枳实消痞丸及其拆方对大鼠胃中空及血浆胃动素水平的影响

枳实消痞丸及其拆方对大鼠胃中空及血浆胃动素水平的影响

《魁三察经》是中医补气消毒之方，能改善患者的早食、饭后大便等症状。本实验观察了该方剂及其拆方对大鼠胃排空和血浆胃动素(MOT)水平的影响,结果报告如下。1材料和方法1.1全方组的制备雄性Wistar大鼠112只,7~8周龄,180~210g,由上海中医药大学实验动物中心提供。枳实消痞丸方(枳实,厚朴,麦芽,党参,茯苓,白术,炙甘草,半夏,黄连,干姜)用蒸馏水制成全方组及消法(枳实、厚朴、麦芽)、补法(党参、茯苓、白术、炙甘草)、和法(半夏、黄连、干姜)4种水煎液以及合煎冲剂、分煎冲剂两种全方冲剂,浓度(生药量/ml)分别为1、0.423、0.346、0.231、1及1g/ml。由上海中药研究所加工提供。西沙必利片剂(西安杨森制药有限公司,批号9707154)制成0.2mg/ml的水溶液。鱼粉蛋白胨溶液(40%);酚红(1.0mg/ml);磷酸三钠(63.7g/L);MOT放免试剂盒(北京解放军总医院东亚免疫技术研究所)。1.2实验方法1.2.1各组大鼠灌胃负压mot①胃排空测定分组:72只大鼠分为标准组、正常对照组、西沙必利组、枳实消痞丸方饮片组(全方)、消法组,补法组,和法组,全方合煎冲剂组、全方分煎冲剂组,共9组,每组8只。②MOT测定分组:40只分为正常对照组、全方组、消法组,补法组,和法组,每组8只。各用药组灌胃均1.5ml/只,每天1次,用药4周。标准组及正常对照组用0.9%NaCl1.5ml/只灌胃同上,均灌胃4周。各组分笼饲养,自由进食与饮水。1.2.2胃科学使用液胃排空的测定:采用酚红标记蛋白胨溶液法。40%蛋白胨溶液(悬浊液)于实验前数天用蒸馏水配制,并加酚红作为不吸收的标记物(1.0mg/ml),4℃保存。各组大鼠用药结束后,禁食18h;用预热的蛋白胨溶液(37℃)灌胃,3ml/只;标准组灌胃后立即处死,其他各组灌胃40min后以颈椎脱臼法处死;迅速剖腹,结扎大鼠胃幽门及贲门,取出胃,沿大弯侧剪开,胃内容物收集于量杯。用30ml蒸馏水冲洗胃3次,冲洗液也倒入量杯。量杯内液体再用蒸馏水滴定至100ml,充分混匀;取5ml4℃3100r/min离心15min;取上清1ml加入5mlNa3PO4(63.7g/L),涡旋混合;每个样本的酚红浓度(Csample)用分光光度计于523nm处测定吸光度。胃排空率以标准组为基准,按下列公式计算:胃排空率(%)=(Cstandard-Csample)/Cstandard×100%),Cstandard代表标准组中各样本平均吸光度。MOT的测定:采用放免法,用药结束后,各组大鼠禁食18h(水、药如常),2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,股静脉采血2ml,置于含30μl10%EDTA二钠和30μl抑肽酶塑料管中混匀,4℃离心,3500r/min15min,取血浆250μl,-20℃以下保存待检。为避免血浆中冷凝蛋白对测定的干扰,测定时血浆复融后,4℃离心,取上清液按试剂盒要求条件测定。用MOT标准液的样品结合百分率绘制标准曲线,查出相应的样本值。样本管和标准管的检测均采用双管法。1.3统计处理方法多组间均数比较采用方差分析。显著性水平设α=0.05。采用SPSS统计软件包进行统计处理。2结果2.1补法组和分充颗粒组胃宣传及结果结果见表1。由表1可见,除和法组外,各用药组的胃排空率均显著快于正常对照组;而补法组和分煎冲剂组胃排空率又较全方组及西沙必利组为慢,其余各组两两间差异无显著性意义。与正常对照组比较1)P<0.05,2)P<0.01;与西沙必利组比较3)P<0.01;与全方组比较4)P<0.052.2组患者的mot释放作用结果见表2。1)与对照组比较P<0.05由表2可见,枳实消痞丸方具有促进MOT释放的作用,拆方研究表明方中消法组的药物起主要作用,补法组也有升高MOT的趋势,但无统计学意义。3促进胃宣传的药物作用枳实消痞丸方是李东垣治疗虚实相兼之痞满证的代表方剂,由枳术丸、半夏泻心汤、四君子汤3方加减化裁而成。方中枳实苦泻辛散,沉降力强,有良好的破气消积之功,以辛苦性温之厚朴行气消痞、下气除满,丹波元胤云“厚朴之性,不论虚实,气之逆而为胀闭者,并能治之”(《药雅》),再佐以麦芽消食和胃,3药合用,更增其行滞气消痞满之功;以苦寒之黄连清热燥湿以泻痞,半夏辛温和胃而散结除痞,用少量干姜温中祛寒,3药相和,辛开苦降,调其寒热,助枳、朴行气开痞除满;用参、术、苓、草补中健脾,祛湿和中。综观全方,消补兼施,寒热并用,实为行气消痞良剂。我们临床上应用枳实消痞丸方治疗功能性消化不良(FD)取得了较好的疗效,胃肠运动失常和胃排空延迟与FD的发病密切相关,本文的实验研究表明,本方具有明显促进胃排空的作用。进一步的拆方研究发现在本方的药物中,体现消导之法的药物(枳实、厚朴、麦芽)促进胃排空的作用最为明显,补法组(党参、白术、茯苓、甘草)也能显著促进大鼠的胃排空,但其作用较全方组和消法组为弱。本次研究未发现冲剂和传统水煎剂的作用差别;分煎冲剂组也能促进胃排空,但作用明显不如合煎冲剂组和饮片组,说明药物的制备办法可能影响到某些有效成分的发挥,合煎可能使本方一些药物成分发挥更大的协同作用。既往有报道,枳实、厚朴可兴奋试验动物的胃肠运动,此两药可能是消法组中起主要作用的。而补法组药物中的党参、白术在动物实验中亦有类似作用;甘草则能抑制小鼠的胃肠推进,提示其可能为补法组药物中的抑制成分,使得补法组的促进胃排空作用较消法组为弱。有研究表明柴胡、枳实两药合煎时的促胃肠推进功能比两药分煎时更明显,这与我们此次对枳实消痞丸方的研究结果相似。我们以前的动物实验已证明枳实消痞丸加减方能提高大鼠的红细胞胆碱酯酶活性,迷走神经是支配胃肠生理活动的重要外源性神经,迷走神经切断术后胃的运动受损或消失充分说明了该神经的重要性,因此迷走神经兴奋性加强可能是本方促进胃排空的重要机制。MOT是由22个氨基酸组成的多肽,分泌MOT的细胞分布在小肠上段,尤其在十二指肠。一般认为,MOT的主要作用器官是胃,在消化间期对胃排空内容物起主要作用。本实验研究也证明枳实消痞丸方具有促进MOT释放的作用,跟胃排空实验类似,拆方研究表明方中消法组的药物起主要作用,补法组也有升高MOT