金莲花微囊制备工艺的研究

金莲花微囊制备工艺的研究

金莲花系毛科金莲花科的干燥花主要包括黄酮、氨基酸、酸和蒸发成分。根据近代药理学研究可知,其有效成分为总黄酮类,对绿脓杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌等均有明显的抑制作用,对副流感病毒、A型流感病毒、呼吸道合胞病毒以及ECOH、CoxA24、CoxB3等病毒也有程度不等的抑制作用。目前应用于临床的金莲花制剂主要有片剂、颗粒剂以及袋泡茶等剂型,但抗菌、抗病毒作用都不如其水提液,所以有研究者认为这或与其制剂类型有关,应当对金莲花的新剂型进行相关研究。作为近年来发展起来的新型制剂,微囊除具有掩盖药物不良口味气味、提高药物稳定性、防止药物在胃内失活和减少其对胃的刺激等特点处,更具有缓释作用,可长时间维持稳定的血药浓度,而提高其药物生物利用度。因此将金莲花制成微囊,用以延长其有效成分的释放时间,维持均衡稳定的血药浓度,提高生物利用度,进而提高其疗效,具有较重要的意义。笔者采用相分离成囊技术之单凝聚法制备了金莲花缓释微囊,结果表明金莲花微囊制备工艺稳定、释药性良好。1试剂与试剂金莲花提取物(自提,为棕黄色粉末,总黄酮含量65.15%),药用明胶(天津化学试剂厂,20040910),司盘60(天津化学试剂厂,20010908),液体石蜡(AR,莱阳化学试剂厂,20050426),甲醛(AR,北京化工厂,20060515),异丙醇(AR,天津科密欧化学试剂厂,20051104),正己烷(AR,北京化工厂,20060420),磷酸二氢钾(AR,天津天大化学试剂厂,20040710),硝酸铝(AR,天津博迪化工有限公司,20040622),亚硝酸钠(AR,天津化学试剂六厂,20020911),氢氧化钠(AR,天津津东天正精细化学试剂厂,200411108),0.8μm微孔滤膜。AB-204N电子分析天平(上海),DF-10IS集热式恒温电磁搅拌器(郑州长城科工贸公司),紫外分光光度计(756PC上海),D-800智能药物溶出仪(天津大学精密仪器厂),电子显微镜。2方法和结果2.1金莲花微囊检测条件的确定根据预试验结果及相关文献的报道,确定本实验考察因素为:转速(X1),液体石蜡用量(X2),囊心物用量(X3),利用均匀设计2.10统计软件选取混合水平U6(62×3)均匀设计表,即因素X1、X2为六水平,因素X3为三水平,以金莲花总黄酮的包封率作为评价指标,来筛选制备金莲花微囊的最佳条件,其具体因素水平见表1。2.2司盘-60lg/液体石蜡的溶解称取明胶3g,加水20mL充分溶胀,保温溶解,按照设计条件加入金莲花提取物,充分搅拌,保温;于一定量的液体石蜡中加入司盘-60lg,在55℃下以一定转速搅拌,使其充分溶解并保温;将药物的明胶溶液缓缓加入液体石蜡中,搅拌20min,迅速冷却至4℃以下,保持20min,加异丙醇50mL脱水,再加甲醛30mL固化,冰箱冷藏24h,抽滤,以适量的异丙醇及正己烷洗涤,抽干,烘箱60℃干燥。2.3计算微囊密封率2.3.1对照品溶液的制备取105℃下常压干燥至恒重的芦丁对照品适量,精密称定,置50mL量瓶中,加人工肠液35mL,超声15min,放至定温后,加入人工肠液定容。精密量取5mL置于50mL量瓶中,以人工肠液定容,摇匀,过滤,得对照品溶液。精密量取该溶液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0mL,置于25mL量瓶内,分别加水至6mL,各加5%NaNO2溶液1mL,依次每隔6min加入10%Al(NO3)3溶液1mL、4%NaOH溶液10mL,最后用水稀释定容,摇匀,放置15min。在500nm处测定其吸收度,考察标准溶液浓度与吸收度的线性关系,得到回归方程A=11.0753C+0.0015(r=0.9988),表明总黄酮以芦丁计在0～0.048mg/mL范围内线性关系良好。2.3.2人工肠液转移精密称取金莲花微囊0.4g,置于研钵内,加入少许人工肠液,充分研磨后用15mL人工肠液转移至25mL量瓶中,超声处理至微囊被完全破坏,放冷,以人工肠液定容。过滤后,于500nm处测其吸光度,代入标准曲线回归方程中求C,并按照中国药典2005版第二部附录计算包封率。具体实验结果见表2。2.3.3显著性条件优化以药物的包封率作为评价指标,利用均匀设计2.10统计软件处理实验结果。将实验结果输入计算机,进行逐步回归分析,并进行检验,得到关于微囊包封率的回归议程:Y=69.5-0.131X2-11.2X3,s=0.437,R=0.9993,在显著性水平a=0.05时,其检验值Ft=463.8,临界值F(0.05,3,2)=19.16,Ft>F(0.05,3,2),可知此回归方程有显著性意义,而因素X1对Y影响不显著。对本均匀设计进行回归分析后,获得的最佳实验条件是:囊心物用量为0.667g(即囊心物:囊材=1∶4.5),液体石蜡用量45mL(即油水相比为2.25∶1),转速1200r/min,优化结果Ymax=55.6%(±0.701%)。按照该优化条件,进行验证实验(n=3),测得金莲花微囊的平均包封率为55.02%,与优化值相近。2.4微囊形状和粒度分布的测量2.4.1电子显微镜观察取微囊适量,置于白纸上,观察其外观性状。另取微囊少许,用液体石蜡轻涂于载玻片上,在电子显微镜下观察微囊的形态。所得微囊为棕褐色粉末,分散性好,外形圆整,粒径分布均匀。见图1。2.4.2质量百分率测定取40,60,80,100,120,160目药典统一标准筛,将微囊在各筛中分别过筛称重,计算各粒径范围内微囊的质量百分率。根据测定结果可知,有86.60%的微囊集中在80～120目之间(90μm<d<180μm),这表明微囊粒径的集中度好。见图2。2.5外溶2.5.1累积释放百分率测定总体水分率2.按中国药典2005年版二部溶出度测定方法第二法浆法进行度验,释放介质为人工肠液900mL。精密称取适量金莲花微囊(相当于含金莲花总黄酮200mg),撒于溶出杯内,(37±0.5)℃下,以50r/min的速度进行搅拌。分别于30min、45min、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0h取样5mL,同时补充同体积新鲜溶出液,样品液经微孔滤膜滤过,测定各时间点样品溶液的吸收度,代入标准曲线回归议程中计算C,按以下公式求累积释放百分率。Q%=Cn⋅V+Vi∑i=0n=1CiW×DL%×100%Q%=Cn⋅V+Vi∑i=0n=1CiW×DL%×100%Cn:第n个时间点所取样品浓度;V:释放介质总体积;Vi:第i个时间点的取样体积;Ci:第i个时间点所取样品浓度(V0及C0均为零);W:所取微囊质量;DL%:金莲花微囊载药量。2.5.2金莲花微囊制剂的外科环境结果见图33微囊测试结果3.1同囊心物及液体石蜡用量相比,搅拌速度对包封率和载药量的影响并不显著,但考虑其对微囊粒径大小的影响,故选择1200r/min。其它条件,以温度控制在55～60℃,明胶浓度在15%左右为宜。3.2在此优化条件下,所得微囊平均包封率为55.02%,而且本实验方法简单,条件易控制,所得微囊呈圆球形,表面光滑,性状良好。其体外溶出结果也较为理想,具有缓释作用。3.3在本实验各因素中,所考察的囊心物用量与液体石蜡用量,实际上是对心材比与油水两相比的反映。除