高效液相色谱法测定酮康唑乳膏的制备工艺及质量控制

高效液相色谱法测定酮康唑乳膏的制备工艺及质量控制

酮康唑（kcz）是1976年合成的咪唑二。烷衍生物,1978年口服酮康唑片剂应用于临床;1981年2%酮康唑乳膏上市。酮康唑乳膏为一种外用软膏,是一种乳剂型基质的白色或类白色乳膏,其有效成分酮康唑是一种抗真菌药物,主要由酮康唑、凡士林、液状石蜡、甘油、硬脂酸镁等成分组成,临床上用于治疗体癣、牛皮癣、湿疹及神经性皮炎等。本文对酮康唑乳膏的制备工艺与质量标准进行了研究,为了能更好地控制该制剂的质量,我们采用高效液相色谱法(HPLC)测定酮康唑乳膏中酮康唑的含量,现将其制备工艺及质量控制方法叙述如下。1仪器HP1100型高效液相色谱仪系统;日本岛津UV-265FW紫外分光光度计。2试验药物和试验试剂酮康唑对照品(中国药品生物制品检定所);四丁基硫酸氢铵(色谱纯);无水乙醇(分析纯);乙腈(色谱纯)。3处方和准备3.1ss/mss-g酮康唑10g,硬脂酸20g,十六醇20g,白凡士林25g,液体石蜡65mL,蓖麻油15mL,十二烷基硫酸钠(SS)25g,PEG-40010mL,丙三醇25mL,尼泊金乙酯1.5g,亚硫酸氢钠2.5g,枸橼酸1.5g,加水至总量500g。3.2油相、水相的配制油相:将硬脂酸,十六醇,白凡士林,液体石蜡,蓖麻油,尼泊金乙酯混合水浴60-65℃加热至熔,并加入酮康唑溶解为油相。水相:将十二烷基硫酸钠(SS),PEG-400,丙三醇,亚硫酸氢钠,枸橼酸,水混合加热至相同温度并溶解为水相。将油相、水相分别用3层沙布过滤后,在60r·min-1的拌速下将油相缓缓加入水相中,至完全乳化后,加入适量外用香精,即得。4对质量标准的研究4.1断裂本品为白色细腻有光泽的流动性乳膏剂,气味芳香。pH值6.3-6.8。4.2生成橙红色沉淀取本品约0.5g,加0.1mol/L盐酸溶液10ml,在水浴上加热,使酮康唑溶解,放冷,滤液加碘化铋钾试液数滴,即生成橙红色沉淀。取含量测定项下的溶液,照分光光度法测定,在244nm的波长处有最大吸收。4.3重量测定4.3.1试验条件色谱柱:ODS柱(410mm×125,5um),流动相为0.34%四丁基硫酸氢铵溶液-乙腈(75∶25),流速0.9ml/min,检测波长244nm。柱温:室温;流速:0.5mL·min-1;进样10uL;在此条件下样品中酮康唑与相邻成分达到基线分离,且阴性对照无干扰。4.3.2试样制备和测定取酮康唑乳膏样品与空白辅料(含除酮康唑以外的所有辅料制得的)样品,按照样品处理方法配制样品溶液与空白基质溶液,分别精密量取样品和空白基质溶液各10ul注入液相色谱仪。实验表明辅料对测定结果无干扰。4.3.3线性方程的制备精密称取酮康唑对照品适量(约40mg)加入100mL容量瓶中,加无水乙醇溶解,并稀释成含对照品0.4mg/mL的储备液,精密量取3.0ml,4.0ml,5.0ml,6.0ml,7.0ml,8.0ml,9.0ml贮备液,将其分别置于50ml量瓶中,用无水乙醇定容。取各浓度的贮备液各10.0ul注入液相色谱仪,得到浓度C(ug/ml)与峰面积A的线性方程。结果表明,酮康唑在18-72ug/ml的范围内与峰面积线性关系良好,得到回归方程为:C=-0.5003+2.167A×10-5,r=0.9999。4.3.4加样回收率和精密度按处方比例精确配制标示量为80%、100%、120%的含酮康唑的模拟样品9份,按上述色谱条件进行测定,并计算回收率,得到平均回收率为100.5%(n=9),RSD=1.59%。4.3.5样品的采集及测试将制得的酮康唑样品装入瓶内,分别放置于-20℃的冰箱中24h和50℃烘箱中恒温8h,并观察其外观、稠度、色泽及均匀性,结果均无变化。同时将样品室温下留样观察6个月,样品无变化。取本品15g装入具塞的带刻度的离心管内,3000r,30min离心,结果样品无破乳分层现象。4.3.6进样及色谱图取酮康唑乳膏样品,根据样品处理方法来制备供试品溶液,取10.0ul,重复进样8次,记录下色谱图,RSD为0.18%(n=8)。另在第1、2、3d各进样1次,记录色谱图,RSD为1.49%(n=3)。说明方法的重复性良好。4.3.7样品含量测定取制得的酮康唑乳膏样品,精密称取样品适量(约相当于酮康唑40mg)置于100ml的量瓶中,加入约60ml的无水乙醇,80℃水浴加热,震荡混匀,使样品溶解,然后将其放冷至室温,再用无水乙醇定容至刻度,摇匀,冰浴2h以上,取出后迅速滤过,将滤液放至室温,精密量取续滤液5ml至50ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,取10.0ul样品注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算样品含量21mg/g。5样品的溶解和溶解我们将本文所用的样品含量的测定方法与药典中的方法进行比较,结果基本一致。实验结果表明,我们所用的方法简便、快速、准确,为酮康唑乳膏的含量测定提供了一个新的方法,更适宜工业化生产中的质量控制。本文采用了无水乙醇80℃水浴溶解样品,然后又冰浴2h,再过滤的方法能有效的去除乳膏基质,减少了基质对色谱柱的损害和影响。由于酮康唑易氧化变色,在配制过程中如果把其直接加到油相中加热溶解,配制的乳膏会变为粉红色,从而影响疗效和外观