艾滋病实验室检测新技术-课件

艾滋病实验室检测新技术

艾滋病实验室检测新技术1目的 方法 监测 感染检测 抗体检测(EIA/PA/RT)

检测策略

窗口期检测 抗原检测，核酸检测 poolingRT-PCR 诊断 感染诊断 WB

检测策略

近期感染诊断 STARSH方法 治疗评价 CD4/CD8测定 流氏仪检测 显微镜法 病毒载量测定 NASBA,b-DNA，RT-PCR 耐药性检测 基因型，表型 目的 方法 2窗口期检测抗原检测核酸检测PoolingRT-PCR方法窗口期检测3窗口期的范围 定义依据 时间长度 抗体检测 3-6个月 新的EIA试剂可以缩短至14-21天抗原检测 1-2周 第四代抗原抗体检测试剂可以 使窗口期比第三代抗体试剂缩 短4-5天 核酸检测 5-11天 窗口期的范围 4抗原检测P24试剂盒，第四代EIA试剂（1997年在欧洲正式批准用于血液筛查）每一个HIV粒子含有1200个p24抗原分子=0.048fg每一个HIV粒子含有2个RNA拷贝，如果病毒载量测定结果为400拷贝/ml，即等于有2.4X105个分子=0.0096pgp24抗原/ml，800拷贝/ml，即等于有4.8X105个分子==0.019pgp24抗原/ml目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为0.01pg/ml抗原在血清抗体阳转前2-18天既可以检测到抗原检测5样本（血清/浆）中的p24抗原包括游离的抗原和病毒粒子中的抗原EIA测定的抗原浓度(F)：病毒RNA拷贝数推算的抗原浓度(A)=0.16：2900样本号 EIA(Cutoff)EIA(pg/ml)RNA拷贝/ml p24pg/ml F/A 1 3.1 0.1 1,400 0.03 3.12 4.7 0.16 3700 0.09 1.83 45 1.5 1100 0.03 564 320 11 80000 1.9 5.65 68 2.3 40000 0.96 2.46 22 0.73 190000 4.5 0.16 样本经过预处理，破碎病毒粒子后将有利于p24抗原的检测样本（血清/浆）中的p24抗原包括游离的抗原和病毒粒子中的抗6病毒RNA检测第一次病毒学症高峰时间大约在感染后4-11天病毒RNA检测方法：NASBA,RT-PCR,b-DNA在高度怀疑有原发感染时，且经抗体检测之后抗体检测阴性或不确定，有高危行为史或暴露史，特别是伴有相应的临床表现时，用核酸检测进行辅助诊断。早期诊断应用： 个体检测、血液筛查、性病 门诊病人筛查、PMTCT 病毒RNA检测7PoolingRT-PCR 由于核酸检测的成本很高，方法费时，不可能作为血液筛查的方法，目前在欧洲用pooled血液的方法进行核酸检测，其敏感性取决于pooped样本大小及检测的预值（用特殊的RT-PCR试剂盒检测，以提高敏感性）。可能低于抗原检测，但在个体献血者核酸检测可能比抗原检测更具成本效益。

PoolingRT-PCR8艾滋病实验室检测新技术-课件9艾滋病实验室检测新技术-课件101473份样本处理过程

1473份样本处理过程11艾滋病实验室检测新技术-课件12新近感染检测抗体检测——EIA,PA,RT——WB试验 阴性——抗原检测/核酸检测 阳性——STARSH——新近感染 新近感染检测13STARHS法 1998年开始，美国JanssenRS等专家推出一种新的实验室方法用于新感染病例的监测，即敏感的酶联免疫检测法（3A11）和非敏感的酶联免疫检测法（3A11—LS）:

原理：利用感染早期抗体滴度低的特征，以敏感ELISA试剂（3A11）和非敏感ELISA试剂（3A11-LS）对经过一定程度稀释的同一样品进行测定，3A11检测呈阳性而3A11—LS检测呈阴性反应者为新发感染，与以往感染的病例区分开来，可以确切地估测新感染人数。近几年，该方法已在一些国家得到了应用，为这些国家制定艾滋病预防控制策略提供了准确和重要的技术支持。STARHS法14检测新发或新近HIV感染的目的

l无须耗时并昂贵的前瞻性队列研究来识别早期感染。l由单一的患病样本来估计人群发病率。l以新发感染的个体为研究或干预对象。l识别早期感染以进行早期治疗和临床关怀l评估预防措施和目标l监测亚型和药物抵抗株的传播l找出适合疫苗实验的高危人群

检测新发或新近HIV感染的目的

l无须耗时并昂贵的前瞻性队列15艾滋病实验室检测新技术-课件16TARHS：新发HIV血清转换的血清检测运算法则

暴露HIV+AIDS

(1)敏感性试验++(2)STARHS试验_+

在同一时间应用两种不同试验分析血样来检测新发感染（1）

敏感性试验（EIA）血清转换早期即可出现阳性（2）

非敏感性试验（改调的EIA：STARHS）血清转换晚期才可出现阳性新发感染血清转换=EIA+&STARHS-TARHS：新发HIV血清转换的血清检测运算法则17STARHS试验的窗口期

暴露EIA+DetunedEIA+AIDS

窗口期=从EIA+到detuned的EIA+之间的时间在血清转换者有所不同，依赖于HIV的亚型和试验OrganoTekniaka,对亚型B，估计值为：

90%3.3个月754.0505.1256.4108.2STARHS试验的窗口期18艾滋病实验室检测新技术-课件19

STARHS的应用条件

非AIDS病人——AIDS病人有很低的抗体水平，象血清阳转非HAART治疗——HAART治疗病人有很低的抗体水平，象血清阳转

STARHS的应用条件非AIDS病人——AIDS病人有很20抗体检测策略 监测：初筛-复合-确认策略 EIA-EIA替代策略 诊断：初筛-复合-确认策略 EIA-EIA-PA/RT替代策略 （VCT）

抗体检测策略21WHO和UNAIDS推荐的利用几种快速检测方法，在HIV流行率不同的地区针对不同的目的而进行的HIV诊断方法 目的 流行率 策略 血液筛查 任何情况下

1 监测 ＞10% 1 ≤10%

2 诊断征兆/症状 ＞30%

1≤30% 2诊断症状 ＞10% 2 ≤10% 3 策略1：用一种筛选试剂。出现阳性反应时可被认为是HIV阳性。策略2：用两种筛选试剂。如果第一次检测出现阳性反应则用第二种试剂重复，两种试剂检测结果均出现阳性反应时可被认为是HIV阳性。策略3：用三种筛选试剂。三种试剂检测结果均为阳性时才可被认为是HIV阳性。WHO和UNAIDS推荐的利用几种快速检测方法，在HIV流行22艾滋病实验室检测新技术-课件23艾滋病实验