2023届山东省菏泽市高考生物试题目标测试卷（2）含解析

2023届山东省菏泽市高考生物试题目标测试卷（2）注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号、考场号和座位号填写在试题卷和答题卡上。用2B铅笔将试卷类型（B）填涂在答题卡相应位置上。将条形码粘贴在答题卡右上角"条形码粘贴处"。2．作答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡上对应题目选项的答案信息点涂黑；如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案。答案不能答在试题卷上。3．非选择题必须用黑色字迹的钢笔或签字笔作答，答案必须写在答题卡各题目指定区域内相应位置上；如需改动，先划掉原来的答案，然后再写上新答案；不准使用铅笔和涂改液。不按以上要求作答无效。4．考生必须保证答题卡的整洁。考试结束后，请将本试卷和答题卡一并交回。一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1．对叶绿体和光合作用的分析正确的是A．没有叶绿体的细胞不能进行光合作用B．用8%的盐酸处理叶绿体有利于各种色素的提取C．将叶绿体粉碎加工成匀浆并给予一定的光照，光合作用仍能正常进行D．叶绿体能产生和消耗ATP，两个过程完全在叶绿体内完成2．下列关于细胞的组成、结构和功能的叙述，正确的是（）A．所有细胞都含有脂质，且都在内质网上合成B．神经递质从突触前膜释放，体现了神经元之间的信息交流C．白细胞与红细胞的功能不同，凋亡速率也不同，白细胞凋亡的速率更快D．与原核细胞相比，通常真核细胞的相对表面积更大，细胞的物质运输效率更高3．分解代谢是异化作用的别称，是生物体将体内的大分子转化为小分子并释放能量的过程，呼吸作用是异化作用的重要方式。下列叙述错误的是（）A．呼吸作用可以完成稳定化学能向活跃化学能的转换B．运动员比赛过程中，CO2的产生量一定多于O2的消耗量C．富含脂肪的种子萌发时，CO2的产生量可能少于O2的消耗量D．不同有机物经过一系列的氧化分解可能生成相同物质4．下列有关细胞中元素和化合物的叙述正确的是（）A．淀粉、纤维素、糖原不同的原因是组成其基本单位的排列顺序不同B．组成DNA和RNA的元素种类不同，含氮碱基也不完全相同C．氨基酸脱水缩合形成多肽时，生成的水中的氧来源于氨基酸的羧基D．等质量的脂肪和糖类氧化分解，脂肪释放能量多，脂肪是主要的能源物质5．如图是分泌细胞分泌的某种物质与靶细胞结合的示意图，据图判断下列叙述正确的是（）A．分泌细胞产生的分泌物与靶细胞相互结合的原因是靶细胞膜上有载体蛋白B．如果分泌细胞是甲状腺细胞，那么靶细胞不可能是垂体细胞C．如果分泌细胞产生的分泌物为抗利尿激素增加时，可以促进肾小管和集合管对水的重吸收，尿量增加，最终使细胞外液渗透压升高D．临床上可以通过抽取血样来检测内分泌系统的疾病6．油菜素甾醇（BR）是一种能促进植物茎秆伸长和细胞分裂的植物激素，下图为BR合成的调控机制。下列描述不正确的是（）A．油菜素甾醇和生长素协同促进植物茎秆伸长B．BR浓度升高时，会使BZR1的降解速度加快C．胞内BR的合成速度受胞外BR的反馈调节D．BR调控基因发生突变可能导致植物矮化二、综合题：本大题共4小题7．（9分）一个由英国伦敦帝国学院和芬兰图尔库大学的科学家组成的研究小组日前开发出一种通过大肠杆菌制造丙烷的新技术。科研人员要对大肠杆菌进行研究和利用，需要对大肠杆菌进行培养、分离、鉴定与计数等，请结合所学知识，回答下列问题：（1）培养基配制时需要对培养基进行灭菌，采用的方法是_____________，实验室常用的三种消毒方法的名称是__________________________。在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测的方法是__________________________。（2）图1所示的方法是_____________，对分离得到的大肠杆菌可通过观察菌落的_____________进行形态学鉴定。在5个平板上分别接入1．1mL稀释液，经适当培养后，5个平板上菌落数分别是19、61、64，65和66，则1g土壤中的活菌数约为___________个。（3）图2是某同学利用不同于图1方法分离菌株的示意图。下列对其操作的叙述正确的有_____________。a．操作前用无水乙醇对双手进行消毒处理b．不能将第⑤区域的划线与第①区域的划线相连c．整个过程需要对接种环进行6次灼烧d．平板划线后培养微生物时要倒置培养8．（10分）前不久，某生物公司的百白破疫苗检验不符合规定。为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序，科学家研制出基因工程乙肝－百白破（rHB－DTP）四联疫苗，经各项检测均通过rHB－DTP四联疫苗制检规程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风杆菌的四种类毒素。请分析回答：（1）为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应mRNA，在______的作用下合成双链cDNA片段，获得的cDNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列_____（填“相同”或“不同”）。（2）由于乙肝病毒表面抗原的基因序列比较小，且序列已知，获得目的基因可采用________，然后通过PCR技术大量扩增____________，此技术的前提是已知一段____________的核苷酸序列以便合成。（3）把目的基因导入受体细胞时，科学家采用了改造后的腺病毒作为载体，写出你认为科学家选它的理由_________________________________________________。（写出2点）（4）研究发现，如果将白喉杆菌类毒素20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸，免疫效果更好，请写出此种技术的基本流程_____________。（5）实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗3次效果更好，其主要原因是体内产生的_____细胞数量增多，当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是_____。9．（10分）细胞代谢中ATP合成酶的三维结构（原子分辨率）在2018年被测定，其工作机2019年有了突破性进展。下图1是光合作用部分过程示意图，请据图分析并回答（1）图1中①侧所示的场所是______________；物质甲从产生部位扩散至细胞外需要经过______________层磷脂分子。（2）ATP合成酶也是运输H+的载体，其在跨膜H+浓度梯度推动下合成ATP，由此可推测H+跨膜运输方式为______________；若膜两侧的H+浓度梯度突然消失，其他条件不变，短时间内暗反应中五碳化合物含量会______________。（3）植物细胞中含有ATP合成酶的生物膜还有______________。（4）为进一步了解植物代谢机制研究人员在密闭恒温玻璃温室内进行植物栽培试验。连续48h测定温室内CO2浓度及植物CO2吸收/释放速率，得到图2所示曲线（整个过程中呼吸作用强度恒定）。请据图分析并回答：①实验的前3小时叶肉细胞产生ATP的场所有______________；如改用相同强度绿光进行实验，c点的位置将______________。②图2中植物呼吸速率与光合速率相等的时间点有______________个；实验中该植物前24小时有机物积累量______________（选填“<”、“=”、“>”）后24小时有机物积累量。10．（10分）酵母菌的蛋白质可作为饲料蛋白的来源，有些酵母菌能以工业废甲醇作为碳源，研究人员拟从土壤样品中分离出可利用工业废甲醇的酵母菌，这样既能减少污染又可变废为宝。下图为主要操作流程示意图。回答下列问题：（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的____，及时对培养基进行分装，并进行高压蒸汽灭菌：在加热排除高压锅内原有的____后，将高压锅密闭，继续加热，通常在____的条件下，维持15-30min，可达到良好的灭菌效果。（2）取步骤②中梯度稀释后的适量液体加入无菌培养皿，然后将高压蒸汽灭菌后的培养基冷却至____（25℃/50℃/80℃）左右时倒入培养皿混匀（步骤⑧），冷凝后将培养皿倒置，在适宜的条件下培养一段时间。（3）挑取平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线纯化，下列叙述合理的是____。a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌b．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量c．划线时不能划破培养基表面，以确保能正常形成菌落d．第二区以后的划线起始端要与上一区的划线的末端相连接，最后一区的划线末端不能与第一区的划线相连（4）步骤⑤的培养中，应加入___作为碳源，并加入适量的氮源、无机盐和水等成分。为监测发酵罐中酵母菌活细胞的密度，取2mL发酵液稀释1000倍后，加入等体积台盼蓝染液染色，用如图所示的计数室规格为25x16型的血细胞计数板计数，要达到每毫升4x109个活酵母菌细胞的预期密度，理论上，图中标号①～⑤五个中格里的呈____色的酵母菌细胞总数应不少于____个。11．（15分）我国科学家袁隆平院士带领的研究团队在迪拜成功试种沙漠海水稻，该海水稻具有较强的耐盐碱能力。某研究小组用海水稻为材料进行了一系列实验，并根据实验测得的数据绘制曲线如图1、图2所示。回答下列问题：（1）图1中，A、B、C三组海水稻经NaC1溶液处理后，短时间内叶绿体基质中C3含量最多的是______________组；图2中，限制丙组海水稻光合速率的主要环境因素是________________。（2）研究者用含18O的葡萄糖追踪海水稻根细胞有氧呼吸中的氧原子，其转移途径是________________________________。（3）用NaCl溶液处理后，推测海水稻光合速率下降的原因可能是________________。（4）若想进一步研究不同浓度NaCl溶液对海水稻叶片光合色素的种类和含量的影响，可从各组选取等量叶片，提取并用纸层析法分离色素，观察比较各组色素带的________________。

参考答案一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1、D【解题分析】

光合作用是指绿色植物通过叶绿体，利用光能把二氧化碳和水转变成储存着能量的有机物，并释放出氧气的过程；光合作用的光反应阶段（场所是叶绿体的类囊体膜上）：水的光解产生[H]与氧气，以及ATP的形成．光合作用的暗反应阶段（场所是叶绿体的基质中）：CO2被C5固定形成C3，C3在光反应提供的ATP和[H]的作用下还原生成糖类等有机物。【题目详解】A、蓝藻没有叶绿体，但细胞内含藻蓝素和叶绿素，可以进行光合作用，A错误；B、叶绿体色素是脂溶性色素，可以通过加入无水乙醇为溶解色素，便于提取；色素不溶于盐酸，不能用盐酸提取色素，B错误；C、将叶绿体粉碎加工成匀浆后，可能其中色素分子和相关光合作用的酶活性丧失，所以即便给予一定的光照，光合作用也不能正常进行，C错误；D、叶绿体中光反应产生的ATP，完全被叶绿体内暗反应所利用，D正确。2、C【解题分析】

1.细胞膜的主要成分是脂质和蛋白质，此外还有少量的糖类；组成细胞膜的脂质中，磷脂最丰富，磷脂双分子层构成了细胞膜的基本骨架，此外动物细胞膜中还有少量的胆固醇．2.细胞膜的结构特性是具有一定的流动性，功能特性是具有选择透过性．【题目详解】A、所有细胞都含有脂质，如细胞膜都以磷脂双分子层为基本骨架，但不是都在内质网上合成，如原核细胞内没有内质网，脂质的合成在细胞质内完成，A错误；B、神经递质从突触前膜释放，体现了细胞膜的流动性，B错误；C、白细胞与红细胞的功能不同，凋亡速率也不同，白细胞的功能是吞噬病菌等，所以白细胞凋亡的速率很快，而红细胞具有运输氧气的功能，故凋亡速度相对慢，C正确；D、与原核细胞相比，通常真核细胞的相对表面积更小，细胞的物质运输效率较低，D错误；故选C。3、B【解题分析】

有氧呼吸和无氧呼吸的比较：类型有氧呼吸无氧呼吸必需条件氧气和酶不需要氧气，但必有酶的催化场所细胞质基质（第一阶段）

线粒体（第二和第三阶段）细胞质基质物质变化①1分子C6H12O6和6分子O2和6分子H2O在酶的作用下生成6分子CO2和12分子H2O

②ADP和Pi在酶的作用下生成ATP①1分子C6H12O6（葡萄糖）在酶的作用下生成2分子C3H6O3（乳酸）和少量能量

或

1分子C6H12O6（葡萄糖）在酶的作用下生成2分子C2H5OH（酒精）和2分子CO2和少量能量。

②ADP和Pi在酶的作用下生成ATP能量释放产生大量能量产生少量能量特点有机物彻底分解，能量完全释放有机物氧化没有彻底分解，能量没有完全释放联系①第一阶段完全相同

②实质相同：分解有机物，释放能量

③无氧呼吸进化成有氧呼吸。【题目详解】A、通过呼吸作用将有机物中稳定化学能转换成热能和ATP中活跃的化学能，A正确；B、运动员比赛过程中，主要进行以消耗糖类的有氧呼吸和产生乳酸的无氧呼吸，有氧呼吸CO2产生量等于有氧呼吸O2的消耗量，B错误；C、富含脂肪的种子萌发时，以脂肪作为呼吸底物，由于脂肪中含氢的比例较高，可能O2的消耗量多于CO2的产生量，C正确；D、不同有机物经过一系列的氧化分解最终可能都生成二氧化碳，并且释放出能量产生ATP，D正确。故选B。4、C【解题分析】

1、多糖的单体是葡萄糖。2、构成蛋白质的基本单位是氨基酸，其结构通式是，氨基酸在核糖体中通过脱水缩合形成多肽链，而脱水缩合是指一个氨基酸分子的羧基（-COOH）和另一个氨基酸分子的氨基（-NH2）相连接，同时脱出一分子水的过程；连接两个氨基酸的化学键是肽键，其结构式是-CO-NH-。

3、脱氧核苷酸和核糖核苷酸在组成上的差异有：①五碳糖不同，脱氧核苷酸中的五碳糖是脱氧核糖，核糖核苷酸中的五碳糖是核糖；②碱基不完全相同，脱氧核苷酸中的碱基是A、T、G、C，核糖核苷酸中的碱基是A、U、G、C。【题目详解】A、淀粉、纤维素、糖原都属于多糖，基本单位都是葡萄糖，三者不同的原因是葡萄糖数量和连接方式不同，A错误；B、组成DNA和RNA的元素种类相同，都是C、H、O、N、P，含氮碱基不完全相同，B错误；C、氨基酸脱水缩合形成多肽时，生成的水中的氧来源于氨基酸的羧基，C正确；D、等质量的脂肪和糖类氧化分解，脂肪释放能量多，所以脂肪是良好的储能物质，糖类是主要的能源物质，D错误。故选C。5、D【解题分析】

本题是不同细胞产生的信息分子作用于靶细胞的过程和引起的生理效应，根据题图和选项内容梳理相关的过程，分析解答。【题目详解】A、分泌细胞产生的分泌物与靶细胞相互结合原因是因为靶细胞膜上有受体蛋白，A错误；B、如果分泌细胞为甲状腺细胞，分泌物是甲状腺激素，甲状腺激素含量升高会抑制垂体合成和分泌促甲状腺激素，所以靶细胞可能是垂体，B错误；C、当细胞外液渗透压升高时，可刺激下丘脑渗透压感受器兴奋，分泌抗利尿激素促进肾小管和集合管对水的重吸收，使尿量减少，细胞外液渗透压降低，C错误；D、内分泌腺没有导管，分泌的激素弥散到体液中，随血液流到全身，传递各种信息，因此，临床上可以通过抽取血样来检测内分泌系统的疾病，D正确。故选D。6、B【解题分析】

分析题图：BR促进细胞伸长、分裂和植物发育，类似于植物激素的生长素。当BR浓度高时，会诱导BR11被激活，从而抑制BIN2的活性，BZR1降解降低，使BZR1促进BR调控基因的表达，最后抑制BR合成，使BR在植物体内相对稳定，据此并结合题干问题作答。【题目详解】A、由题干可知，油菜素甾醇类似于生长素，都能促进植物茎秆伸长，A正确；B、由图分析可知，BR浓度升高时，会诱导BR11被激活，从而抑制BIN2的活性，会使BZR1的降解速度减慢，B错误；C、胞内BR的合成速度受胞外BR的反馈调节，使BR在植物体内相对稳定，C正确；D、BR调控基因发生突变可能导致BR合成减少，从而导致植物矮化，D正确。故选B。【题目点拨】本题考查了植物激素的生理作用以及种群特征和结构等方面的知识，要求考生具有一定的识图能力和对问题的分析能力；能够从图中获取相关解题信息，此题难度适中。二、综合题：本大题共4小题7、高压蒸汽灭菌煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒将未接种的培养基放在恒温箱中培养稀释涂布平板法形状、颜色、大小、隆起、边缘、透明度、光泽等特征bcd【解题分析】

微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。菌落数计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。【题目详解】（1）培养基配制时需要对培养基进行灭菌，采用的方法是高压蒸汽灭菌，实验室常用的三种消毒方法的名称是：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒。在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测的方法是：将未接种的培养基放在恒温箱中培养，观察是否有菌落形成。（2）由图1的操作流程可以看出，图1所示方法为：稀释涂布平板法，对分离得到的大肠杆菌可通过观察菌落的形状、颜色、大小、隆起、边缘、透明度、光泽等特征进行形态学鉴定。利用稀释涂布平板法测定细菌数时，筛选平板上的菌落数为31～311，所以1g土壤中的活菌数为个。（3）图2是通过平板划线接种操作。a、操作前用71%的酒精溶液对接种人员的双手进行消毒处理，a错误；b、在划线操作时不能将最后一区的划线与第一区相连，因此不能将第⑤区域的划线与第①区域的划线相连，正确；c、在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，整个过程需要对接种环进行6次灼烧，c正确；d、由于正放培养平板盖子上的冷凝水会顺着流到培养基上和外面，引起杂菌污染，因此平板划线后培养微生物时要倒置培养，并且倒置有利于菌体呼吸，d正确。故选bcd。【题目点拨】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记接种微生物常用的两种方法；掌握鉴定微生物分解菌的原理，能结合图中信息准确答题。8、逆转录酶不同人工合成法目的基因引物能自主复制、有多个限制酶切位点、有标记基因、对宿主细胞无害从预期蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列记忆反应快，反应强烈，产生抗体多【解题分析】

1、基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。2、记忆细胞使得二次免疫反应快而强。【题目详解】（1）由mRNA合成cDNA的过程属于逆转录过程，需要逆转录酶。获得的cDNA片段只包含基因的编码区，没有非编码区，因此与百日咳杆菌中该基因碱基序列不同。（2）可通过化学方法人工合成（人工化学合成）序列较小且已知的基因片段。通过PCR技术大量扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。（3）改造后的腺病毒具有能自主复制、有多个限制酶切位点、有标记基因、对宿主细胞无害等特点，故可用做载体。（4）将白喉杆菌类毒素20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸属于蛋白质工程的范畴，故其基本流程是从预期蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。（5）一定时间内间隔注射该疫苗3次效果更好，其主要原因是体内产生的记忆细胞数量增多，当同种抗原再次侵入人体时二次免疫的特点是短时间内迅速产生大量的抗体和记忆细胞，免疫预防作用更强。【题目点拨】本题考查基因工程的工具和步骤、蛋白质工程和免疫过程等知识，意在考查学生识记和理解能力。9、叶绿体基质8协助扩散减少线粒体内膜细胞质基质、线粒体上移4＜【解题分析】

分析曲线图：前3小时内植物只进行呼吸作用；3～6时，呼吸速率大于光合速率；6～18时，呼吸速率小于光合速率；18～21时，呼吸速率大于光合速率；21～27时，植物只进行呼吸作用；27～30时，呼吸速率大于光合速率；30～42时，呼吸速率小于光合速率；42～45时，呼吸速率大于光合速率；45～48时，植物只进行呼吸作用。在6、18、36、42时，呼吸速率与光合速率相等。【题目详解】（1）图1中①侧为类囊体的外侧，所示的场所是叶绿体基质。物质甲为氧气，产生于叶绿体的类囊体腔内，从叶绿体的类囊体腔（1层膜）扩散至细胞（1层膜）外需要经过叶绿体膜（2层），因此一共穿过4层膜，8层磷脂分子。（2）ATP合成酶也是运输H+的载体，其在跨膜H+浓度梯度推动下可以合成ATP，由此可推测H+跨膜一定是顺浓度梯度，运输方式为协助扩散。若膜两侧的H+浓度梯度突然消失，其他条件不变，光反应减弱，暗反应中的二氧化碳固定是照常进行的，C5去路正常，但是来源减少，因此短时间内暗反应中的C5会减少。（3）植物细胞中含有ATP合成酶的生物膜还有线粒体内膜（有氧呼吸第三阶段能产生大量ATP）。（3）①实验的前3小时叶肉细胞只进行呼吸作用，产生ATP的场所有细胞质基质、线粒体。使用相同强度绿光进行实验时，光合作用减弱，呼吸作用不变，吸收CO2将减少，所以c点上移。②图2中植物呼吸速率与光合速率相等的时间点有4个，在6、18、36、42时。呼吸速率与光合速率相等。从图中CO2含量的差值比较可知，实验中该植物前24小时差值比后24小时的小，有机物积累量小于后24小时有机物积累量。【题目点拨】熟悉光合作用和呼吸作用的过程是解答本题的关键。10、pH冷空气（压力为）100kPa、（温度为）121℃50℃a、c、d工业废甲醇无40【解题分析】

1、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。2、分析题图：①称量土样，里面含有需要分离的酵母菌；②表示梯度稀释和涂布平板；③④表示平板划线法，进行纯化培养；⑤表示扩大培养，获得更多的酵母菌。【题目详解】（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量、溶化，调节培养基的pH，及时对培养基进行分装，高压蒸汽灭菌。在加热排除高压锅内原有的冷空气后，将高压锅密闭，继续加热，通常在（压力为）100kPa、（温度为）121℃的条件下，维持15-30min，可达到良好的灭菌效果。（2）倒平板需要将培养基冷却至50℃进行。（3）a、接种针、接种环使用前都必须灭菌，做到无菌操作，a正确；b、挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定培养液中，而不是细胞内甲醇的含量，b错误；c、划线时应避免划破培养基表面，否则大量酵母菌聚集，不能形成正常菌落，c正确；d、第二区域以后的划线区域的菌种来源于上一区域的末端，所以第二区以后的划线起始端要与上一区的划线的末端相连接，并且最后一区的划线末端不能与第一区的划线相连，d正确，以便于分离菌落。故选acd。（4）本实验的目的是分离出可利用工业废甲醇的酵母菌，所以应该以甲醇作为碳源，活细胞膜具有选择透过性，经等体积台盼蓝染液染色，无色细胞才计数；为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，达到每毫升4×109个活细胞的预期密度，则n÷80×400÷（0.1×103）×2000=4×109，则5个中方格中无色酵母菌不少于40。【题目点拨】本题主要考查对食用菌菌种扩大培养并保存的过程中涉