银法利和烯酰吗啉对烟草黑胫病菌的生物活性

银法利和烯酰吗啉对烟草黑胫病菌的生物活性

由病毒属的黑胫骨草，是世界上最严重的卷烟生产疾病之一。同时，它也是中国稻草的主要疾病。我国平均每年因烟草黑胫病造成的经济损失达1亿元以上,仅次于烟草病毒病。烟草黑胫病在我国分布范围很广,广东、广西、福建、湖南、云南、四川、湖北、浙江、安徽、河南、山东等省(区)是烟草黑胫病危害严重省份。甲霜灵是防治烟草黑胫病的主要药剂,随着部分烟区连作年限的增加和防治药剂的单一使用,烟草黑胫病菌对甲霜灵的抗药性也随之产生。Shew研究发现,连年施用甲霜灵后,烟草黑胫病菌的平均抑制中浓度(EC50)值呈上升趋势,袁宗胜、马国胜等研究表明,黑胫病菌群对以甲霜灵为代表的苯基酰胺类杀菌剂产生明显抗性。要避免或减缓病菌对杀菌剂产生抗药性,轮换使用不同作用机制的杀菌剂是可行的方法之一,为此,2008~2010年,测定了银法利(氟吡菌胺+霜霉威盐酸盐)和烯酰吗啉这两种新杀菌剂对烟草黑胫病的毒力,并与常用杀菌剂进行了田间药效对比试验,现将结果报道如下。1材料和方法1.1烯酰吗啉原药68.75%银法利(6.25%氟吡菌胺+62.5%霜霉威盐酸盐)悬浮剂为拜耳作物科学(中国)有限公司提供,96%烯酰吗啉原药为山东荣邦化工有限公司提供,50%烯酰吗啉可湿性粉剂(商品名:安克)为市售德国巴斯夫股份有限公司产品,68%精甲霜灵·代森锰锌水分散粒剂(商品名:金雷多米尔·锰锌)为市售先正达(苏州)作物保护有限公司产品,72%霜脲氰·代森锰锌可湿性粉剂(商品名:克露)为市售美国杜邦公司产品。1.2甲霜灵耐药型菌株与甲霜灵耐药型菌株的比例供试的7个菌株见表1,均分离自广西田间自然发病的烟草植株。按袁宗胜等的方法,它们分别为甲霜灵敏感型菌株(MS,EC50值<0.1mg/L),甲霜灵一般耐药型菌株(MI,EC50值在0.1001~0.4001mg/L之间)和甲霜灵耐药型菌株(MR,EC50值>0.4001mg/L)。1.3药剂浓度及培养平板采用菌丝生长速率法进行毒力测定。96%烯酰吗啉原药先用丙酮溶解,再用灭菌蒸馏水配成不同的浓度系列(0、0.15625、0.3125、0.625、1.25、2.5、5.0mg/L,a.i.),并使各浓度中所含丙酮的量一致,68.75%银法利悬浮剂直接用灭菌蒸馏水配成不同的浓度系列(0.2×68.75%、0.6×68.75%、1.8×68.75%、5.4×68.75%、10.8×68.75%、16.2×68.75%mg/L,a.i.),然后分别加入熔化后冷却至50℃左右的100mL燕麦培养基中,摇匀后倒入直径9cm的灭菌培养皿,即制成不同药剂的系列浓度含药培养基平板。将在燕麦培养基上培养了7d的菌株,用打孔器于菌落边缘处均匀打取直径为5mm的菌圆片,移到不同的含药燕麦培养基平板上,每皿一片,置于28℃恒温箱内培养,每个药剂浓度处理重复3次。当对照(即不含杀菌剂的培养基平板)的菌落直径至少达5cm时,用垂直十字交叉法测量菌落直径,计算抑制率,求出各菌株的毒力回归方程、相关系数和EC50值。1.4抗寒性甲醇菌的栽培植物抗病性试验1.4.1草和草的准备供试烟草品种为云烟85。将育好的烟苗播在花盆中,每盆3株,待其长至8~10叶时备用,每处理3盆共9株,重复3次。1.4.2精甲霜灵代森锰锌水分散粒剂的制备药剂处理设68.75%银法利悬浮剂1.00、0.67mg/L,50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.67、0.5mg/L,68%精甲霜灵·代森锰锌水分散粒剂1.25mg/L,72%霜脲氰·代森锰锌可湿性粉剂1.25mg/L以及清水对照共7个处理。采用灌淋法施药,每株烟灌淋药液100mL,使药液沿茎基流渗到根际周围的表土里。1.4.3接种菌液制备及接种后管理施药后第24小时进行病原菌接种。接种菌株为甲霜灵耐药型菌株LLLH02,接种的游动孢子液参照杨建卿等的方法制备:将在燕麦培养基平板上培养了7d的烟草黑胫病菌的菌丝连同培养基划成约5mm×5mm的小块,然后把菌丝块挑入装有皮氏液及3滴土壤浸出液的培养液中,待产生大量的孢子囊后加无菌水捣碎,调整浓度为约1×104个孢子囊/mL,于4℃下放置20min后取出,室温下稀释50倍制成接种菌液。接种时,每株烟淋菌液50mL。接种后的烟株置于自然条件进行常规管理,于接种后22d调查各处理的发病情况,计算病情指数及防治效果。病情分级标准按刘绍文等的方法。0级:全株无病;1级:茎基部病斑不超过茎围的1/2,或半数以下叶片或顶叶轻度凋萎,或下部少数叶片出现病斑;2级:茎基部病斑超过茎围的1/2,或(和)半数以上或部分腰叶以下叶片凋萎;3级:茎基部病斑环绕茎围,或(和)2/3以上叶片或下二棚以上叶片凋萎;4级:病株枯死。1.5农村公安试验1.5.1试验研究区域2008年、2009年的试验在广西德保县足荣乡进行,2010年的试验分别在广西德保县都安乡、富川县富阳镇进行。在德保县试验的烟草品种为当地的主栽品种云烟85,在富川县试验的品种则为高感黑胫病的品种KRK26。1.5.2不同的处理2008年和2009年的试验设7个处理(与1.4.2同)。于烟草团棵期、当地黑胫病始发期用灌淋法施药,每株烟灌淋100mL药液,共施药3次,每次间隔15d,2008年每处理4个重复,2009年每处理3个重复。试验地烟株按烟草行业标准种植和管理,2008年每小区22~27株烟,2009年每小区约30株烟,随机区组排列。2010年在德保县的试验设68.75%银法利悬浮剂0.83mg/L,50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.83mg/L和清水对照3个处理。于烟草团棵期、当地黑胫病始发期施药,每株烟灌淋100mL药液,由于严重干旱缺水,因此仅施药2次,4月29日施第1次药,5月18日施第2次药,每处理3次重复,施药区每小区约90株烟,清水对照区每小区40株烟,随机区组排列。2010年在富川县的试验设68.75%银法利悬浮剂0.83mg/L,50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.83mg/L,72%霜脲氰·代森锰锌可湿性粉剂1.25mg/L及清水对照共4个处理。于烟草团棵期、当地黑胫病始发期用灌淋法施药,每株烟灌淋100mL药液,4月20日施第1次药,5月7日施第2次药,5月22日施第3次药,每处理4次重复,每小区30~35株烟,随机区组排列。1.5.3检查方法最后一次施药后20d进行调查,调查记录各处理小区烟株的总株数、各级病株数,计算病情指数和防效。病情分级标准同1.4.3。2结果与分析2.1银法利和烯酰吗啉的交互抗性银法利和烯酰吗啉对7个烟草黑胫病菌株的菌丝生长均有很好的抑制作用。甲霜灵敏感型、一般耐药型及耐药型的菌株对银法利和烯酰吗啉的敏感性并无明显差异,银法利和烯酰吗啉对7个菌株的EC50值范围分别为1.1090~1.9661、0.6218~1.0625mg/L,说明银法利、烯酰吗啉和甲霜灵无交互抗性(表2、表3)。2.2g/l的防效接种后22d调查,各药剂对耐甲霜灵菌株LLLH02引起的烟草黑胫病的盆栽防治效果见表4。其中68.75%银法利悬浮剂1.00mg/L的防效最好,达88.12%,与68.75%银法利悬浮剂0.67mg/L的防效(77.12%)差异达5%显著水平,与其余药剂处理的防效差异达1%显著水平;68.75%银法利悬浮剂0.67mg/L的防效居第二,与50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.5mg/L的防效62.85%差异达5%显著水平;68%精甲霜灵·代森锰锌水分散粒剂1.25mg/L的防效最差,仅为56.02%。2.3精甲霜灵代森锰锌水分散粒剂与其他药剂的防效对比见表62008年试验地黑胫病发病整体均较轻,各药剂的防效均较好。其中68%精甲霜灵·代森锰锌水分散粒剂1.25mg/L处理的防效稍低,为75.71%,与68.75%银法利悬浮剂1.00、0.67mg/L的防效差异达1%显著水平,与50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.67、0.5mg/L的防效差异达5%显著水平,72%霜脲氰·代森锰锌可湿性粉剂1.25mg/L处理的防效为86.81%,与其他处理的差异均不显著(表5)。2009年试验地黑胫病发病较2008年重,各药剂处理间的防效差异较明显。其中68.75%银法利悬浮剂1.00mg/L的防效最好,达88.34%,与68%精甲霜灵·代森锰锌水分散粒剂1.25mg/L、50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.5mg/L处理的防效差异达1%极显著水平,与72%霜脲氰·代森锰锌可湿性粉剂1.25mg/L、50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.67mg/L处理的防效差异达5%显著水平;68.75%银法利悬浮剂0.67mg/L的防效84.26%居第二,与68%精甲霜灵·代森锰锌水分散粒剂1.25mg/L、50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.5mg/L处理的防效差异达1%极显著水平,与其他药剂处理的防效差异不显著(表6)。2010年在德保县的大区防治示范试验调查结果,对照区的平均病指为21.65,68.75%银法利悬浮剂0.83mg/L处理区的平均病指为2.50,平均防效为88.83%,50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.83mg/L处理区的平均病指为5.80,平均防效为73.58%,两个药剂处理的防效差异不显著。2010年在富川县的小区试验中,由于试验品种KRK26高感黑胫病,各处理黑胫病发病严重。第3次施药后20d调查,对照区几乎已全部发黄枯死,病指高达88.26。药剂处理区的烟株发病也很严重,但在烟田边目测仍可看出施药区与对照区之间有明显的区别,尤其是68.75%银法利悬浮剂0.83mg/L处理区的烟株明显较其他处理区的烟株高,且该处理的烟株仍保持绿色。调查结果,68.75%银法利悬浮剂0.83mg/L处理区的病指为43.73,防效仍达50.55%,与50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.83mg/L处理(防效26.97%)和72%霜脲氰·代森锰锌可湿性粉剂1.25mg/L处理(防效15.76%)差异达1%极显著水平,50%烯酰吗啉可湿性粉剂0.83mg/L处理的防效与72%霜脲氰·代森锰锌可湿性粉剂1.25mg/L处理的差异达5%显著水平(表7)。3银法利、烯酰吗啉的抗药性室内毒力测定表明,银法利和烯酰吗啉对烟草黑胫病菌的菌丝生长具有很好的抑制作用,且与甲霜灵无交互抗性。3年的田间防治试验结果表明,68.75%银法利悬浮剂与50%烯酰吗啉可湿性粉剂对烟草黑胫病具有很好的防治效果,明显优于常用药剂68%精甲霜灵·代森锰锌水分散粒剂的防效。因此,银法利、烯酰吗啉可作为与甲霜灵进行轮换使用的杀菌剂来防治烟草黑胫病,以避免或减少病菌对杀菌剂产生抗药性,延长杀菌剂使用寿命。胡燕等研究认为烟草黑胫病菌对烯酰锰锌存在较大的抗性。因此,尽管