临床微生物实验室血培养规范刘英

临床微生物实验室

血培养操作规范刘英2015-6-11

血液及无菌体液

——最有意义的病原学检测标本根据培养结果：选择正确的抗感染治疗方案

调整经验治疗方案

判断感染性疾病的类型评价疗效及预后正确采取感染控制措施是否隔离减少院内感染监测敏感事件

（如：生物恐怖）完整的血培养过程医师开出医嘱护理人员收集送检样本实验室检测、分离并鉴定导致血流感染的微生物三级报告：为临床医生提供抗菌药物敏感性试验结果我院：10年统计新生儿20%

13-14年6-8%国内血培养现状

—阳性检出率低

10%

（国外约为15％）原因何在？血流中含菌量低血液中抗菌物质抗生素的应用培养条件限制血培养的临床实践欠规范！！一、采血指征可疑感染患者出现以下一种或几种特征时，可以考虑采集血培养：

a)发热（≥38℃）或低温（≤36℃）；

b)寒战；c)白细胞计数增多（计数>10.0×109/L，特别有“核左移”时）或减少（计数<3.0×109/L）；d)皮肤黏膜出血；

e)昏迷；

f)多器官衰竭；

g)血压降低；h)C反应蛋白升高；

i)降钙素原（PCT）升高；

j)1,3-β-D-葡聚糖（G试验）升高；

k)突然发生的急性呼吸、体温和生命体征改变。

采血时间

宜在寒战或高热高峰前后采集，用抗菌药物之前采集。

03060时间(分钟)体温血培养采血时机细菌浓度血培养套数

应同时采集2～3套血培养，2d～5d内无需重复采集血培养。只有在怀疑感染性心内膜炎或其它血管内感染（如导管相关性感染）时，才有必要间隔多次采集血培养。对于新生儿，采集一瓶儿童需氧瓶，宜同时做尿液和脑脊液培养。

采血量成人每瓶采血量8mL～10mL，儿童1mL～5mL，但不应超过患儿总血量的1%。血液和肉汤之比为1：5～1：10。新生儿0.5mL。

采血量充足的患者

宜配套采集需氧瓶和厌氧瓶，将血液先注入厌氧瓶，后注入需氧瓶。

采血量不足的患者

应将足量血标本先注入需氧瓶，再将剩余血液注入厌氧瓶。有利于分离出真菌、铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌。

血培养瓶运送

血培养瓶应尽快送至实验室孵育或上机，如果运送延迟，应在血液接种以后尽快35℃～37℃孵育，切勿冷藏或冷冻。如果病房没有孵箱，血培养瓶应置于室温下，而非冷藏或冷冻。

7血培养安全防护

7.1实验室获得感染途径

针刺伤病毒感染，包括乙肝病毒、丙肝病毒和HIV；皮肤粘膜暴露是肝炎病毒和逆转录病毒感染的主要途径，而其它的主要途径是气溶胶或微滴。

7.2防护措施

7.2.1洗手

洗手是预防实验室获得感染的关键要素。在戴手套前、摘手套后、工作结束后、离开实验室和进入清洁区时，都必须洗手。如直接接触血液或任何潜在的感染性物质后必须立即清洗暴露部位。

7.2.2防护屏障

1.采集血培养时应戴手套，采集下一患者时须换手套。血液污染手套、有破损迹象或失去防护作用时，必须及时更换。在接收和处理标本时，需要戴手套。

2.可能发生血液或其它感染性物质喷溅的情况下，需要面部防护。

3.在没有安全柜的情况下，血培养操作和检验时需要穿防水、长袖、前面封闭的隔离服。存在任何可见污染时立即脱去。污染的隔离服必须作为生物危险垃圾丢弃或严格按流程清洗。离开实验室或去实验室内的清洁区时要脱去隔离服。

4.在处理阳性血培养瓶时，必须在Ⅱ级生物

安全柜中进行。

7.2.5标准防范措施

所有实验室员工应接受基本原理及标准防护措施的操作培训。相关的安全防护措施包括以下内容：

a)尽可能减少注射器及锐器的使用；

b)必须使用注射器时，应避免回套针帽；

c)若用注射器采集血液，将血液直接注入血培养瓶，无需更换针头。注射器使用完毕后，应将针头放

入锐器桶，不可重复使用；

d)使用后的注射器或其他锐器如需转运，必须装入锐器桶内。

7.2.6实验室意外事故控制

在污染区域采取能使实验室人员暴露风险最小化的控制程序。禁止在污染区用嘴吹吸移液管、咬指甲、抽烟、饮食、摘戴隐形眼镜、手或其他环境表面与眼、鼻、嘴接触等。

可能发生溢洒喷溅的操作，必须在生物安全柜中进行。

离心机宜使用带有生物安全罩的转子或离心桶。尽可能采用螺口密封的塑料离心管，使用前仔细检查塑料离心管有无损坏的迹象。因样本中可能含有经空气传播的病原体，转子或离心桶及离心的样本应在生物安全柜中打开。在打开转子或离心桶前，检查内部离心管有无损坏。

7.3.3标本处理

所有标本必须在生物安全II级防护下处理。疑为高致病性病原体如结核分枝杆菌、布鲁菌属、弗朗西斯菌属、鼠疫耶尔森菌、类鼻疽博克霍尔德菌阳性的血培养瓶进行传代培养时，处理操作需按生物安全III级防护进行。疑为脑膜炎奈瑟菌的菌株必须在生物安全柜中处理。

8血培养结果的处理及报告程序

8.1血培养阳性处理及三级报告程序

一级报告（初步报告）

对于阳性血培养，要立即进行涂片和革兰染色，并报告给临床医师，包括：患者姓名、阳性血培养瓶类型、瓶数、报警时间、涂片革兰染色特性及形态，询问患者目前感染情况和抗菌药物使用情况并记录，可以向医师提出治疗建议。此外，还应记录报告时间、接收报告者信息和报告者信息。同时将阳性培养液传种适当培养基。

各单位可以根据自身医疗需求，决定是否基于涂片结果用培养液进行直接药敏试验。二级报告（补充报告）

第二天将初步鉴定结果回报医师。如进行直接药敏试验，应回报药敏结果。

三级报告（终报告）

包括菌种名称、血培养阳性时间（以小时计算）和标准药敏试验结果。

报告内容：血培养经XX天培养阴性，自动化仪器细菌培养一般设定周期为5d、真菌14d、分枝

杆菌42d；手工法细菌培养一般周期设定为7d、真菌14d、分枝杆菌60d。

可以在72h培养阴性后，进行初步报告，但应说明“培养3d阴性，标本将延长培养至XX天，

如为阴性不重复报告”。如果72h后阳性，应按血培养阳性报告程序处理，与临床沟通并补发阳性报告。

8.2血培养阴性报告程序血培养质量控制

9.1检验前质控

患者评估

血培养申请

标