医学科研方法课题

孕妇与不孕症妇女解脲支原体、沙眼衣原体感染的研究要迎春一、课题名称：孕妇与不孕症妇女解脉支原体、沙眼衣原体感染的研究二、立项依据:解脉支原体（Uu），沙眼衣原体（Ct）感染在临床上非常多见，已经成为医学界普遍关注的问题.孕妇和不孕症妇女都是Uu和Ct的易感人群，Uu,Ct是孕妇和不孕症妇女生殖道感染的最常见的两种病原微生物，我们就妊娠期和不孕症患者Uu,Ct感染作出初步研究，研究两者Uu和Ct感染的情况，以便进一步做好围产期保健，提高妊娠质量及查找不孕症患者的病因，便于临床治疗。三、研究方案1、研究目标：了解孕妇与不孕症妇女解脉支原体（Uu）,沙眼衣原体（Ct）感染的情况.方法：孕妇534例和不孕症患者124例分为两组取其宫颈分泌物检测Uu，CtDNA，并抽取空腹血清，采用Uu,Ct蛋白芯片方法检测两组血清中的Uu,CtIgG抗体，以了解两组患者Uu,Ct感染的情况.结果：孕妇与不孕症妇女Uu感染率无统计学差异，而Ct感染率则不孕症妇女明显高于孕妇（P0.05）.结论：Ct感染在不孕症的病因中更具意义。2、 研究对象：1、对象200307/200402来我院妇产科和生殖门诊就诊的孕妇534例和不孕症妇女124例（丈夫精液分析正常，多数为继发性不孕患者），检测其血清。“和CtIgG抗体及宫颈分泌物Uu和CtDNA3、 研究的方法①用PCR方法检测孕妇及不孕症妇女宫颈分泌物Uu和CtDNA，其取材方法是：用扩阴器扩开阴道后，取消毒棉拭子，拭净宫颈外口分泌物，弃去.再取一支棉拭子，伸入宫颈管内，停留30s，沿管壁旋转3wk后取出.放入装有1mL无菌生理盐水的试管中，充分悬浮，再挤干拭子中的水份，取出拭子，弃去.试管于-4°C冰箱保存待检.试剂由上海复星医学科技发展有限公司提供，操作严格按照试剂盒说明书进行.扩增产物经含EB染色剂的琼脂糖凝胶电泳，将凝胶置于紫外检测分析仪上观察，如在450nm处出现橙黄色条带，则标本中有Uu核酸存在，如在225nm处出现橙黄色条带，则标本中有Ct核酸存在.检测结果见Fig1.②用蛋白芯片（南京大渊生物医学试剂有限责任公司）方法检测两组血清中的Uu和CtIgG抗体.此蛋白芯片是渗滤式免疫反应芯片，使用间接法原理，胶体金标记.可分型检测，多项同检.以微孔滤膜为载体，利用微阵列技术将纯化的UuI,II群及CtLGV,CtBT群特异性蛋白固相于同一膜片上，并利用微孔滤膜的渗滤、浓缩、凝集等，使病原抗体反应在固相膜上快速进行，再以免疫金作为标记物直接在膜上显色，显色后的芯片放入芯片识别仪，在专门软件支持下对不同点阵的灰度值进行分析，实现了对两种病原体的抗体进行同步检测.4、 资料统计分析：采用SPSS统计软件11.5进行统计学分析，x2检验.P0.05,认为差异有统计学意义.5、 可行性分析2.1孕妇与不孕症妇女宫颈分泌物Uu和CtDNA检测情况将不孕症患者组设为第一组，例有文献报道，PCR检测法检测Ct灵敏度及特异性可达94%〜100%，可作为临床检测的实用方法，尤其适用于Ct感染的早期诊断和无症状携带者的检查.蛋白芯片法目前正开始应用于临床，蛋白芯片法是一种检测Uu和Ct的新方法，具有快速、简便、经济等优点，但其准确率稍低于PCR检测法.我们采用PCR检测法和蛋白芯片法同时检测，可提高检测数为124例，孕妇组为第二组，例数为534例.两组患者采用PCR方法检测Uu和CtDNA不孕症患者Ct感染率显著高于孕妇组（P<0.05）.不孕症患者与孕妇Uu的感染率无统计学差异，均在33%左右.两组Uu和Ct感染的总阳性率无统计学差异2.孕妇与不孕症妇女蛋白芯片法检测两组血清中的Uu，CtIgG抗体情况同样将不孕症患者组设为第一组，孕妇组为第二组两组患者采用蛋白芯片法检测两组血清中的Uu和不孕症患者与孕妇染率无统计学差异。6、 研究成果Uu和Ct感染是不孕症的重要因素.女性感染支原体可导致生殖道炎症，使黏膜细胞坏死，输卵管纤毛运动停滞，引起不孕[1].不孕症妇女Uu和Ct感染的阳性率,各地报道不一，Uu感染率为27.2%〜47.1%,Ct感染率为23.8%〜44.1%[2-4].本研究中，不孕症妇女Uu感染率为33.06%〜37.10%，与各地报道一致但Ct感染率在10%以下，显著低于前述研究可能有地域差异.不孕症患者Uu和Ct感染的阳性率明显高于正常未怀孕妇女.孕妇Uu感染率可高达40%〜80%.Ct感染率国内报道为1%〜34%国外报道为2%〜47%[56].一般人群支原体感染率为19.35%，衣原体感染率为0.05%[7].妊娠时由于多种激素水平的改变，机体内环境变化从而更适于一些微生物的生长，其中包括Uu和Ct的繁殖，此外，妊娠期妇女处于免疫抑制状态，多种病原体乘虚而入，所以孕妇的Uu和Ct感染率较正常非孕妇高.可见，不孕症妇女和孕妇均是Uu和Ct感染的高危人群，所以对不孕症患者及孕妇进行Uu及Ct的检测是防治不孕症及防治围产期并发症的重要方法.从研究结果看出，不孕症患者和孕妇Uu的感染率均明显高于Ct的感染率，但前者Ct感染率显著高于后者.李琰等[8]报道，原发不孕，继发不孕的UuDNA阳性率分别为26.7%，34.4%，而正常早孕为8%，CtDNA阳性率分别为26.0%，23.8%，而正常早孕为6%，提示Uu及Ct感染率均明显高于正常早孕组.Uu和Ct同时感染是引起不孕的重要原因之四、参考文献赵晓岚，楚雍烈，叶国玲，等.反复流产和不孕症与支原体和免疫因素地关系[J].第四军医大学学报，2003；24(20)：1884-1886.ZhaoXL,ChuYL,YeGL,etal.Associationofmyloplasmaandimmunefactorswithrecurrentspontaneousabortionandsterility[J].JFourthMilMedUniv,2003；24(20)：1884-1886.张兰英，王成瑜.不孕症妇女解脲支原体、沙眼衣原体的临床分析[J].中国计划生育学杂志，2002；12(86)：746-748.ZhangLY,WangChY.Clinicalanalysisofinfectionofureaplasmaurealyicumandchlamydiatrachomatisininfertility[J].ChinJPlannedParenthoodol,2002；12(86)：746-748.朱军，王卫萍，陈亚利，等聚合酶链反应和DNA探针杂交法检测沙眼衣原体的比较[J].东南大学学报(医学版)，2003；22(1)：35-38.ZhuJ,WangWP,ChenYL,etal.ComparingofdetectingchlamydiatrachomatiswithpolymerasechainreactionandDNAprobeintercross[J].JSoutheastUniv(MedSciEd),2003；22(1):35-38.胡德芬，段炼，刘晓兰生殖道沙眼衣原体和解脲支原体119例分析[J].第三军医大学学报，2001；23(12)：1497-1498.HuDF,DuanL,LiuXL.Clinicalanalysesof119casesofchlamydiatrachomatisandureaplasma

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