酮康唑微囊的制备及其稳定性和体外溶出度研究

酮康唑微囊的制备及其稳定性和体外溶出度研究

酮康唑是一种咪唑衍生物。这是一个白色的结晶粉末。它没有味道，也没有味道。它在氯仿中溶解，在甲醇中溶解，在乙醇中微溶，在水中不溶。主要用于因真菌或酵母菌所致的皮肤、毛发和指甲感染,全身真菌感染,组织胞浆菌病及着色真菌病,白色念珠菌病复发及免疫低下所致的霉菌感染。由于其疗效可靠,临床治疗安全指数高,《中国药典》2000版二部首次将其收载。KCZ已成为临床最常用的抗真菌药物之一。但KCZ会导致恶心、呕吐及皮肤瘙痒等多种不良反应。另外,它在空气中极易氧化变色而影响稳定性和疗效。为此,我们采用复凝聚法制备KCZ微囊,并进行了相关药剂学研究,希望能提高KCZ的稳定性,进而提高其临床利用效率,为KCZ微囊新剂型的实际运用打下基础。现报告如下:1材料和机器1.1其它试剂酮康唑对照品(上海第二军医大学药学院提供),酮康唑原料药(南京制药二厂,批号20000601),酮康唑微囊(自制),胰蛋白酶(吉泰科技有限公司进口分装,活性比例1∶250),胃蛋白酶(四川省内江生化制药厂),药用明胶(A型,上海明胶厂),阿拉伯胶(进口分装,英国药典级,BP93),其它试剂均符合药用标准,水为重蒸馏水。1.2仪器、仪器和仪器ZRS-8C智能溶出实验仪(天津大学精密仪器厂),UV-2201紫外分光光度计(日本岛津),Olympus-BX50光学显微镜(日本),分析天平(湖南湘仪天平仪器厂),pHS-3C精密酸度计(上海雷磁仪器厂),GS12型电子恒速搅拌器(上海医械专机厂)。2方法和结果2.1kcz微囊的制备(1)酮康唑微囊的制备:①采用复凝聚法,取处方量的明胶、阿拉伯胶(明胶与阿拉伯胶的量相等)分别用适量蒸馏水溶胀5h,制成溶胶;在阿拉伯胶溶胶中加入微粉化的KCZ混合研匀,制成阿拉伯胶KCZ混悬液,其中KCZ的平均粒径为(3.13±0.20)μm,n=280;在55℃水浴条件下,将明胶溶胶与阿拉伯胶混悬液混匀,滴加0.1mol/L盐酸溶液,边加边搅拌,将系统的pH调至4.1～4.2,然后在显微镜下观察成囊,随后加入30℃蒸馏水(成囊体系体积的两倍),搅拌至室温,在冰水浴条件下加入适量37.0%甲醛溶液使其固化,匀速搅拌1h,滴加20.0%氢氧化钠溶液,调PH至8.0～9.0;静置分层,去上清液,抽滤,用蒸馏水洗至无甲醛味后,冷冻真空干燥,即得。(2)成品鉴定:性状:所得KCZ微囊为白色粉末,流动性较好。显微鉴定:Olympus-BX50显微镜下观察KCZ微囊形态(见图1～3)。(3)囊径计数:显微镜下测量KCZ微囊的囊径,转换不同的视野,共观测计数600个微囊的粒径(见表1)。(4)平均体积径计算:按公式Dv=(Σnidi3/Σni)1/3(式中ni为每体积径段中微囊的数目;di为体积径,取每组段中值,<4组段取4μm)计算得到所制备的微囊平均体积径。干燥后KCZ微囊的Dv=7.73μm,而溶剂中Dv=7.93μm。2.2kcz微囊表征(1)测定条件的确定:①KCZ在人工胃液和人工肠液中的溶解性能考察:称取适量KCZ对照品2份,分别加入人工胃液(simulatedgastricfluid,SGF,pH=1.2)和人工肠液(simulatedintestinalfluid,SIF,pH=6.8)50ml,搅拌。结果发现:在体温(37±0.5)℃和室温(25±0.5)℃条件下,KCZ在SIF中几乎不溶,加热至65℃以上方可溶解;但放冷至室温又析出结晶。而在SGF中,KCZ易溶。因此,本部分实验仅以SGF为溶媒,建立KCZ微囊的质量控制方法。②测定波长的确定:称取KCZ对照品适量,用SGF溶解后,再用定量滤纸滤过,以相同溶剂为空白对照,取滤液在波长200～400nm范围内进行扫描;另取明胶、阿拉伯胶,按上法进行扫描。由扫描结果可知,SGF中的KCZ虽然在200～220nm有最大吸收峰,但辅料的影响亦很大;而KCZ在269nm波长处的次吸收峰,溶剂和辅料对其无明显影响。因此,选定269nm为SGF中KCZ的测定波长。③标准曲线的绘制:精密称取干燥至恒重的KCZ对照品约50mg,置于100ml容量瓶中,用SGF溶解并稀释至刻度,摇匀。分别精密吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml置于10.0ml容量瓶中,加入相同溶剂稀释至刻度,摇匀。于269nm波长处测定吸收度A。以A值对浓度C回归,得回归方程为:A=2.3967C+0.0595(r=0.9996,n=5),表明在SGF中KCZ在0.05～0.15mg/ml范围内线性关系良好。(2)含量测定:①测定方法:精密称取经冷冻干燥的KCZ微囊约0.2g,加入3.0mlSGF,置于37℃的恒温培养箱中消化24h后,以SGF做为溶媒,在50ml容量瓶中溶解、定容、滤过。取续滤液作为供试品溶液,精密量取1ml以SGF稀释至10.0ml。在269nm波长处测定其吸光度A值,代入标准曲线回归方程,得浓度C1。按式C=[(C1×10×50/2]/M]×100%即得百分含量(式中M为称取微囊的重量)。②包封率计算:精密称取理论含量为C0的KCZ约0.5g,按前述方法测定其实际含量C1,按式:S=C1/C0×100%计算得平均相对包封率。③加样回收率试验:精密称取已知含量的样品,精密加入一定量的KCZ对照品,并根据线性范围调整系统体积,使之浓度在线性范围内,然后依含量测定的方法测定,计算回收率,得平均回收率为104.67%(RSD=0.76%,n=3)。④精密度试验:日间差:每天同一时间精密称取同一批KCZ微囊干燥品约0.2g,依含量测定的方法,测定其吸收值A,连续做3d,结果的RSD<0.50%;日内差:同1d内每隔2h精密称取同一批KCZ微囊干燥品约0.2g,依含量测定的方法,测定其吸收值A,连续做5次,结果的RSD<2.57%。2.3kcz微囊稳定性试验2.3.1多层析成像结果精密称取3批KCZ微囊和1批KCZ对照品于培养皿中摊成薄层,分别置于4000LX强光照射(距离50.0cm)、40℃的恒温箱中及相对湿度为75%的密闭容器中放置10d,观察性状变化,并于第0、5d和10d取样测定其含量(见表2)。2.3.2培养品性状测定精密称取3批KCZ微囊和1批KCZ对照品于培养皿中摊成薄层,敞开于室温条件下的木橱中放置3.0m,观察其性状变化,每个月取样测定含量(见表3)。2.3.3性别变化的研究在进行KCZ微囊和KCZ的稳定性试验中发现,KCZ原料除了含量有明显的变化外,其物理外观性状也产生了相应的变化(见表4)。2.4kcz微囊在4gf和sif中的溶出度测定按照《中国药典》2000版二部附录溶出度试验第一法转篮法,转速定为100r/min,温度(37±0.5)℃,精密称取KCZ微囊1.0g,溶出介质为人工肠液(SIF,pH=6.8)和人工胃液(SGF,pH=1.2);间隔一定时间取样10.0ml,同时补充同温度的溶出介质10.0ml,过滤;取续滤液1.0ml用相同的溶出介质稀释成10.0ml,并以相同的溶剂为空白对照测定A值,代入标准回归方程计算浓度,求出不同时间的累积溶出百分率。(1)KCZ微囊在SGF中的溶出度试验:按《中国药典》2000版二部收载的方法配制SGF,取稀盐酸16.4ml,加水约800.0ml,胃蛋白酶10.0g,摇匀后稀释成1000ml,pH值调为1.2。取3批KCZ微囊进行溶出度实验(见表5)。(2)KCZ微囊在SIF中的溶出度实验:①测定波长的确定:称取KCZ对照品适量,用SIF(pH=6.8)1000.0ml溶解、滤过,用相同溶剂为空白对照,取滤液在波长200～700nm范围内进行扫描,并与明胶、阿拉伯胶的扫描结果进行比较。在扫描图中可以看到,在SIF中,KCZ的最大吸收波长为200nm,但溶剂辅料影响很大,它在275nm处具有次吸收峰,溶剂辅料的影响较小。因此,选定275nm为SIF中KCZ的测定波长。②标准曲线的绘制:按照前面所述在SGF溶液中KCZ标准曲线绘制方法,在275nm处,制备KCZ在SIF中的标准曲线。结果为:A=0.0272C+0.0164(r=0.9998,n=5),表明在SIF中KCZ在3.00～10.50mg/L范围内线性关系良好。③在SIF中溶出度测定:按照《中国药典》2000版二部收载的方法配制SIF,取磷酸二氢钾6.8g,加水500.0ml使溶解,用0.4%NaOH溶液调pH至6.8;另取胰蛋白酶10.0g,加水适量使溶解,将两液混合后,加水稀释成1000.0ml即得。测得最后pH值为6.8。KCZ微囊在SBF中被完全消化,但由于KCZ难溶于中性溶液,测得结果(见表6)。3微囊化的原料筛选以明胶、阿拉伯胶为囊材,采用复凝聚法制备微囊,是将药物微囊化的经典方法之一。影响成囊的主要因素是囊心囊材比、成囊时的温度、搅拌速度和成囊时pH值;搅拌速度还可以影响微囊的粒径大小,搅拌速度越快,微囊粒径越小。所制备的微囊包封率在80.0%以上,微囊粒径小于10μm,且方法重现性好。加速稳定性试验和长期稳定性试验的结果说明,将酮康唑微囊化后,确实提高了其稳定性,而酮康唑原料在同等条件下容易变色,含量变化亦很大。在溶出度试验中发现,酮康唑在人工胃液中溶出一半的时间(t50)为25min,在42min内溶出累积百分率在70.0