、病毒分离判定将感染鸡胚或病禽气管、脾、肺、肾和脑等可用磷酸缓冲液或肉汤培养基制成10倍乳剂，加抗菌素抑菌；如系泄殖腔拭子，可将拭子在溶液中浸渍后去掉拭子，然后用2500-3000r/min离心30min，除残渣，滤过液接种9-11dSPF鸡胚尿囊腔分离病毒。52动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第52页在35-37℃孵化箱内孵育，18h后每8h观察鸡胚死亡情况。病毒收获：无菌收取18h以后死胚及96h仍存活鸡胚尿囊液，作血凝试验，以判定病毒。阳性反应说明可能有正粘病毒科流感病毒；若无血凝活性或血凝价很低，则用尿囊液继续传2-3代，并重复以上血凝试验，若仍阴性，则认为病毒分离阴性。

53动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第53页4、血清学检验琼脂扩散试验（AGP）：用于流感病毒型判定，是用病毒核蛋白抗原检验血清中抗体。既能够定性(如免疫双扩散及免疫电泳中以沉淀线判定)，又能够定量(如单辐射扩散)。比较简便、快捷。54动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第54页血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HI）：证实流感病毒血疑活性及排除NDV，也可用病毒抗原判定流感病毒亚型。简单方法是：取1滴1：10稀释正常鸡血清(最好是SPF鸡)和1滴ND抗血清，分别滴于瓷板上，再各加1滴有血凝活性鸡胚尿囊液，混匀后各加1滴5﹪鸡红细胞悬液，若两份血清均出现血凝现象，则表明尿囊液中不含有新城疫病毒(NDV)；假如ND抗血清出现HI现象，表明尿囊液中含NDV。55动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第55页神经氨酸酶抑制试验（NIT）：

利用流感病毒糖蛋白神经氨酸酶与底物反应来检测病毒存在是否。用于判定AIV另一个表面抗原——神经氨酸酶（NA）亚型。56动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第56页详细方法是：在96孔聚苯乙烯平板反应孔中分别加入已稀释好羊膜尿囊液25µl，然后分别加入1-9型已处理NA抗血清25µl，振荡混匀，室温静置1h，每孔加入25µl胎球蛋白，37℃孵育3h，每孔加入25µl砷试剂至最先出现棕色孔褪色，最终每孔加入100µl1.6%硫酸巴比妥，将反应板用56℃水漂洗30-60min后判定结果，呈粉红色为抗血清NI阴性，无粉红色为抗血清NI阳性。依据结果判定AIV亚型。NIT试验普通需在AI中心试验室方可进行。57动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第57页ELISA：含有较高敏感性，既能够检测抗体，又能够检测抗原。尤其适合于大批样品血清学调查，能够标准化而且结果易于分析。在流感控制、扑灭、检疫中很有用途。58动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第58页中和试验以中和试验(NT)来判定或滴定流感病毒时，惯用鸡胚或组织培养细胞，操作方法与其它病毒(如NDV)中和试验相同。取9-10日龄鸡胚接种后37℃孵育3-4d，鸡胚死亡出现HA活性，表示鸡胚感染流感病毒。但因为中和试验操作相当繁琐，费时间也较长，试验材料花费也多，没有条件和无须要时可不进行。59动物检疫学高致病性禽流感专家讲座第59页免疫荧光技术

惯用直接荧光抗体法，即在组织触(印)片上直接染色，以荧光显微镜检验荧光。一个AIV荧光抗体