酮康唑生物黏附性阴道片的制备及体外评价

酮康唑生物黏附性阴道片的制备及体外评价

生物粘附给药系统（cdd）是指含有糊精材料和身体组织粘膜表面的长期紧密接触，药物通过接触部分的粘膜上皮进入循环系统，充分发挥局部和全身的作用。常用的生物黏附性材料包括:卡波姆(Carbopol,CP)、聚乙烯醇(PVA)、羧甲基纤维素(CMC)、乙基纤维素(EC)、羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、海藻酸钠、壳聚糖等,常用的生物黏附剂型有黏附片、黏附膜、软膏、棒剂、凝胶;口服的胃内漂浮制剂、结肠给药制剂、微粒给药系统及蛋白质多肽类给药系统等。酮康唑(ketoconazole,KET)是20世纪70年代研制的咪唑类衍生物,可用于治疗浅部和深部真菌病。但该药口服后有肝脏毒性,部分男性患者服药期间出现女性化乳房的情况。为了减少口服KET可能引起的毒副反应,对于浅部真菌感染,可考虑将其制成局部用药制剂。已报道的KET阴道制剂有泡腾片、栓剂及以羧甲基纤维素钠为黏附材料的黏附片等,但以Carbopol,HPMC和HPC为黏附材料的阴道片未见报道。本实验首先用不同的黏附材料制成空白片剂,测定其黏附力、溶胀速率,比较其特点,再将不同配比的黏附材料与KET一起制成生物黏附性阴道片(ketoconazolebioadhesivevaginaltablets,KBVT),并加入泡腾材料增加药物释放的动力。考察了不同处方片剂的体外释放度、黏附力、溶胀速率及片剂对不同介质pH值的影响等指标,结果表明,这种新型的生物黏附性阴道片具有缓释和生物黏附的特征,有望成为一种新型的制剂用以治疗妇女的念珠菌感染。1设备和材料1.1高效液相色谱测定ZDY异形单冲压片机(上海远东制药机械公司);RCZ-8B药物溶出仪(天津大学无线电厂);78X型片型四用测定仪(上海黄海制药厂);752型紫外分光光度计(上海光谱仪器有限公司);HitachiD7000高效液相色谱系统(日本日立公司);黏附力测定装置(自制)。1.2t聚酰胺基苯磺酸盐hpmcKET原料(南京白敬宇制药厂,批号:20040302,含量99.38%);KBVT(自制);Carbopol974P、Carbopol934P(CP974P,CP934P,美国古立德化学有限公司);HPMC(K4M,上海卡乐康包衣技术有限公司);HPC(美国Aqualon公司)。其他辅料及试剂均为药用级或分析纯。1.3动物昆明种小鼠♂,18～22g(沈阳药科大学实验动物中心,合格证号:辽实动字033号)。2实验方法2.1填充剂为复合剂、助流剂、全粉末直接压片工艺方法以CP934P,CP974P,HPMC,HPC为黏附剂,加入一定量的润滑剂、助流剂,用微晶纤维素(MCC)做填充剂调节片重至750mg,用全粉末直接压片工艺,各压成4种空白片,片形为椭圆形异形片,硬度8kg。处方组成见表1。2.2增重百分率的测定参照文献方法,将黏附片放入不锈钢网篮中,称量初始重量W0,然后,把网篮置于盛有100mL蒸馏水的烧杯中浸泡(室温25℃)。于10,20,30,40,50,60,90min时取出,用滤纸吸干网篮表面的水分,称量重量,计算不同时间各黏附片的增重百分率。增重百分率的计算公式为:增重%=[(W-W0)/W0]×100%。将增重百分率对时间回归得一直线,斜率即为黏附片的溶胀速率。2.3黏附片与黏膜分离参照文献的黏附力测定装置,见图1。测定方法:将小鼠断颈处死,取腹黏膜牢固黏贴在平台上。测定时先用20μL蒸馏水将黏膜湿润,然后将黏附片与黏膜层贴紧,加砝码200g压迫2min。在药片上套一个比药片稍大的硬环,硬环通过定滑轮与一塑料杯连结,用输液滴管向杯中滴水,直到黏附片与黏膜分离为止。称量塑料杯及水的质量,计算黏附力。2.4黏附片的制备参照国外KET上市栓剂(Nizovules®)的规格,将片剂的规格定为每片含KET400mg。根据空白黏附片的溶胀速率和黏附力测定结果,选择CP934P,HPMC,HPC为黏附剂,柠檬酸和碳酸氢钠为泡腾剂,设计了5种处方,处方组成见表2。原辅料分别过100目筛,称取处方量的KET、黏附剂、泡腾剂,并加入一定量的抗氧剂、润滑剂、助流剂,用MCC调节片重至750mg,采用粉末直接压片法压片,制得椭圆形异形片,硬度8kg。2.5kbvt含量测定采用高效液相色谱法测定。2.5.1高效液相色谱法HitachiD-7000高效液相色谱系统,HitachiD-7000HMS色谱工作站;色谱柱:PhenomenexC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水-三乙胺(60∶40∶0.5),以磷酸调pH值7.0;流速:1.0mL·min-1;检测波长:243nm;柱温:室温。外标法定量。2.5.2g内与峰面积成线性关系在“2.5.1”的色谱条件下,酮康唑的进样量(m)在0.106～0.840μg内与峰面积(A)成线性关系,标准曲线方程为A=m×106-49282(n=6),r=0.9999。按处方比例取空白辅料,加入酮康唑对照品后,依上述方法测定,平均回收率为98.57%,RSD为1.34%(n=5)。2.6累积释放量的测定用于测定黏膜给药系统体外释放度的方法很多,本实验根据KET的药物性质和用药部位特点,将《中国药典》2000年版二部附录XC中第二法(桨法)进行改进,把药物装入沉降篮中再放入介质。选择pH3.0PBS1000mL为释放介质,预热至(37±0.5)℃,旋桨转速为30r·min-1,于1,2,4,8,12,16,20,24h取出释放介质3mL,同时补充等量的空白介质。将样品稀释一定倍数后,用紫外分光光度法测其吸光度值,计算累积释放量。以累积释放百分数为纵坐标,以释放时间为横坐标作图得释放曲线。2.7不同改性剂对pms-pmsph值的影响有文献报道含CP的黏附片可降低介质的pH,本实验用蒸馏水和pH4.0的PBS作介质,考察5种KBVT对其pH值的影响。取蒸馏水和PBS各30mL,放入KBVT,每隔1h测定1次pH值,观察其变化情况。2.8处理数据用SPSS统计软件对结果进行统计学处理。3结果3.1泡腾剂的用量影响各空白黏附片与不同处方KBVT的溶胀速率见图2,图中直线斜率代表片剂的溶胀速率。不含泡腾剂的空白黏附片溶胀速率为CP974P>CP934P>HPC=HPMC;增加黏附剂用量,对CP934P溶胀速率没有影响,但使CP974P,HPC和HPMC的溶胀速率增加。加入泡腾剂后,对溶胀速率有显著影响,片剂吸水量大大增加;泡腾剂用量增加,CP974P,CP934P和HPC的溶胀速率加大,但对HPMC没有影响。泡腾剂的作用在于泡腾产生的气泡使片剂体积膨胀,在表面和内部形成孔道,增大了黏附剂与水的接触面积,有利于高分子材料溶胀。KET是水难溶性药物,这种孔道可能增加药物的释放(体外释放实验证明了这一点)。另外,Carbopol与HPC,HPMC溶胀速率相差较大,将Carbopol与HPC或HPMC配合使用,可能得到满意的黏附效果和体外释放。5种KBVT的溶胀速率为F1=F2>F3=F4=F5,但与含相同量黏附剂和泡腾剂的空白片比,KBVT的溶胀速率要小很多,这与KET的疏水性质有关。3.2泡腾剂的黏附力各空白黏附片与不同处方KBVT的黏附力见图3。方差分析结果表明,不含泡腾剂的空白片,黏附力大小为CP974P=CP934P>HPC=HPMC,且黏附力并不随黏附剂用量增加而增大。加入泡腾剂后,各空白片的黏附力均下降。增加泡腾剂用量,对HPC的黏附力无影响,但使CP974P,CP934P和HPMC的黏附力下降,且CP974P要比CP934P下降多13.5%。5种KBVT的黏附力为F2<F1=F3=F4<F5。F2中CP934P的比例小,泡腾剂含量大,且CP934P和HPMC的黏附力均受泡腾剂含量影响,因此黏附力最小;F5中CP934P的比例大,泡腾剂含量小,因此黏附力最大,这与空白片的测定结果相符。但各处方KBVT黏附力的值比含相同量黏附剂和泡腾剂的空白片下降很多(30.5%～45.3%),表明KET不利于片剂的黏附。3.3kbvt的室外释放3.3.1pas模型拟合方程以时间为横坐标,累积释放百分率为纵坐标,5种处方KBVT的体外释放度见图4。由于CP,HPC和HPMC既是生物黏附材料,又是凝胶骨架片的缓释材料,本实验用Ritger-Peppas模型对KBVT释药曲线进行拟合。Ritger-Peppas模型方程为Mt/M∞=ktn,式中Mt为t时刻的药物释放量,M∞为最大药物释放量,k是药物释放速度常数,释放指数n是表征释放机制的特征参数。公式中对于圆柱型制剂(如片剂)而言,当0.45<n<0.89时,药物释放机制为非Fick′s扩散(即药物扩散和骨架溶蚀协同作用);当n<0.45时,为Fick′s扩散;当n>0.89时,为骨架溶蚀机制。KBVT的拟合方程见表3。5个方程式中,n<0.45,表明药物释放符合Fick′s扩散方程,即以骨架中孔道扩散为主。3.3.2处方释放度比较本实验采用相似因子(f2)法对不同处方的释放度进行比较,比较结果为F1与F2释放相似,F3与F4释放相似,F5与其他4个处方释放均不同。3.4kbvt对ph的影响结果见图5。KBVT先使蒸馏水的pH值下降,随后缓慢上升;使pH4.0的PBS溶液pH值上升。4泡腾制剂的配制对ket释放的影响4.1文献报道对同一系列的黏附剂来说,黏附片的溶胀速率与黏附力成正比,溶胀速率本身可以做为衡量黏附力的指标。这是因为黏附作用的产生是黏附剂与生物膜之间的相互作用,溶胀速率大,表明黏附剂的高分子链能很快从卷曲状态伸展,与生物膜相互渗透,发生黏附作用。本实验结果与文献报道略有不同,测得不含泡腾剂的空白片CP974P的溶胀速率比CP934P大,但两者黏附力没有差别,这可能是测定黏附力的实验方法不同造成的。另外,CP974P的黏附力受泡腾剂影响大,因此选择CP934P与HPC和HPMC配伍制备KBVT。4.2实验中曾制备不加泡腾剂的KBVT,不同黏附剂处方的24h累积释放量均小于50%。原因是在酸性介质中,Carbopol的高分子链不能完全伸展,阻滞KET的溶出;而HPC和HPMC水化形成厚的凝胶层也不利于KET溶出。加入泡腾剂后,观察到药片溶出时有气泡从表面逸出,片剂体积膨胀,KET溶出量大大增加,而且可以达到24h缓释效果。由于KBVT的研制目的在于用其治疗成年女性的阴道念珠菌感染,泡腾产生气泡可以使患者产生清凉感,缓解不适,同时片剂黏附在用药部位,维持一定浓度并缓慢释放从而达到治疗目的。通常阴道用泡腾制剂中,有机酸比例略高,主要是考虑到阴道内环境偏酸的生理特点,但酸量加大不利于CP的黏附,因此在处方设计中将柠檬酸与碳酸氢钠的摩尔比定为1∶3。4.3许多研究结果已经证实,药物从含有亲水性凝胶骨架片中的释放符合Higuchi方程,本实验对5种自制的KBVT体外释放进行拟合,结果并不符合Higuchi方程。原因是加入了泡腾剂后,强力崩解作用破坏了凝胶骨架片的大整体结构,骨架材料的孔隙率加大,药物的扩散路径缩短,消除了骨架溶蚀存在的可能性,所以释放在表观上表现为扩散作用。释放曲线相似性比较结果表明,所设计处方中CP与HPMC的比例对KBVT体外释放影响不大,而CP与HPC比例相同的情况下,泡腾剂的用量对释放也无太大影响。4.4KBVT对两种介质pH值的影响表现不同。这是因为蒸馏水pH值近7.0,在此条件下,弱碱性的KET溶解度小,而CP水溶液呈酸性,所以导致水的pH值下降,但随着KET的溶出量增多,溶液pH值缓慢上升。在pH4.0的PBS溶液中,KET溶解度大,溶出量多,超过了CP对溶液酸碱性的影响,只表现为溶液pH值上升。不同处方片剂对介质pH值的影响与其体外释放相关。这个实验可做为考察片剂局部