血液细胞染色体检验

基础知识介绍

1960年Nowell和Hungerford发觉了慢性粒细胞白血病特异性染色体异常，即Ph染色体，从此推进了细胞遗传学在肿瘤细胞学上广泛应用，促进了血液肿瘤分子生物学发展。

血液细胞染色体检验第1页血细胞染色体检验技术主要包含染色体非显带技术、染色体显带技术、染色体高分辨技术、姐妹染色单体交换技术、染色体脆性部位显示技术和早熟凝集染色体技术等。80年代又发展了染色体原位杂交技术(FISH)，这一技术将分子探针与染色体杂交，拓展了检测范围，提升了检测灵敏度。

自动化染色体分析技术提供了菜单式操作，简单易行，在资料存放、染色体图像处理和核型分析方面显示了独特优势。血液细胞染色体检验第2页一、染色体非显带技术

(一)原理染色体制备关键是取得足够分裂中期细胞。如骨髓可直接得到分裂中期细胞，而外周血淋巴细胞需经体外培养，植物凝集素（PHA）刺激细胞分裂以取得分裂中期细胞。骨髓细胞常规染色体制备方法包含直接法和培养法两种。血液细胞染色体检验第3页直接法1．直接法：

抗凝骨髓标本不经培养，以PBS稀释后加人秋水仙素“阻留”中期细胞，经低渗液处理后，再经预固定、固定后即可染色作镜检。（秋水仙素能干扰有丝分裂纺锤体形成，使细胞“阻留”在分裂中期，增加中期细胞数目。低渗处理则使染色体彼此铺展开，便于分析。）血液细胞染色体检验第4页短期培养法抗凝骨髓标本在含小牛血清培养液中于37℃培养24或48h，加入秋水仙素“阻留”中期细胞，其它同直接法。血液细胞染色体检验第5页二、染色体常规显带技术显带染色体(bandingchromosome)：染色体经过某种特殊处理或特异染色后，染色体上可显示出一系列连续明暗条纹，称为显带染色体。1971年巴黎会议确定四种显带技术是奎丫染色法、Giemsa法、逆相Giemsa法和着丝粒区异染色质法，即Q带、G带、R带和C带。血液细胞染色体检验第6页

(一)原理

1．G显带（Giemsa法）：DNA上富含A-T碱基正确DNA和组蛋白结合紧密，和染料亲和力较强，呈深带；而富含G-C碱基正确区段结合蛋白质与染料亲和力降低，呈浅带。这么染色体上可显示出一系列连续明暗条纹。血液细胞染色体检验第7页2．R显带(逆相Giemsa法)：带纹与Q带、G带恰好相反，即前者阳性带相当于后者阴性带，而前者阴性带则相当于后者阳性带。R带按制备方法不一样可分为荧光R带和姬姆萨R带两种类型。血液细胞染色体检验第8页(二)显带染色体命名

显带染色体上明暗条纹称作带(band)。染色体上有显著而恒定形态特征，如着丝粒和一些尤其显著带，称作界标(1andmark)。两个界标之间区域称为染色体区(region)。区划分是以着丝粒开始向短臂(phocomelicarm，p)或长臂(q)臂端延伸，依次编为l区、2区、3区等。用作界标带就是该区l号带，比如6p23，即表示第6号染色体短臂，2区，3带。血液细胞染色体检验第9页在表示一个指定带时需要四项内容，即染色体号、臂号、区号和带号。假如一个带需要再分，就称为亚带(subband)，亚带描述就是在带后面加一小数点，再写出指定亚带数。如6p23.1，即指6号染色体短臂，2区3带第l亚带。假如亚带又被再划分，则只在亚带后加数字，不再加标点。

血液细胞染色体检验第10页三、临床评价

(一)染色体异常(chromosomeaberration)

是指染色体数量异常和结构异常，又称染色体畸变。

1．染色体数目异常

①多倍体(polyploid)：人类生殖细胞染色体为23条，体细胞染色体为46条，称二倍体(diploid)(2n)。在一些病理情况下，细胞染色体数目成倍增加，称为多倍体，如三倍体(triploid)(3n)，四倍体(tetraploid)(4n)等。在恶性血液病中常见有多倍体细胞。血液细胞染色体检验第11页

②非整倍体(aneuploid)：染色体数目增加或降低不是成倍，称为非整倍体。少于46条者称亚二倍体(hypodiploid)，少于69条者为亚三倍体(hypotriploid)；多于46条者称为超二倍体(hyperdiploid)，多于69条者称超三倍体(hypertriploid)。假如染色体数是2n，但不是正常23对，而是个别染色体增加，其它染色体对应降低，称为假二倍体(pseudodiploid)。在急白血病和恶性淋巴瘤等疾病常可见到各种非整倍体异常。血液细胞染色体检验第12页

③嵌合体(mosaic)：同一个体含有两种或两种以上不一样核型细胞，称为嵌合体。分为性染色体嵌合体和常染色体嵌合体，常见于先天性疾病。人体恶性肿瘤细胞核型改变不能算嵌合体。

血液细胞染色体检验第13页2．染色体结构异常造成染色体结构改变机制是断裂及断裂后重排。染色体断裂能够是自发，也可是致畸变原因引发。常见染色体结构异常有以下几个：

①缺失(deletion，Del)：是指染色体长臂或短臂部分节段丢失，包含末端缺失和中间缺失；如急性单核细胞白血病del(11)(q23)，即是在l1号染色体长臂2区3带断裂，末端缺失。血液细胞染色体检验第14页2．染色体结构异常②倒位(inversion，inv)：一条染色体两处断裂后，形成三个断片，中间断片作180°倒转后又重新接合，即倒位。臂内倒位是指染色体长臂或短臂内发生倒位；臂间倒位是指两处断裂分别发生于长臂和短臂，中间含着丝粒断片倒转而再接合。如inv(3)(q2lq26)就是3号染色体长臂内倒位。血液细胞染色体检验第15页2．染色体结构异常

③易位(translocation，t)：指染色体断裂断片离开原来位置而接到同一条染色体另一处或另一条染色体上，从而造成染色体重排。无着丝粒断片易位到同一染色体另一部位又称移位；无着丝粒断片易位到另一染色体上又称转位；两个染色体发生断裂后相互交换片段称相互易位(reciprocaltranslocation)。易位是白血病、淋巴瘤中常见染色体结构异常。血液细胞染色体检验第16页2．染色体结构异常④环状染色体(ringchromosome)：当染色体长臂和短臂两末端处断裂，两端断面相互连接，即形成环状染色体，环状染色体在辐射损伤时常见。血液细胞染色体检验第17页2．染色体结构异常⑤等臂染色体(isochromosome，i)：因为染色体分裂不是纵裂，而是横裂，结果产生两条新染色体，一条有原来染色体两条长臂而没有短臂，而另一条则只有原来染色体两条短臂而没有长臂，这种染色体称为等臂染色体。血液细胞染色体检验第18页2．染色体结构异常⑥脆性位点(fragilesite)：指在接触某种特殊化学物质或体外培养条件所出现非随机染色体裂隙、断裂。血液细胞染色体检验第19页3.异常核型描述①异常核型描述：临床多使用简式描述。对肿瘤细胞异常核型描述，按照ISCH对肿瘤细胞命名标准进行染色体数目异常描述：在染色体号或性染色体前写上“+”或“一”号，表示该染色体增加或丢失；如在染色体后写“+”或“一”号，表示该染色体部分取得或部分丢失，如46，XY，-5，即表示少一条5号染色体，46，XY，5一