芦丁的定量分析方法概述

芦丁的定量分析方法概述

氨基乙醇又名黄酮，是碳水化合物、维生素p和紫吡鲁酯。广泛分布于豆科植物槐、冬青植物、赤霉植物、蓼科植物、麦冬植物、麦冬植物等。它具有抗炎作用、抗旱性和类固醇类原酶的作用，能降低毛细血管的渗透性。临床上用于预防和治疗脑溢血、高血压、结膜出血、紫薇、急性化脓性胃炎和慢性支气管炎。许多中药及其制剂皆以芦丁为定量指标,本文对芦丁的定量方法作一综述。1检测测定方法的确定李晓芳采用此方法测定了银杏叶中芦丁的含量。标准曲线的制备:精密吸取0.157mg/ml的芦丁对照液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0ml分别置10ml容量瓶中,用30%乙醇稀释至刻度,在250nm波长处作紫外检测,建立回归方程。样品测定:取干燥的银杏叶,60%丙酮提取,提取液减压浓缩,离心除沉淀,上清液用有机溶媒萃取,萃取液浓缩干燥,精密称取干燥品一定量,置10ml量瓶中,用30%乙醇稀释至刻度,按标准曲线同样条件作紫外检测,计算芦丁含量。平均回收率97.7%。宋寅生等建立了催化氧化—紫外分光光度法,不经分离同时测定复方芦丁片中维生素C和芦丁的含量,平均回收率分别为97.3%,99.6%,样品测定结果与标准方法一致。陈新国测定了降糖口服液中芦丁的含量,表明此方法简便、快速,重现性好。2芦丁和槲皮素含量测定芦丁是槲皮素3位上的羟基与芸香糖脱水形成的苷,二者吸收光谱严重重叠,王丽琴等运用卡尔曼滤波对重叠的谱峰有较强的分辨能力,同时测定槐米中芦丁和槲皮素的含量。吸光系数的确定:分别精密称取2.0mg的芦丁和槲皮素,分别用甲醇定容至25ml,再分别吸取一定体积,用甲醇-水(1∶4)定容至不同浓度的对照溶液,在230~300nm范围内,每间隔2nm测其吸光度,数据进行线性回归,求出各自的吸光系数。吸光系数矩阵为H36×2。样品测定:模拟样品,分别移取不同体积的芦丁和槲皮素对照溶液于同一容量瓶中,以甲醇-水(1∶4)稀释至刻度,在同样的波长范围测吸光度,上机滤波处理,求出其含量;对于实际样品,准确称取一定量样品,甲醇溶解后,以上述相同方法测定含量。实验证明样品中芦丁和槲皮素的回收率均达97%。3标准曲线及回收率薄层色谱条件:碱性硅胶GCMC-Na薄层板(含4%醋酸钠),展开剂为醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(6-5-1-1),饱和15min,展距10cm,10%三氯化铝乙醇液喷雾,晾干后显色荧光定位后扫描测定。扫描条件:波长λS=275nm,λR=320nm。标准曲线:精密称取芦丁对照品10mg,用甲醇定容至10ml,薄层板上点样2~6μl,按上述条件展开,显色,扫描测定,绘制标准曲线。样品测定:取样品内容物粉末,精密称取2g,加乙醚回流提取4h,弃乙醚液,加甲醇回流提取8h,挥尽甲醇,残渣加乙醇定容于10ml容量瓶中,用定量点样毛细管吸取5μl,对照品3μl分别点于同一薄层板上,按上述条件展开、显色、扫描,计算含量,芦丁回收率为98.26%。杨海燕等采用单波长聚酰胺薄层扫描法测定了小蓟中芦丁的含量,以乙醇-水(1∶9)为展开剂,样品经40%甲醇超声提取,420nm反射锯齿扫描测定。4工作曲线的制备马志茹等利用单扫示波极谱法对样品不经分离,直接测定了槐米和芦丁制剂中芦丁的含量,芦丁回收率达99%以上,方法准确可靠。仪器:JP3-1型示波极谱仪,三电极系统:滴汞工作电极、饱和甘汞参比电极,铂丝对电极;XJP-821型新极谱仪,303A型静汞电极,3036型X-Y轴记录仪。实验条件:pH=3.5的0.1mol/LNaAc-Hac溶液为底液,扫描电位-1.10—-1.60V;工作曲线:取芦丁对照品,用热无水乙醇配成浓度为1.0×10-2mol/L的标准溶液,分别精密吸取不同量于10ml的容量瓶中,加支持电解质至刻度,在极谱仪上单扫记录导数还原波,制备工作曲线。样品的测定:精密称取干燥的样品细粉0.3g,加适量乙醇回流提取2h,提取液转移至25ml容量瓶中,用乙醇定容,取50μl上清液于10ml电解杯中,加入底液,按上述条件测定,计算样品中芦丁含量。5含量测定及方法张晓燕等采用此法测定了槐花散中芦丁的含量。色谱条件:吉尔森GAD-E高效液相色谱仪,HypersilC18色谱柱,流动相为甲醇-水-冰醋酸(40-57.5-2.5),检测波长为254nm,柱温为室温,流速为1ml/min。标准曲线的制备:精密称取芦丁对照品,用甲醇配成不同浓度的标准溶液,分别进样记录峰面积,计算回归方程。样品测定:取槐花散,加水煎煮,取滤液,精密量取100μl,精密加入醋酸乙酯6.00ml,振荡提取,离心10min,精密量取上清液5.00ml,氮气挥干,精密加入甲醇100μl,超声振荡溶解,离心,取上清液进样,计算含量。梁洁怡、杨美华等、程小霞所用色谱条件基本与上述条件相同。李仲等所用色谱条件为:采用KEYSTONE-ODS(250mm×4.6mm)色谱柱,以甲醇∶水(48.5∶51.5)为流动相,检测波长360nm;王福成等所用色谱条件为:以甲醇-1%冰醋酸(30∶70)为流动相,检测波长359nm;朱丽华等所用色谱条件:ShimpackCLCC18,流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长360nm。6样品中芦丁及其它组分含量的测定孙国祥等用毛细管区带电泳叠加对比法对复方降压片中5个组分进行了定量分析。电泳条件:紫外检测波长246nm,灵敏度0.010AUFS,电流65uA,以50mmol/L硼酸溶液作背景电解质,重力进样5~20s,检测温度24℃。实验前用0.1mol/L的氢氧化钠溶液冲洗毛细管15min,再用去离子水冲洗5min,之后用背景电解质冲洗10min,每两次进样前用背景电解质加压冲洗5min。样品测定:取复方降压片,研细,精密称约10片重,置250ml量瓶中,用50%乙醇定容,超声30min,滤过;再精密称取芦丁及各对照品一定量,用样品溶液定容至50ml,超声20min,得标准加入溶液;取样品溶液和标准加入溶液按上述条件进样,记录峰面积,按标准加入法公式计算样品溶液中芦丁及其它各组分含量。孙莲李向军等亦采用此法对芦丁进行了定