4e-bp1、4s小亚基s7k蛋白激酶p70s6k抑制胃癌细胞生长

4e-bp1、4s小亚基s7k蛋白激酶p70s6k抑制胃癌细胞生长

m-tor（rapamian目标）是rapamianrapamian的目标分子。这是一种丝氨酸和苏氨酸激酶，在感受营养信号、调节细胞生长和生殖方面发挥着重要作用。1材料和方法1.1血清指标分析RAD001、胃癌细胞株MKN-28、N-87均为奥地利维也纳大学临床药理所VolkerWachek博士馈赠,RAD001用DMSO配成1mmol/L贮备液,实验时用RPMI1640稀释为20nmol/L。RPMI1640、小牛血清均购自美国GIBCO公司,其他试剂均为分析纯级。细胞计数仪购自美国Beckman公司,流式细胞仪购自美国BD公司,电泳仪购自美国Bio-Rad公司,PI染液、RNase购自美国BDBioscience公司,p70S6k(9202,rabbit)、p-p70S6k(9204,rabbit)、4E-BP1(9452,rabbit)、p-4E-BP1(9451,rabbit)、Actin(4968,rabbit)购自美国Cellsignaling公司,1-block、CSPD、Assaybuffer购自美国Tropix公司。Marker购自美国Fermentas公司,型号00012835。1.2方法1.2.1细胞计数取生长分裂期的胃癌细胞株MKN-28、N-87用于实验,常规胰酶消化后置于24孔板内,每孔1×101.2.2生长分裂期肺癌细胞系统的检测取生长分裂期的胃癌细胞株MKN-28、N-87用于实验,常规胰酶消化后置于6孔板内,每孔1×10取生长分裂期的胃癌细胞株MKN-28、N-87用于实验,常规胰酶消化后置于6孔板内,每孔1×101.2.4统计方法细胞计数及细胞周期数据采用单因素方差分析,统计软件使用美国国立图书馆stata8.0,P<0.05为有统计学意义。2结果2.1rad00组与阴性对照、dmso对照的比较表1RAD001作用24h即开始出现对胃癌细胞株生长的抑制作用,随着作用时间延长至48、72h,抑制作用逐渐增强,48h时N-87细胞株RAD001组与阴性对照、DMSO对照出现统计学意义,72h时MKN-28、N-87细胞株RAD001组与阴性对照、DM-SO对照均出现统计学意义(P<0.05)。MKN-28、N-87细胞株72h抑制率分别为25.12%和43.39%,其中N87相对敏感(图1,2)。阴性对照与DMSO对照之间无差异。2.2细胞周期的改变RAD001作用24h后MKN-28、N-87细胞株细胞周期均发生改变,停滞在G2.3phosph东南角表达对n-84e-bp1,4e-bp1,4e-bp1,4e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-b1,4e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-b1,5e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-b1,4e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,5e-bp1,4e-bp1,4e-p7,5e-bp1,5e-b1,5e-b1,5e-b1,5e-b1,5e-b1,5e-b1,5e-b1,5e-b1,5e-p7,5e-b1,5e-b1,5e-p7,5e-b1,5e-b1,5e-p7,5e-b1,5e-p7,5e-b1,5e-p7,5e-p7,5e-b1,5e-p7,5e-p7,5e-b1,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p1,5e-p1,5e-p1,5e-p1,5e-p1,5e-p1,5e-p1,5e-b1,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p7,5e-p1,5e-p1,5e-p1,5e-p1,5e-p1,5e-p1,5e-p1,5e-p1,RAD001作用24h后MKN-284E-BP1表达下降,phosphate-p70S6K表达下调,phosphate4E-BP1表达缺失,在N-87细胞株中,4E-BP1无明显变化,phosphate-p70S6K及phosphate4E-BP1表达下降。MKN-28、N-87p70S6K无明显变化(图3)。3rad00作用24h后细胞周期的改变由于mTOR是肿瘤发生过程中的一个关键因子,因此成为了肿瘤治疗中的一个重要靶点。mTOR信号通路在一些肿瘤中是失控的,因此体外给予mTOR特异抑制剂可改变肿瘤细胞的细胞周期分布进而影响肿瘤细胞的生长。本实验发现RAD001作用于两种胃癌细胞株MKN-28、N-8724h即开始出现对细胞生长的抑制作用,随着作用时间延长至48、72h,抑制作用逐渐增强。同时流式细胞仪检测细胞周期结果显示RAD001作用24h后MKN-28、N-87细胞株细胞周期均发生改变,停滞在G至于mTOR调控细胞周期的机制,研究显示mTOR可通过调节下游在翻译过程中有重要作用的蛋白,如4E-BP1(真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1),p70S6K(核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶),eEF2(eukaryoticelongationfactor2,真核生物转录延伸因子)来发挥重要作用胃癌的发生率在西方国家虽然最近二十年间有逐渐降低的趋势,但胃癌迄今仍是全球人口主要癌症死亡原因。由于胃癌通常发现较晚,并且常伴有转移,所以临床治疗效果欠佳,而肿瘤“分子标靶治疗”(molecularlytargetedtherapy)通常毒性较轻,是肿瘤治疗的新纪元,因此寻找胃癌的分子标靶并对