水溶苯胺蓝褪色光度法测定壳聚糖的含量

水溶苯胺蓝褪色光度法测定壳聚糖的含量【摘要】目的建立壳聚糖的含量测定新方法。方法利用分光光度法研究壳聚糖与水溶苯胺蓝的超分子反应条件，并建立分析方法。结果在pH时水溶苯胺蓝与壳聚糖发生了超分子褪色反应，所拟方法用于壳聚糖的测定，结果与溴甲酚绿法一致。结论所拟方法简单，快速，用于壳聚糖的测定结果准确、可靠。

【关键词】壳聚糖；水溶苯胺蓝；光度法

壳聚糖(CTS)是自然界中唯一的碱性多糖，它是天然产物甲壳素经化学法处理脱乙酰基后的产物一致。

1仪器与试剂

722N可见分光光度计；BS-210型万分之一的电子天平。

100μg/ml的壳聚糖标准溶液：称取0g壳聚糖，置于烧杯中，用mol/L的醋酸溶解，转入1000ml容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，备用；5×10-4mol/L水溶苯胺蓝溶液：称取水溶苯胺蓝4g，置于烧杯中加水溶解，转入500ml容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，备用；pH=Britton-Robinson缓冲液［10］。

2方法

准确移取适量100μg/ml的壳聚糖标准溶液，置于10ml的洁净比色管中，依次加入ml5×10-4mol/L水溶苯胺蓝溶液，mlpH=Britton-Robinson缓冲液，再用水定容至刻度线，摇匀。同时配制试剂空白溶液，以测定溶液为参比，用1cm比色皿在波长610nm处测定试剂空白的吸光度A。

3结果与讨论

测试波长的选择

准确移取100μg/ml的壳聚糖标准溶液ml，置于10ml的洁净比色管中，以下同“方法”项下操作,在波长为500～700nm范围内测定溶液的吸光度，并绘制吸收光谱；同时配制试剂空白溶液，同样绘制吸收光谱，结果如图1所示，以水为参比时试剂空白水溶苯胺蓝的最大吸收波长在600nm处，以水为参比的测定液的最大吸收波长在570nm处，而以测定液为参比的相应试剂空白的最大吸收波长在610nm处，说明壳聚糖与水溶苯胺蓝之间的反应是褪色反应，褪色的最大吸收波长与水溶苯胺蓝相比，仅红移10nm。故选择610nm为测试波长。

pH的影响

通常显色反应中酸度或pH是影响反应的重要因素之一。为此考察了pH值对反应的影响。对于在“方法”项下，其它条件不变，仅改变试液的缓冲溶液pH值，结果如图2所示，结果发现随着体系pH的升高，体系的吸光度逐渐变大；pH在～范围内体系的吸光度最大且稳定。当pH大于是吸光度变小。故选择测试波长的选择pH=Britton-Robinson缓冲液来控制体系的酸度。实验还发现pH=Britton-Robinson缓冲液用量在～ml内时体系吸光度最大且稳定，故选用ml。

试剂用量的影响

水溶苯胺蓝作为壳聚糖的褪色标记试剂，它的加入量直接影响反应体系中超分子复合物的生成，对于100μg/ml的壳聚糖来说，在“方法”项下，其它条件不变，仅改变水溶苯胺蓝溶液的用量，实验结果如图3所示，随着水溶苯胺蓝用量的增加，体系的吸光度逐渐增大；当其用量在ml时体系的吸光度最大且稳定；当其用量超过ml时体系吸光度反而变小。故选用ml5×10-4mol/L水溶苯胺蓝溶液作为壳聚糖的标记试剂。

时间的影响

对于100μg/ml的壳聚糖来说，在“方法”项下，其它条件不变，仅改变反应时间，结果表明，体系的吸光度稳定不受时间影响。

工作曲线及线性范围

在一组10ml的比色管中，分别准确加入浓度为100μg/ml的壳聚糖标准溶液，，，，，，ml，依次加入ml5×10-4mol/L水溶苯胺蓝和mlpH=Britton-Robinson缓冲液。以下按“方法”项下操作测定610nm处的吸光度A，并绘制工作曲线，结果如图4所示，其工作曲线的回归方程为A=901C(C的单位为μg)+10,相关系数R=9，壳聚糖在10～120μg/10ml内服从比尔定律，测定的摩尔吸光系数ε为×107L·mol-1·cm-1。

干扰物质的影响

对于100μg的壳聚糖来说，以相对误差在±5℅范围内，考察了一些干扰物质的影响，这些物质的允许量如下：K+，Fe2+，Mo(VI)，Cu2+，Al3+，Zn2+，Ba2+；氨基乙酸、维生素C、葡萄糖酸锌；Cr3+、Co2+、左旋肉碱、维生素E。说明使用本方法用于壳聚糖的测定具有较好的选择性。

样品分析

取含壳聚糖的胶囊10粒，将其内容物混合均匀，称重。准确称取壳聚糖样品，置于烧杯中，用mol/L的醋酸溶解后转入1000ml容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，备用。准确移取该样品溶液ml，置于10ml的洁净比色管中，以下按“方法”项下操作测定610nm处的吸光度A，平行测定11次，结果见表1，与溴甲酚绿法［5］所得结果一致。表1样品分析结果

【参考文献】

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