丙氨酸氨基转移酶试剂盒(丙氨酸底物法)

丙氨酸氨基转移酶试剂盒（丙氨酸底物法）

标准化操作规程1目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。2授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。适用范：本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶（ALT）适用范的活力。4检验方法本试剂反应原理采用国际临床化学联合会（IFCC）推荐的方法。5检验原理在丙氨酸氨基转移酶的作用下，L-丙氨酸与a-酮戊二酸反应，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸，同时NADH被氧化为NAD+,使340nm处的光吸收值下降，通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可以测定丙氨酸氨基转移酶活力。样品中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH在反应延迟时间内消除，不会干扰测定。ALTL-丙氨酸+a-酮戊二酸 ►丙酮酸+L-谷氨酸LDH丙酮酸+NADH L-乳酸+NAD*6检验标本要求1样本为血清。6.2不得使用溶血或被污染的样本。6.3样本在2℃〜8c条件下可保存7天、室温条件下可保存1天。7试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司丙氨酸氨基转移酶试剂盒2试剂组成试剂盒组成主要组成成份浓度/范围试剂1(R1)Tris缓冲液80mmol/L丙氨酸600mmol/L乳酸脱氢酶N1820U/L试剂2(R2)Tris缓冲液80mmol/L还原型辅酶I20.75mmol/La-酮戊二酸36mmol/L3试剂的稳定性与贮存：3.1试剂在2℃〜8c条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。3.2试剂开封后在2℃〜8℃条件下可稳定30天，试剂不可冷冻。3.3反应液在2℃〜8℃可稳定30天。4试剂的变质指示：若试剂混浊，或在340nm处试剂空白吸光度值低于L000A时，不能使用。8实验仪器及性能指标8.1实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪2试剂性能指标2.1空白吸光度：A^l.OOOo2.2空白吸光度变化率：IAA|/minWO.002/mino2.3分析灵敏度：测试1U/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）<-0.000lo线性范围:4U/L〜1000U/L；线性相关系数r20.9900；[4,200]U/L范围内，线性绝对偏差应不超过±40U/L；（200,1000]范围内，线性相对偏差不超过±15%。8.2.5准确度：相对偏差应在±15.0%范围内。2.6测量精密度：重复性：CVW5.0%。批间差：RW6.0%。9校准程序9.1校准品来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学校准血清2校准品的组成：人血清3校准品的存贮：未复溶的校准血清在避光条件下，2〜8℃可稳定至标签失效期。复溶后校准血清在避光条件下，2〜8℃可稳定7天；15〜25℃可稳定1天；-20℃可稳定30天。4校准品使用注意事项若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。不同批号的校准血清不能交叉使用，因为批号于批号之间的赋值不同。5校准程序建议使用试剂盒配套的校准品，按仪器使用说明进行校准。当试剂批号更换或质控失控时，需要重新校准。10质量控制1质控品来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学质控血清（水平I和水平H）2质控品组成：人血清3质控品存贮未复溶的校准血清在避光条件下，2〜8c可稳定至标签失效期。复溶后校准血清在避光条件下，2〜8c可稳定7天；15〜25℃可稳定1天；-20℃可稳定30天。10.4质控品使用注意事项若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。5质量控制建议使用迪瑞公司质控品，进行质量控制。实验室应自行建立质控区间和限值，若质控值失控，应采取纠正措施。11操作程序11.1试剂配制H.1试剂准备：试剂R1和试剂R2为液体试剂，可直接使用。11.2项目参数：测定温度37℃RI：用量240uL主波长340nm样本用量15uL副波长405nmR2:用量60uL吸光度范围0-2A延迟时间60s比色杯光径1.0cm测定时间60〜120s测定模式速率法反应方向负反应11.3样本测试操作步骤样本用量：15uL样本用量：15uL试剂R1用量：240uL力口试齐UR2:60uL主波长：340nm副波长：405nm记录吸光度变化△A/min300s 60s ।60s〜120s11.4计算方法:使用校准品的计算方法：样本管吸光度变化△A/min样本浓度（U/L）=义校准品浓度（U/L）校准管吸光度变化△A/min不使用校准品的计算方法（340nm）：样本浓度（U/L）=△A/minXK因数=△A/minX3376建议使用校准品进行检测，不使用校准品进行检测时所得结果的可靠性不如使用校准品的结果。5注意事项：本品仅用于体外诊断。避免测试过程中添加试剂，避免操作时日光直射。11.5.3试剂和样本用量可根据不同仪器的要求按比例改变。试齐（J1与试齐I」2按4:1比例混合，可作为单试剂使用。11.5.5若试剂混浊，或在340nm处试剂空白吸光度值低于1.000A时，不能使用。11.5.6单位换算:U/LX16.67X10-3=ukat/L12结果判断12.1当样本浓度超出本试剂线性范围时，应将样本用0.9%NaCl或蒸镭水按1：9稀释后再测试，结果乘以稀释倍数10或降低样本体积。12.2丙氨酸氨基转移酶含量的检测只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体症、病史以及其它的诊断项目、诊断手段进行综合判断。13参考区间反应温度37℃时，健康成年人参考值为：男性：5-40U/L女性：5-35U/L注：本参考值范围仅供参考，建议各实验室建立自己的参考值范围。14临床意义ALT活性增高1）肝胆疾病传染性肝炎、中毒性肝炎、脂肪肝和胆管炎等。2）心血管疾病 心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时肝淤血和脑出血等。3）药物和毒物 氯丙嗪、异菸肌、奎宁、水杨酸制剂及乙醇，铅、汞、四氯化碳或有机磷等引起ALT活性增高。ALT活性降低 磷酸吐多醛缺乏症。15复检操作程序按仪器使用说明书进行复查操作。16方法局限性16.1.检验结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。。16.2.当样本中黄疸＞1368/mol/L、血红蛋白＞10g/L、抗坏血酸＞5.7mmol/L、甘油三酯＞15.8mmol/L时可能会影响检测结果。16.3.由于红细胞中ALT约为血清中的3〜5倍，溶血将造成ALT测定结果假性增高，因此溶血标本不能用于测定ALT。17注意事项样本、废液等有潜在生物传染性，操作者应遵守实验室安全操作规定，并按当地医疗废弃物、感染性废弃物、产业废弃物等规定处理废液。18个人防护18.1请把标本当作可能感染HIV、HBV、HCV等的危险物质处置。为了避免或减少相关的传染风险，请使用一次性手套。18.2若误入眼内或口中、或接触到皮肤时，请迅速用水充分冲洗，必要时请接受医生治疗。19当检测系统不能工作时，所采取的补救措施当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。20参考文献20.1YoungDS.EffectsofDrugsonClinicalLaboratoryTests.ThirdEdition.1990,3:6—12.20.2WallndferH,ESchmidt,FWSchmidt,eds.SynopsisderLeberkrankheiten,GeorgThiemeVerlag,Stuttgart,1974.20.3ThefeldW,eta