生物化学实验习题及解答

生物化学实验习题及解答一、名词解释1、pI；2、层析；3、透析；4、SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳；5、蛋白质变性；6、复性；7、Tm值；8、同工酶；9、Km值；10、DNA变性；11、退火；12、增色效应二、基础理论单项选择题1、用下列方法测定蛋白质含量，哪一种方法需要完整的肽键？（）A、双缩脲反应B、凯氏定氮C、紫外吸收D、羧肽酶法2、下列哪组反应是错误的？（）A、葡萄糖——Molish反应B、胆固醇——Libermann-Burchard反应C、色氨酸——坂口（Sakaguchi）反应D、氨基酸——茚三酮反应3、Sanger试剂是（）A、苯异硫氰酸B、2，4-二硝基氟苯C、丹磺酰氯D、?-巯基乙醇4、肽键在下列哪个波长具有最大光吸收？（）A、215nmB、260nmC、280nmD、340nm5、下列蛋白质组分中，哪一种在280nm具有最大的光吸收？（）A、色氨酸的吲哚基B、酪氨酸的酚环C、苯丙氨酸的苯环D、半胱氨酸的硫原子6、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据各种蛋白质（）A、在一定pH值条件下所带的净电荷的不同B、分子大小不同C、分子极性不同D、溶解度不同7、蛋白质用硫酸铵沉淀后，可选用透析法除去硫酸铵。硫酸铵是否从透析袋中除净，你选用下列哪一种试剂检查？（）A、茚三酮试剂B、奈氏试剂C、双缩脲试剂D、Folin-酚试剂8、蛋白质变性是由于（）A、一级结构改变B、亚基解聚C、空间构象破坏D、辅基脱落9、用生牛奶或生蛋清解救重金属盐中毒是依据蛋白质具有（）A、胶体性B、粘性C、变性作用D、沉淀作用10、有关变性的错误描述为（）A、蛋白质变性后，其一级结构和空间结构改变B、蛋白质变性后，其理化性质和生物学活性改变C、加热、紫外线照射、超声波等可以引起蛋白质变性D、变性蛋白质粘度增加，易被酶水解，易沉淀11、双链DNA热变性后（）A、黏度下降B、沉降系数下降C、浮力密度下降D、紫外吸收下降12、酶的活化和去活化循环中，酶的磷酸化和去磷酸化位点通常在酶的哪一种氨基酸残基上？（）A、天冬氨酸B、脯氨酸C、赖氨酸D、丝氨酸13、在生理条件下，下列哪种基团既可以作为H的受体，也可以作为H的供体？（）A、His的咪唑基B、Arg的胍基C、Cys的巯基D、Trp的吲哚基三、填空1、脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（）色物质，而其他氨基酸与茚三酮产生（）色的物质。2、通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的（）、（）、（）三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。3、移液枪在每次实验后应将刻度调至（），让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命，并严禁吸取（）。4、使用离心机时，如有噪音或机身振动时，应立即（），并且离心管须对称放入套管中，防止机身振动，若只有一支样品管，则另外一支要用（）代替。5、测定蛋白质浓度的方法主要有（）、（）、（）。6、利用蛋白质不能通过半透膜的特性，使它和其他小分子物质分开的方法有（）和（）等。7、核酸在260nm附近有强吸收，这是由于（）。8、双键DNA热变性后，或在pH2以下，或在pH12以上时，其OD260（），同样条件下，单键DNA的OD260（）。9、硝酸纤维素膜可结合（）链核酸。将RNA变性后转移到硝酸纤维素膜上再进行杂交，称（）印迹法。10、常用二苯胺法测定（）含量，用苔黑酚法测定（）含量。11、变性DNA的复性与许多因素有关，包括（）、（）、（）、（）、（）。12、温度对酶活力影响有以下两方面：一方面（），另一方面（）。13、维生素C是（）酶的辅酶，另外还具有（）作用。14、在分光光度计的使用或检定中，（）的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标，它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。（）的误差越大，测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性。四、问答1、紫外分光光度法测定核酸含量的原理。2、蛋白质变性与沉淀的关系。3、牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。4、试述凝胶成像系统操作时应注意的事项。++5、若样品中含有蛋白质和核苷酸等杂质，如何排除干扰？6、体液血糖测定有哪些方法？?7、DNA在电场中的迁移率取决于哪些因素？8、琼脂糖凝胶有哪些注意事项？9、考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么？10、何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？11、蛋白质分离和纯化的一般方法？12、如何正确选择核酸电泳指示剂？参考答案一、名词解释1、指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值，用符号pI表示。2、按照在移动相和固定相（可以是气体或液体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。3、通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。4、在去污剂十二烷基硫酸钠存在下的聚丙烯酰氨凝胶电泳。SDS只是按照分子的大小，而不是根据分子所带的电荷大小分离的。5、生物大分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照，热，有机溶济答；电泳时点样端应靠近负极，因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。2.用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的作用,为什么？答；空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度，但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响。3.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜的电泳原理？答；血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而各种蛋白质等电点不同，且在PH为8.6时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异，所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。4.何谓Rf值？影响Rf值的因素？答;Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关，对同一种物质来讲Rf是一个常量。5.什么是盐析？盐析会引起蛋白质的变性吗？一般用什么试剂?答;盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性，因为蛋白质的结构并未发生改变，去掉引起盐析的因素蛋白质仍能溶解；一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析6.简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？答;还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度计测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度。7.影响蛋白质沉淀的因素是什么？沉淀和变性有什么联系？答;水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。这些因素包括溶液的酸碱度、盐溶液的浓度、温度、重金属离子以及有机溶剂等。变性蛋白质不一定沉淀，沉淀的蛋白质不一定变性。沉淀时蛋白质可能仍然保持天然构像，而变性是蛋白质的高级结构被破坏失去活性。8.简述薄层层析法分离糖类的原理/?答;薄层层析的实质就是吸附层析，也就是在铺有吸附剂的薄层上，经过反复地被吸附剂吸附以及被扩展剂扩展的过程。而吸附剂对不同的物质的吸附力不同，从而使糖在薄层上的涌动速度不同达到分离的目的9.等电点的定义？蛋白质在等电点时有哪些特点？答;当溶液的PH为一定数值时，其中的蛋白质正负电荷相等，即净电荷为零，此时的PH值就是该蛋白质等电点。蛋白质在等电点时的溶解度最小。10.蛋白质显色黄色反应的原理是什么?反应结果为什么深浅不一？答;含有苯环的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黄色的物质，而且不同蛋白质中所含的苯环数量不同，造成与试剂反应的程度不同，因此呈现颜色深浅不一。11.RNA水解后的三大组分是什么？怎样各自验证的？答;核糖，磷酸，嘌呤碱。核糖+苔黒酚—Fe（浓HCI）绿色物质；磷酸+钼酸铵——蓝色；嘌呤碱+硝酸银——白色12.等电点时为什么蛋白质溶解度最低？答;蛋白质形成胶体二等条件是带电荷，从而在外表面形成水化膜，导致各胶体颗粒不结合，当PH等于PI时，静电荷为零，蛋白质分子之间不存在排斥，则聚集沉淀，所以在等电点时溶解度最小。13.鸡蛋清可以用作铅汞中毒的解毒剂是为什么?答;由于重金属离子能与蛋白质中带负电基团如—COOH等作用，生成难溶重金属的蛋白质盐，减少机体对重金属的吸收。14.血清醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白依次分为哪几条带？哪带电泳最快？影响电泳速度有哪些？答;有血清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白、r-球蛋白；其中血清蛋白点用最快。影响因素蛋白质所带电荷数，分子大小与形状以及缓冲液浓度。15.什么是抑制剂？什么是变性剂？区别是什么？答;凡是能使酶活性降低而不使酶失活变性的物质成为抑制剂；凡是能引起蛋白质变性失活的物质叫变性剂。抑制剂只是抑制蛋白质的特性而变