分子诊断学：试题-第十四章

第十五章感染性疾病的分子诊断一、A型题：1．感染性疾病分子诊断的一般检出策略是指检测出病原微生物的A．B．染色体核酸C．D．耐药相关基因E．以上均不是2．临床上对乙肝病毒耐药性分子诊断主要是针对下列哪个基因A．X基因B．S基因C．C基因D．P基因E．ORF5基因3．采用PCR法对丙肝病毒进行分子检测时，选用的引物序列一般在A．NS5B区B．3’端的UTR区C．5’端的UTR区D．E1区E．核心区域4．采用杂交捕获系统对HPV进行分子检测，可以：A．对病毒精确分型B．定量检测病毒C．仅能检测16和18型HPV病毒D．能区别高危险性病毒和低危险性病毒E．能够检测出出所有型别的HPV病毒5．用于结核分枝杆菌分型的靶基因为：A．抗原蛋白编码基因B．MPB64基因C．插入序列IS986D．插入序列IS6110E．16SrRNA基因6．幽门螺杆菌感染的分子检测一般采用的标本为：A．痰B．粪便C．胃黏膜D．尿液E．脑脊液7．对于女性病人的沙眼衣原体分子检测，哪种标本的检测灵敏度最高A．结膜刮取物B．尿道拭子C．眼泪D．宫颈拭子E．尿液8．临床上检测解脲脲原体的tetM基因以预测其对哪类抗菌药的耐药性A．四环素类B．大环内酯类C．喹诺酮类D．氨基糖苷类E．青霉素类二、B型题：A．RT-PCR/PCRB．转录介导的扩增系统（TMA）C．支链DNA技术（bDNA）D．杂交捕获系统（HC）E．核酸序列依赖的扩增（NSABA）F．连接酶链反应（LCR）J．链替代扩增（SDA）1．乙肝病毒常用的分子检测方法2．丙肝病毒RNA的定性及定量检测方法3．HIV病毒RNA的定量检测方法4．巨细胞病毒（CMV）常用的分子检测方法5．结核分枝杆菌常用的分子检测方法6．国外分子检测淋病萘瑟菌的常用方法A．病原微生物是否存在的定性检测B．定量检测C．基因分型D．表型分型E．耐药性检测7．目前可对梅毒螺旋体进行哪些方面的分子检测8．目前对HIV的分子检测主要有9．目前可对结核分枝杆菌进行哪些方面的分子检测10．目前可对金黄色葡萄球菌进行哪些方面的分子检测三、X型题：1．感染性疾病的分子诊断常用方法有：A．酶联免疫吸附试验（ELISA）B．靶分子扩增技术C．杂交捕获系统D．信号放大技术E．以上都是2．可用于结核分枝杆菌感染的分子检测标本有：A．痰B．胸腹水C．血清D．尿液E．脑脊液3．对HIV进行RT-PCR检测时引物设计主要选择下列哪些区域A．gag基因区B．pol基因区C．LTR区D．Rev基因区E．env基因区4．对HSV进行PCR检测时引物设计主要选择下列哪些区域A．长重复序列（RL）B．糖蛋白D基因区C．DNA聚合酶基因区D．短重复序列（Rs）E．胸腺嘧啶核苷激酶（TK）基因区5．结核分枝杆菌的耐药相关基因包括：A．rpoB基因B．katG基因C．rpsL基因D．MPB64基因E．rrs基因6．大肠埃希菌O157∶H7的PCR检测主要依据哪些基因设计引物A．Stx1、溶血素hlyAB基因B．Stx2C．Stx3D．Stx4E．溶血素hlyAB基因四、名词解释：1．完整检出策略2．信号放大技术五、问答题：简述感染性疾病分子诊断的标本处理试述感染性疾病分子诊断的优缺点。简述感染性疾病分子诊断的结果解释中应注意的问题。简述感染性疾病分子诊断的临床应用。参考答案一、A型题：1.B2.D3.C4.D5.E6.B7.D8.A二、B型题：1.ACD2.ABC3.ACE4.ADE5.AFJ6.ABDJ7.AC8.ABCDE9.ACE10.ABCE三、X型题：1.BCD2.ABCDE3.ABC4.BCE5.ABCE6.ABE四、名词解释：1．完整检出策略答：感染性疾病的完整检出策略是指通过分子诊断的相关技术对病原体的存在与否作出明确判断，而且能够诊断出带菌者和潜在性感染，并能对病原体进行分类、分型（亚型）和耐药性鉴定，这对于疾病的临床治疗及预防病原体的传播非常重要。2．信号放大技术答：信号放大技术是感染性分子诊断的一类常用技术，它不涉及靶分子的扩增，采用多酶、多探针或二者结合等方式来增加探针标记物的浓度使检测信号得到放大，从而提高检测的灵敏度。目前常用的有液相杂交检测技术、杂交捕获系统和支链DNA检测技术等。由于这类方法所检测的靶分子不经过呈指数增长的扩增过程，放大倍数确定，干扰因素少，不存在靶分子扩增技术所固有的可能污染的问题；因此稳定性、重复性及特异性都较高，结果准确，是目前感染性疾病分子诊断的经典方法，应用广泛。目前美国FDA批准临床应用于感染性疾病分子诊断的商业化试剂盒采用的方法主要是这一类方法。但正是由于没有靶分子的指数扩增，这类方法放大倍数小，因而灵敏度较低，很难检测到低水平的基因分子（<5×103拷贝/mL），不适用于微量病原微生物的分子检测；而当提高灵敏度时，其特异性就会降低。同时信号放大系统还存在由于报告探针的非特异结合而带来的背景噪声问题。五、问答题：1．简述感染性疾病分子诊断的标本处理答：临床标本的采集及处理是否合理对于感染性疾病分子诊断是很重要的。标本采集及处理主要包括选择合适的标本种类、标本量、抗凝剂等及对标本进行合理的传送、保存和预处理。（1）标本的选择分子诊断标本的选择主要取决于相关疾病的临床表现、感染的病理学机制。目前的分子诊断多采用血标本，包括血浆、血清、全血和白细胞，而对于许多的病原微生物感染仍是根据其感染的部位采集特定的组织或体液作为标本。同时DNA和mRNA的选择对疾病状况的判断也是很重要。（2）分子诊断方法的标本量需求少，从100μl到500μl不等，至多1ml，有时更少，如10μl的CSF可直接进行PCR检测。根据方法不同，所需标本的量可能不同。（3）标本的传送、保存分子诊断不要求其标本存活，所以在标本的运输和保存过程中方式比较灵活。一般标本应当立即处理或保存于-80℃直至检测。由于RNA易受酶的影响而分解，用于提取RNA的全血标本应于4～6℃保存。（4）标本的预处理分子诊断的标本预处理主要是指核酸的提取，另外还包括扩增抑制物的去除及潜在危险病原体的灭活。核酸提取的方法很多，DNA提取常用酚氯仿抽提、硅藻或磁珠颗粒吸附等方法，RNA提取的常规方法是异硫氰酸胍或氯化铯梯度离心法。这些方法都是成熟经典的核酸提取法，目前都有市售的试剂盒提供，可适用于多种标本的核酸提取。2．试述感染性疾病分子诊断的优缺点。答：感染性疾病分子诊断的优点：分子诊断主要是针对侵入人体内的病原体基因；采用的方法具有简便、快速且灵敏度和特异性都较高的特点；标本需要量少且不需活标本。因此应用分子诊断学技术可快速准确的测定出病原体的存在与否，不仅可以对微生物感染作出确诊，也能诊断出带菌（毒）者或潜在性感染，还可以对感染性病原体进行分型和耐药性监测。特别适用于一些疾病的早期诊断、确诊性诊断及爆发性感染的大规模检测。感染性疾病分子诊断的缺点：感染性疾病的分子诊断方法可分为两类：信号放大技术和靶分子扩增技术。但前者的灵敏度较低，后者又由于易污染产生假阳性结果，因此在临床应用中分子诊断结果往往会出现与其它诊断结果不符的现象。同时分子诊断出有某种微生物的存在，并不能断定它就一定是疾病的诱因，所以对于分子诊断结果应注意结合临床，特别是患者病史、体检、X片、CT等综合考虑，以利于疾病快速准确的诊断。3．简述感染性疾病分子诊断的结果解释中应注意的问题。感染性疾病分子检测的结果解释应当包括与感染性疾病相关的病原体的生物学、病理学特征、实验技术的优点及局限性等，主要需要注意以下几种结果的解释。（1）阴性结果在对阴性结果进行解释时，应当注意检测灵敏度、核酸提取及扩增效率。实验受抑或扩增效率降低都会引起实验的假阴性，所以应按要求做好质控，具体方法在前面已提到过。除此之外，样品量的不足、标本类型不恰当、收集时间不符合要求以及可能在运输过程中造成的核酸物质的降解等情况都可能造成假阴性。（2）阳性结果在对阳性结果进行解释时应当考虑到检测的特异性和可能受到的污染等情况：引物和探针的特异性不高时可能出现假阳性结果；扩增产物对样本的污染可引起实验假阳性；此外，样本采集、运输及处理等各个环节可能使样本间发生交叉污染出现假阳性。（3）定性检测结果定性分子检测并不能提供有关病原体活力的相关信息。临床治疗病情缓解后，在病人样本中仍可以检测出相应的病原体存在，有时还需要定量检测以确诊病情。（4）疾病状况的判断分子诊断方法检测出病原体的存在并不能说此病原体就是引起疾病的直接原因。该病原体可能是正常菌群的一种，定植于某个特定区域或者使病人处于感染状态。4．简述感染性疾病分子诊断的临床应用。目前分子诊断方法被广泛地应用到感染性疾病治疗的监控和预测、病情发展过程的危险性评价及疾病预后等各个领域。（1）弥补血清学检测技术的缺陷：当出现以下情况时①血清学检测结果模棱两可，或血清学结果与临床表现不符时；②使用疫苗或特异性抗血清治疗后的病例；③对于免疫缺陷个体的病原微生物检测；④献血员的病原微生物筛查；⑤某些病原微生物感染后，特异抗体的产生与临床意义的恢复或感染终止不一致时；需要进行分子检测以确诊（2）检测不能培养或生长缓慢的病原微生物：对于这类病原微生物分子诊断技术可根据其基因组特点，设计特异的探针和引物，通过分子杂交或靶基因扩增的方法对其进行快速鉴定、定量检测及相关基因序列分析，有助于这类病原微生物的快速诊断及治疗。（3）通过病原微生物的定量检测监测疾病：对病原微生物的定量检测有助于监测疾病的状态、检测疗效及提供可靠的预后信息，尤其是一些病毒感染，如HBV、HCV和HIV病毒感染。（4）微生物耐药性的检测：分子