无菌检查方法薄膜法验证方案设计

安徽捷众生物化学有限公司无菌检查办法（薄膜过滤法）验证方案文献编号：QY·TS·05·007-00同意日期：年月日实施日期年月日安徽捷众生物化学有限公司文件审批表文献名称：无菌检查办法（薄膜过滤法）验证方案文献编号：QY·TS·05·007-00文献提出部门：质量控制部/QC文献起草目的：新订eq\o\ac(□,√)修订□文献起草人（签字）：完毕日期：年月日文献会审部门文献审核人（签字）审核日期质量管理部年月日质量确保部/QA年月日质量控制部/QC年月日生产部年月日工程(设备)部年月日文献同意人（签字）：同意日期年月日文献实施日期：年月日起实施文献编制根据：卫生部：《药品生产质量管理规范》修订版和修订附录《中华人民共和国药典》（二部）附录。文献复制人：校对人：复制份数：复制日期：年月日颁发部门：质量管理部分发单位：备注：安徽捷众生物化学有限公司无菌检查办法（薄膜过滤法）验证方案目录1．验证目的2.验证频次3.验证操作内容与规定3.1.验证操作实验3.2实验菌规定3.3.验证办法环节3.4.验证准备3.5验证明验操作4．验证成果评价分析5．附件安徽捷众生物化学有限公司无菌检查办法（薄膜过滤法）验证方案编号QY·TS·05·007-00页数共11页制订人制订日期年月日修订日期年月日审核人审核日期年月日颁发部门质量管理部同意人同意日期年月日生效日期年月日分发部门有关部门1．验证目的确认所采用的办法适合于供试品的无菌检查。即确认供试品在该检查量、该检查条件下无抑菌活性，以确保检查成果的精确、可靠及检查办法的完整性。2.验证频次2.1.建立药品的无菌检查法时2.2.修订检查办法时2.3.供试品的组分或原检查条件发生变化可能影响检查成果时3.验证操作内容与规定：3.1.验证时，按“供试品的无菌检查”的规定规定进行验证操作实验：3.1.1.3.1.2.硫乙醇酸盐流体培养基—3.1.3.改良马丁琼脂培养基—3.2实验菌规定：3.2.13.2.2验证明验可在供试品的无菌检查之前或与供试品的无菌检查同时进行。当同时进行3.3.验证办法环节：3.3.1验证明验的操作计划用3个不同批号产品按照无菌检查办法（薄膜过滤法）3.3.2实验成果可接受原则用无菌原则评价办法“0.9％氯化钠注射液(三层共挤膜袋)的无菌检查”3.4.验证准备：准备验证所需的供试品、培养基、试药试剂、仪器设备和菌种。3.4.1硫乙醇酸盐流体培养基；改良马丁琼脂培养基；营养琼脂培养基；血琼脂培养基备注：3.4.1.13.4.1.2配制后的培养基应按照中国药典附录“无菌检查法”中“培养基的合用性检查3.43.4.3.4.3.4.23.4.3.4.3.4.3.4.3.4.3.4.3.4.2.10.器具无菌培养皿：（直径备注：以上仪器设备需要确认与验证的均应已按规定验证。3.43.4.3.4.3.4.3.4.3.4.3.4.3.43.4.3.4.3.4.3.4.5①批号：生产日期：②批号：生产日期：③批号：生产日期：3.4.63.43.4.7.1序号菌株名称菌株代码及编号内控编号1金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕2铜绿假单胞菌〔CMCC（B）10104〕3枯草芽孢杆菌〔CMCC（B）63501〕4白色念珠菌〔CMCC（F）98001〕5生孢梭菌〔CMCC（B）64941〕6黑曲霉〔CMCC（F）98003〕3.4.7.2编号由菌名首字母—3.4名称生产商培养基批号配制日期使用期营养琼脂培养基改良马丁琼脂培养基3.5验证明验操作：3.5.13.5.1.1将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至良马丁流体培养基中，23～3.5.1.2将黑曲霉接种至改良马丁琼脂培养基中，在23～283.5.1.33.5.3.5.2.1样品实验组：A精确取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充足振摇，使供试品溶解。B然后加入45℃的C用移液管精确吸取1.0ml供试液至平皿中；并在每个平皿中接种50～100cfu实验菌，立刻倾注营养琼脂培养基，每个实验菌平行接种2个平皿，按照平皿法测定其菌数。3.5.2.2菌液组：按中国药典附录“无菌检查法”中“敏捷度检查”A在平皿中注入1ml的菌液立刻倾注营养琼脂培养基，以测定所加的菌数。B供试品对照组取规定量的供试液，按菌落计数办法测定供试品的本底菌数。C稀释剂对照组取对应稀释液1ml加入实验菌，使最后菌浓度为每ml供试液含50～100cfu实验菌，按实验组的供试液制备办法和菌落计数办法测定其菌落数。D对于同一份培养物，采用相似的测定办法，不同的实验人员的测定成果可能有很大的误差。因此在操作过程中，应特别注意能造成误差的各个环节。E当采用固体培养基上的培养物制备菌悬液时，应尽量使菌苔成单个菌体分散于稀释液中。F为确保每次菌数测定能在预计的范畴内，在对菌液做10倍系列稀释时，规定稀释每个浓度的菌液均应换灭菌吸管。G液体培养物直接稀释法较比浊法造成误差小，基本确保每次菌数能控制在规定的范畴内。I最后制得的菌悬液应为不大于100CFU/ml。J金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌采用营养琼脂培养基；生孢梭菌采用血琼脂培养基；白色念珠菌、黑曲霉采用改良马丁琼脂培养基。3.5.3培养将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30～50℃下培养48小时将白色念珠菌、黑曲霉在23～3.5.43.5.4.接入菌种0.9％氯化钠注射液批号菌落计数（cfu/皿）回收率稀释剂对照组菌液组金黄色葡萄球平均值铜绿假单胞菌平均值枯草芽孢杆菌平均值白色念珠菌平均值生孢梭菌平均值黑曲霉平均值表中：回收率=稀释剂对照组的平均菌落数÷菌液组的平均菌落数×100%。3.5.4.接入菌种0.9％氯化钠注射液批号菌落计数（cfu/皿）回收率实验组供试品对照组金黄色葡萄球平均值铜绿假单胞菌平均值枯草芽孢杆菌平均值白色念珠菌平均值生孢梭菌平均值黑曲霉平均值表中：回收率=（实验组的平均菌落数－供试品对照组的平均菌落数的值）÷菌液组的平均菌落数×100%。4．验证成果评价分析4.1对验证成果的评审应涉及：验证明验与否有遗漏？验证明施过程中对验证方案有无修改？修改因素、根据以及与否通过同意？验证统计与否完整？验证明验成果与否符合原则规定？偏差及对偏差的阐明合理？与否需进一步补充实验？4.5.成果判断：?4.5.1..供试品按无菌检查法进行检查，如含供试品各容器中的实验菌均生长良好，成果判断验证无效，并重新进行办法验证。4.5.2如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，可采用增加冲洗量，增加培养基用量，使用中和剂或灭菌剂；更换滤膜品种等办法，并重新进行办法验证。5．附件附件1产品实验组的微生物生长检查统计：菌种名称产品实验组计数成果（cfu/皿）平均值金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌生孢梭菌黑曲霉供试品对照组的微生物生长检查统计菌种名称供试品对照组计数成果（cfu/皿）平均值金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌生孢梭菌黑曲霉稀释剂照组的微生物生长检查统计菌种名称阳性对照计数成果（cfu/皿）平均值金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌生孢梭菌黑曲霉菌液组菌种名称阳性对照计数成果（cfu/皿）平均值金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌生孢梭菌黑曲霉测试人/测试日期：复核人/复核日期：附件2安徽捷众生物化学有限公司质量控制检测仪器(设备)验证成果评价表验证名称无菌检查办法（薄膜过滤法）验证方案编号VF-PR-17-A验证成果评价及建议确认验证小组：年月日附件3安徽捷众生物化学有限公司质量控制检测仪器(设备)验证报告年月日至年月日，验证小组根据同意的编号为“VF-PR-17-A”的无菌检查办法（薄膜过滤法）验证文献对无菌检查办法（薄膜过滤法）检查法进行了有关的一系列验证工作，达成了预期效果，滋将有关事项阐明以下：验证方案在实施过程中未做修改；验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在允许范畴内；验证过程中成果符合规定规定，统计完整属实；验证成果符合设计规定和GMP原则规定，能够投入使用。以上状况，请验证委员会审批！验证小组：