紫外分光光度法测定蜘蛛香中总草三酯的含量

紫外分光光度法测定蜘蛛香中总草三酯的含量

蠕虫虱子（ronima等radix）也被称为马鞭草科的寄生虫。这是一家面部环科植物蜘蛛虱子的干燥根和根系，在《本草纲目》中有记载。这是2010年版《中国药典》收录的唯一一种含有甘草素的生药。其性温、味辛、微苦,具有镇静安神、理气止痛、消炎止泻和祛风除湿等功效。缬草三酯类成分(缬草三酯、乙酰缬草三酯)是其主要活性成分及质量控制指标。缬草三酯类成分(Valepotriates)具有镇静催眠、抗焦虑、抗病毒、抗胃癌、解痉和血管舒张等药理作用。目前,蜘蛛香中缬草三酯类成分含量的测定方法有HPLC法和电位滴定法,而关于采用紫外分光光度法测定蜘蛛香中总缬草三酯含量的研究鲜有报道。笔者以缬草三酯为对照品,采用紫外分光光度法测定蜘蛛香药材中总缬草三酯含量,以期为蜘蛛香的进一步开发利用提供依据。1材料和方法1.1材料表面1.1.1研究的对象蜘蛛香,于2011年11月采自贵州关岭,经鉴定为ValerianaJatamansiJones。1.1.2主要设备KQ5200超声波清洗器,购自昆山市超声仪器公司;T6新世纪紫外可见分光光度计,购自北京普析通用仪器公司。1.1.3主要试剂缬草三酯标准品,购自四川维克奇生物科技公司;甲醇为分析纯,市售。1.2方法1.2.1标准贮备液的配制取缬草三酯适量,用无水甲醇溶解配制成浓度100μg/ml的标准贮备液;分别取缬草三酯标准贮备液0.25、0.50、0.75、1.00和1.25ml置于5ml比色管中,用无水甲醇定容至刻度,摇匀,配制成系列标准工作溶液。1.2.2样品的初步处理取采摘的蜘蛛香样品,自然阴干后取不同部位粉碎成细粉,过60目筛后备用。1.2.3样品溶液的制备准确称取0.500g蜘蛛香粉,置具塞锥形瓶中,加入50ml乙酸乙酯浸泡24h后,超声提取40min,过滤,用乙酸乙酯定容至50ml,取滤液0.2ml,挥干,按标准工作溶液制备方法处理得到待测样品溶液。1.2.4测量波长的选择取缬草三酯标准溶液和样品溶液,在200～400nm范围内进行扫描,确定最佳测定波长。1.2.5加样回收率试验①线性关系的考察。取配制好的系列标准工作溶液,在256nm波长处进行测定,以缬草三酯浓度为横坐标(X),吸光度为纵坐标(Y)绘制标准曲线,计算回归方程。②精密度试验。取样品溶液,按试验方法重复测定6次,计算吸光度的RSD。③稳定性试验。取样品溶液,按试验方法在5h内每隔1h测定1次,计算吸光度的RSD。④重复性试验。取同一样品溶液,按试验方法平行测定6次,计算其总缬草三酯含量的RSD。⑤加样回收率试验。在样品溶液中加入适量缬草三酯标准溶液,进行回收试验并计算平均回收率和RSD。1.2.6总草三酯含量测定以无水甲醇作空白试剂,在256nm处测定缬草三酯标准工作溶液的吸光度,以吸光度对相应的浓度绘制工作曲线,以相同条件测定蜘蛛香的根、根茎和根及根茎中总缬草三酯的吸光度,再用回归方程计算其总缬草三酯的含量。2结果与分析2.1测量波长的选择图1表明,缬草三酯标准溶液及样品溶液均在256nm处有最大吸收,故选择测定波长为256nm。2.2仪器的线性关系①线性关系的考察。计算得线性回归方程为Y=0.0383X+0.0042,R=0.9998。试验结果表明,缬草三酯浓度与吸光度在5～25μg/ml范围内具有良好的线性关系。②精密度试验。计算得吸光度的RSD为0.07%,表明仪器精密度良好。③稳定性试验。计算得吸光度的RSD为0.77%,表明样品溶液在5h内稳定性良好。④重复性试验。计算得总缬草三酯含量的RSD为1.73%,表明方法重现性良好。⑤加样回收率试验。由表1可知,平均加样回收率为99.55%,试验结果表明,该方法准确、快速、重复性好,可用于蜘蛛香中总缬草三酯含量的测定。2.3蛛香根中总草三酯含量的测定由表2可知,蜘蛛香不同部位中总缬草三酯的含量不同。其中,蜘蛛香根中总缬草三酯的含量为3.048%;蜘蛛香根茎中总缬草三酯的含量为2.219%;蜘蛛香根茎及根中总缬草三酯的含量为2.676%。3紫外分光光度法缬草三酯是各种缬草共有的特征性化合物。缬草三酯、乙酰缬草三酯和异缬草三酯均在256nm处有最大吸收。以缬草三酯为对照品,应用紫外分光光度法测定蜘蛛香中总缬草三酯含量,方法学的线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率结果都较满意。该方法简便易行、结果稳定可靠、分析费用低,可用于蜘蛛香中