实验设计与操作

分析方法验证

实验设计与操作现代验证系列专属性必须进行专属性研究鉴别试验杂质鉴别试验含量分析证明专属性方法取决于分析方法分析目标同义词特异性,选择性2专属性难点证明一个分析方法对于特定分析物是专属的不太可能建议:结合使用两个或多个分析方法来达到区别的必要水平3专属性方法含被测物样品为正反应不含被测物样品为负反应与被测物结构相似的或相关的物质负反应要求鉴别试验应该能区别可能存在的结构相似的化合物鉴别项目对潜在干扰物质选择应该依据科学判断全面考虑可能产生的干扰物4专属性色谱方法,用代表性色谱图证明专属性,各单独化合物适当标记通过洗脱的最接近两个化合物分离度证明含量分析与杂质测定方法类似含量测试和杂质测试5专属性含量分析证明在杂质与辅料存在的情况下区别出被测物实际操作中,将一定量的杂质和/或辅料加入到纯物质杂质测定原料药或制剂中加入一定量的杂质,证明单独分离这些杂质同样样品基质中的其他组分的分离开来进行杂质是可以得到6专属性比较包含杂质或降解产物样品测试结果和另一个性能良好的分析方法适当地,在相对激烈条件下:光,热,湿度,酸/碱,氧化,还原对于含量分析比较这两个结果对于杂质测定比较杂质图形杂质不可以得到峰纯度测试:二级管阵列检测器,质谱7推荐专属性测定方法按照规定的标准或参考文献的色谱分析方法分别进样原料药,中间体,可得到杂质,原料,中间体,前体,降解产物,制剂的其它组分记录各物质相对保留时间确保各样品之间峰可以分开至少确保其它物质峰与主峰分开8线性线性应该通过被测物浓度或含量的信号图作出可视检测图来评价如果有线性关系,测试结果应该通过合适的统计方法来评价应该在分析方法的范围内评价线性关系9线性报告要求相关系数y-截距线性回归斜率剩余平方和建立线性,最少要求5个浓度点10推荐线性度测定方法在含量测定浓度的70%-130%或50%-150%均匀选择至少六个不同的浓度点每一个尝试至少需测定四次记录各对应浓度下的相应响应值11推荐线性度测定接受标准相关系数应当在0.999与1.000之间线性回归处理截距不应明显地偏离零点12范围通过证实分析方法提供的线性,准确度与精密度可接受度建立范围测定线性准确度和精密度时所用到的样品中含被测物的量应在分析方法指定的范围内或是在范围的极值特定范围通常来源于线性研究并且取决于分析方法预定的应用13范围应该考虑到以下最小指定范围：原料药或是成品制剂含量分析测试浓度的80~120%含量均一度测试测试浓度最小范围是70~130%溶解度测试指定范围+/-20%14范围如果控释制剂的规格覆盖的范围是从1小时后的20%到24小时的90%标签声明的有效范围应该为1-110%对于杂质测定从杂质的报告水平到规格的120%对于有效的或是产生毒性或非预期的药效的已知杂质检测/定量限应该与杂质应该控制的水平相当15范围在研发期间执行的杂质测试方法的验证可能有必要考虑到可能的限度的范围。如果含量和纯度测试作为一个试验进行,且只有用到一个100%的标准品线性应该覆盖从杂质报道的水平到含量分析规格的120%16准确度分析方法应用到已知纯度的被测物中将预定的分析方法与的结果与另一个良好性能的方法的结果比较可以从已经建立的精密度,线性和专属性中推断准确度应该在分析方法指定范围内建立准确度含量分析:原料药17准确度按用于分析的已知药物制剂的量来药物制剂的各个组分进行混合在不能获得药物制剂的所有组分的情况下,或者向药物制剂中加入已知量的被测物与另一个良好性能方法所得到的结果进行比较可以从已经建立精密度,线性和专属性项中推导准确度含量分析:药物制剂18准确度用已知量的杂质加入到样品中在不能获得某种杂质和/或降解产物的样品的情况下,可以考虑将用单独方法获得的结果进行比较含量分析:杂质(定量)19准确度具体要求指定范围内最少9个测定点最少3个浓度水平准确度应该进行报道作为测定样品中被测物的已知加入量百分比回收率作为平均值与可接受真值的差异和置性区间推荐数据20推荐准确度测定接受标准测定得到的主品的百分回收率与理论回收率100%间的相对标准偏差不得大于方法重复性相对标准偏差的4倍21AOAC浓度与回收率关系浓度(%)比率单位平均回收率(%)1001100%98-102

1010-110%98-102

110-21%97-103

0.110-30.1%95-1050.0110-4100ppm90-1070.00110-510ppm80-1100.000110-61ppm80-1100.0000110-7100ppb80-1100.00000110-810ppb60-1150.000000110-91ppb40-12022精密度最少9个测试指覆盖分析方法的指定范围(例如,3个浓度/每个浓度3个重复样品)最少6个测定值,浓度在100%的测定浓度要求含量测定和杂质定量测定实验验证包括精密度研究重复性23精密度建立分析方法精密度上任意事件的影响典型变异包括不同分析天,分析者,仪器,等没有必要单独考虑这些因素提倡使用实验设计(矩阵)中间精密度建立中间精密度程度取决于方法所要应用的环境24精密度通过之间实验室实验的方式来评价的重现性应该考虑在分析方法标准化的情况下这些数据不是市场授权档案的一部分重现性25精密度报告每种精密度标准偏差相对标准偏差(变异系数)置信区间推荐数据26容易混淆的精密度中术语仪器重复性相同人员,仪器,日期,标准液方法重复性相同人员,仪器,日期,重新配制标准液中间精密度不同日期,不同分析人员,不同仪器27系统重复性实验取同一均匀标准样品溶液连续重复测定六次记录每次测定各组分响应计算各响应值与平均值之间相对标准偏差28方法重复性实验取同一批号均匀样品按照分析方法规定至少称量出六份按含量测定方法测定每一份样品含量计算每一次测定