小儿健脾肠泰口服液质量标准研究

小儿健脾肠泰口服液质量标准研究

儿童健脾肠泰口服是科技部根据该项目协助开发的一个南药品种。它由葛根、椰子林、猪苓、腹泻、香蕉籽、白术和番木瓜组成。具有益脾除湿、益水止泻的功效，用于治疗儿童腹泻。为了保证药品的质量,我们采用薄层色谱法,对方中的主要药物白术、泽泻、葛根进行了鉴别,同时采用高效液相色谱法,对方中的君药葛根进行了含量测定。1小肠泰口服液200mmAgilent1100高效液相色谱仪;色谱柱:CLC-ODS(250×4.6mm,10μm);微量进样品(上海医用激光仪器厂)。薄层层析硅胶G(60型)(中国青岛海洋化工集团公司出品);薄层层析缸(100×200mm)(上海信谊仪器厂);微量进样品(上海安亭微量进样器厂)。小儿肠泰口服液自制,批号为0701201;阴性对照液自制(按处方药味除去被测药材,并按成方工艺及供试品溶液的制备方法制备);白术(批号120925-200707)、泽泻(批号:120983-200503)、葛根素(批号:0752-200708),伏苓(批号:0932-200902),均购于中国药品生物制品检定所,甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。2为实现性别鉴定，采用膜色谱法进行定性认证2.1对照药材的制备取本品20mL,置分液漏斗中,用氯仿振摇提取2次,每次30mL,合并氯仿液,蒸干,残渣加氯仿1mL使溶解,作为供试品溶液。另取白术对照药材1.5g,加水50mL,加热煎煮30min,滤过,滤液置分液漏斗中,按上述方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷-苯-醋酸乙酯(14︰3︰3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,在105℃加热约3min,置紫外光灯下检视。供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性样品无干扰。2.2照药材溶液取泽泻对照药材2g,加水50mL,加热煎煮30min,滤过,滤液按鉴别2.1项下供试品溶液同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取鉴别(1)项下的供试品溶液与上述对照药材溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-丙酮(6︰1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,在105℃加热约3min。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的紫红色斑点。2.3氯甲烷-甲醇-水3.2.5%取本品作为供试品溶液。另取葛根素对照品,加甲醇制成每1mL中含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各1μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(7︰2.5︰0.25)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝色荧光斑点。2.4香草醛硫酸-乙酸乙酯-甲醛对照法取本品10mL,用50mL乙醚萃取两次,合并萃取液,水浴蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液;另取茯苓对照药材的粉末1g,加乙醚50mL,超声处理10min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶5∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%香草醛硫酸-乙醇(4∶1)混合溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的主斑点。3葛根素的含量测定3.1检测波长和温度色谱柱:CLC-ODS(250×4.6mm,10μm),流动相:甲醇-pH3.0(HAc调)水(25∶5),检测波长:250nm,流速:1mL/min,柱温:25℃。研究中发现葛根素保留时间随着温度的变化有显著性变化,根据试验结果,选择柱温为25℃。见表1。3.2对照溶液的制备精密称取干燥至恒重的葛根素对照品15mg,置50mL容量瓶中,加95%乙醇定容,摇匀,即得(浓度为0.30mg/ml)。3.3续滤ld50精密吸取本品1.0mL(约含葛根药材0.15g),置于25mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,弃去初滤液,收集续滤液即得。3.4阴性溶液的制备除去葛根,模拟工艺,制得葛根的阴性对照品,按供试品溶液制备方法,制得阴性对照品溶液。3.5与邻近色谱峰的分离度在选定条件下,供试品中葛根素可与其他组分基线分离,与邻近色谱峰的分离度按葛根素峰计算,理论塔板数按葛根素峰计为5874,分离度为2.48,R>1.5,结果见图1、图2。阴性对照品的HPLC见图3。3.6标准品溶液的配制取干燥至恒重的葛根素对照品适量,精密称定,加水制成0.301mg/ml的溶液,用0.45μm微孔滤膜滤过。分别精密吸取0.10、0.20、0.40、0.60、0.80mL于1mL量瓶中,加水稀释至刻度,制成浓度分别为0.0301、0.0602、0.1204、0.1806和0.2408mg/ml的对照品溶液。分别吸取不同浓度的对照品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定。以葛根素对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,添加原点(0,0),进行线性回归,得回归方程:Y=1823335.294X+27640.52738,r=0.9999,结果表明在0.602μg～0.816μg范围内葛根素线性关系良好。3.7精密度测试取吸取供试品溶液重复进样5次,每次10μl检测葛根素峰面积值,RSD=0.53,表明本仪器精密度较好。结果如表2所示。3.8重复试验精密吸取本品1.0mL,共5份,按供试品溶液的制备方法操作,RSD为0.98%,表明该方法重现性良好。结果见表3。3.9样品稳定性试验精密吸取样品(批号:20071201)1.0mL,置25mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,收集续滤液作为供试品溶液。取供试品溶液分别于0、4、8、12、18、24、32、40、48h时按含量测定项下的色谱条件进样分析,RSD为0.79%,即样品溶液在24h内稳定。样品稳定性较好,能满足测定的要求。结果见表4。3.10加标回收率测定精密吸取已知含量(2.0838mg/ml)的本品0.1mL,共5份,各精密加人0.301mg/ml的葛根素溶液0.75mL,加水稀释至5mL,摇匀,0.45μm微孔滤膜滤过,分别精密吸取20μl进样,测定,计算,计算公式为:回收率=(测得总量-样品含量)÷加入量×100%。计算平均回收率为100.29%,RSD为0.41%,果表明样品测定方法可行,符合含量测定要求。结果见表5。3.11求解及计算结果精密吸取成品1.0mL,置于25mL容量瓶中,按上述方法操作,每批样品取样3份,平行测定求得平均值。以上样品葛根素含量在18.078mg/支～20.531mg/支,平均为19.33mg/支,结合生产实际,制定本品含葛根以葛根素(C21H20O9)计,为10批测得值最小值的80%,即不得少于14.46mg/支。见表6。4小儿健脾肠泰口服液中药物鉴别小儿健脾肠泰口服液由四苓散配伍健脾类药物组成,原方为知名老中医多年诊治小儿脾虚湿盛腹泻的经验总结,其从祖国医学整体观念出发,结合小儿生理病理特点,辩证组方,取葛根升阳生津止泻为君药,白术、茯苓健脾益气为臣药;猪苓、泽泻、车前子分利水湿从膀胱而出为佐药,木瓜育阴生津共为使,诸药合用,共奏健脾渗湿、利水止泻之功,因此,本口服液是一行之有效的治疗小儿脾虚泄泻的药物。小儿健脾肠泰口服液处方中的药味较多,成分复杂,因此给药味的薄层鉴别带来了很大的困难,在对白术进行鉴别时,曾以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(50∶1)、石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(50∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液显色,在105℃加热至斑点显色;对泽泻进行鉴别时,曾以正己烷-醋酸乙酯-甲酸(15∶2∶0.5)、甲苯-醋酸乙酯-甲酸(14∶7∶2)、环己烷-乙酸乙酯-丙酮(4∶1∶1)为展开剂展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃下加热至斑点显色。通过多次的摸索试验,以及对样品前处理的种种筛选,得出了薄层效果较好的白术、泽泻、葛根的薄层鉴别,阴性无干扰。3批试验结果