念珠菌对5种抗真菌药的药物敏感性研究

念珠菌对5种抗真菌药的药物敏感性研究

由于抗生素和非抗真菌药物的广泛应用，山羊感染的可能性近年来显著增加。念珠菌可以引起人体浅部和全身性感染,因其侵犯部位及患者状态不同而表现不同,并注意到念珠菌对常用抗真菌药物存在耐药菌株。我们采用浓度梯度法(Etest法)测定,由临床标本分离的173株念珠菌属(Candida)对抗真菌药物两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的敏感性,现将试验结果报道如下。1数据和方法1.1真菌分离和分离2002年2月～2003年8月,在北京大学深圳医院呼吸内科、肾内科、血液科、内分泌科、心脏外科、脑外科和重症监护室、妇产科,从血、尿、痰和脑脊液、阴道分泌物等标本中共分离到念珠菌173株。1.2个月生动物培养念珠菌分离采用ChromAgar或萨布罗琼脂平板35℃、培养24～48h。鉴定采用Bio-Merieux生产的APICandida,API20CAUX鉴定分离菌株。1.3抗真菌药敏试验Etest试纸条为瑞典ABBiodisk公司产品。包括两性霉素B0.002～32μg/ml、伊曲康唑0.002～32μg/ml、酮康唑0.002～32μg/ml、氟胞嘧啶0.002～32μg/ml、氟康唑0.016～256μg/ml。药敏培养基成分:RPMI-1640(Gibco产品),0.165MMOPS(Sigma),1.5%Bacto琼脂(Difco产品),2%葡萄糖。121℃、15min,制成直径150mm的平板。Etest法:纯化的菌种,制备成浊度为0.5McFarland的菌悬液,均匀涂布于药敏专用培养基上,平板干燥15min后将5种Etest试纸条按约为72度夹角紧贴附于培养基上,放置于35℃培养24h,在抑菌环与纸条上药物浓度刻度交界处读取MIC值。质控菌株ATCC90028对整个实验过程进行质量控制。结果按NCCLSM27-A抗真菌药敏试验标准判定:两性霉素BMIC≤1μg/ml、伊曲康唑MIC≤0.125μg/ml、酮康唑MIC≤0.5μg/ml、氟胞嘧啶MIC≤4μg/ml、氟康唑MIC≤8μg/ml为敏感;两性霉素BMIC≥2μg/ml、伊曲康唑MIC≥1μg/ml、酮康唑MIC≥4μg/ml、氟胞嘧啶MIC≥32μg/ml、氟康唑MIC≥64μg/ml为耐药;伊曲康唑MIC在0.25～0.5μg/ml、酮康唑MIC在0.5～2μg/ml、氟胞嘧啶MIC在8～16μg/ml、氟康唑MIC在16～32μg/ml为剂量依赖敏感。当读取的抑菌浓度为0.19μg/ml、0.75μg/ml、3μg/ml、6μg/ml、24μg/ml时,归到相邻的高浓度梯度范围内。2结果2.1ic范围、mic50、mic29173株念珠菌对5种抗真菌药物的MIC范围、MIC50、MIC90检测结果见表1。173株念珠菌在5种抗真菌药物不同浓度抑菌株数分布见表2。2.2种抗真菌药的耐药率根据NCCLSM27-A抗真菌药敏试验标准,白色念珠菌对两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的耐药率依次为1.1%、10.8%、5.4%、2.2%和5.4%。光滑念珠菌对上述5种抗真菌药的耐药率依次为6.5%、54.8%、22.5%、3.2%和16.2%。热带念珠菌对上述5种抗真菌药的耐药率依次为12.5%、12.5%、4.2%、4.2%和4.2%。克柔念珠菌对上述5种抗真菌药的耐药率依次为16.7%、33.3%、8.3%、16.7%和33.3%。近平滑念珠菌对上述5种抗真菌药的耐药率依次为0、25.0%、0、0和25.0%。见表2。3抗菌药物的耐药情况念珠菌的耐药性最近受到重视,并有多种方法可用于研究念珠菌对抗真菌药物的耐药性。用NCCLSM27-A微量稀释法与Etest法进行对比研究,结果2种方法有很好的一致性,认为Etest法与微量稀释法可作为互相替代的药敏检测方法。以下结合笔者研究结果,探讨临床常见念珠菌对抗真菌药物的敏感性。白色念珠菌仍然是最常分离到的念珠菌,其对抗真菌药物的敏感性高于非白色念珠菌。念珠菌对抗真菌药物的敏感率从高向低依次为白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌和克柔念珠菌。根据Pfaller等的研究,白色念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的耐药率分别为0.6%～1.1%和0.6%～2.2%。其MIC90分别为0.5～1μg/ml和0.12μg/ml。Sobel等对白色念珠菌进行药敏检测,96%的白色念珠菌对氟康唑敏感,0.4%的白色念珠菌对氟康唑剂量依赖敏感,3.6%的白色念珠菌对氟康唑耐药。陶风蓉等报道,白色念珠菌对氟康唑的耐药率为1.9%。本研究中,白色念珠菌对两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的耐药率依次为1.1%、10.8%、5.4%、2.2%和5.4%。光滑念珠菌是仅次于白色念珠菌的常见念珠菌。Pfaller等报道,光滑念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的耐药率分别为5.2%～8.7%和32.8%～36.9%。其MIC90分别为16～32μg/ml和2μg/ml。Sobel等对光滑念珠菌进行药敏检测,4.5%的光滑念珠菌对氟康唑耐药。Safdar等报道347株光滑念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的耐药率分别为10.7%和15.2%。剂量依赖敏感分别为9.8%和42.7%。Holland等对VVC患者的89株光滑念珠菌进行药敏试验,71%对氟康唑剂量依赖敏感,3.4%对氟康唑耐药。24%的光滑念珠菌对伊曲康唑剂量依赖敏感,71%对伊曲康唑耐药。陶风蓉等报道,光滑念珠菌对氟康唑的耐药率为42.6%。本研究中,光滑念珠菌对两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的耐药率依次为6.5%、54.8%、22.5%、3.2%和16.2%。Pfaller等报道,热带念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的耐药率分别为0和3.6%～4.2%。陶风蓉等报道,热带念珠菌对氟康唑的耐药率为7.4%。本研究中,热带念珠菌对两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的耐药率依次为12.5%、12.5%、4.2%、4.2%和4.2%。克柔念珠菌对氟康唑天然耐药,对其他抗真菌药物也有较高的耐药性。Holland等报道,11.1%的克柔念珠菌对伊曲康唑的耐药,88.9%对伊曲康唑为剂量依赖敏感。Pfaller等报道,克柔念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的耐药率分别为100%和0%～66.6%。陶风蓉等报道,克柔念珠菌对氟康唑的耐药率为37.5%。本研究中,克柔念珠菌对两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和氟康唑的耐药率依次为16.7%、33.3%、8.3%、16.7%和33.3%。Pfaller等和St-Germain等报道,近平滑念珠菌对常用的抗真菌药物敏感,对氟康唑、酮康唑和两性霉素B无耐药菌株。陶风蓉等也证实近平滑念珠菌对氟康唑无耐药存在。我们对4株近平滑念珠菌进行药敏试验,近平滑念珠菌对两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟胞嘧啶和