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常用分子生物学技术的原理及应用ThePopularTechnologyinMolecularBiology:PrincipleandApplication第二十章第一节

分子杂交与印迹技术

MolecularHybridization&BlottingTechnology分子杂交技术的原理主要涉及分子杂交特性（见第二章）印迹技术探针技术核酸分子杂交(nucleicacidhybridization)利用DNA变性与复性这一基本性质来进行DNA或RNA定性或定量分析的一种技术。一、分子杂交与印迹技术的原理第二节聚合酶链反应

PolymeraseChainReaction（PCR）一种可以将目的微量的DNA片断扩增100万倍以上的技术

PCR是一种模拟自然DNA复制过程的核酸体外扩增技术。

根据DNA变性、复性的特点设计。1993年诺贝尔化学奖获得者KaryMullis

1985年由穆里斯首创。可将微量的目的DNA片断的数量扩增100万倍以上。PCR扩增目的基因最初采用E-coliDNA聚合酶进行PCR，由于该酶不耐热，使这一过程耗时，费力，且易出错耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行，随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪各种PCR仪PCR体系基本组成成分含Mg2+的缓冲液dNTP耐热DNA聚合酶TagDNA聚合酶特异性引物一对分别与待扩增DNA序列5’端相同，3’端互补的寡核苷酸片段。模板DNA模板DNA引物TaqDNA聚合酶dNTP含Mg2+缓冲液PCR三步曲变性95˚C延伸72˚C退火Tm-5˚C循环25~30次使模板DNA完全变性成单链。同时引物自身和引物之间存在的局部双链得以消除使引物和模板DNA退火结合此温度下DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA链的延长三个步骤为一个循环，每次循环产物作为下一轮模板进入下一轮循环第一轮循环5/3/3/5/5/5/5/5/引物A引物B变性（95℃）6075859590807065555045403530℃退火（60℃）延伸（72℃）DNA-PolDNA-Pol温度第二轮循环5/5/5/3/3/5/5/5/引物A引物B6075859590807065555045403530℃变性（95℃）退火（60℃）延伸（72℃）5/5/5/5/温度DNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-Pol第三次循环5/5/5/5/5/5/5/6075859590807065555045403530℃5/变性（95℃）退火（60℃）延伸（72℃）温度DNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-PolDNA-Pol基因组DNADN

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