槲皮素在中草药中的应用

槲皮素在中草药中的应用

氨基黄酮是一种多甲基化合物。化学名称为3、3'、4'、5、7-5黄酮，具有多种生物学活性和高药物效率。槲皮素广泛存在于植物的花、叶、果实中,已知有100多种中草药中含有槲皮素,如槐米、槐花、丹皮、菊花、田基黄、车前子、桑寄生、仙鹤草、杠板归、绞股蓝、山楂、贯叶连翘、菟丝子、银杏叶、刺五加、白花蛇舌草、鸡冠花、鱼腥草、余甘子、三白草、番石榴叶、蜜柑草、紫花地丁、垂盆草等。槲皮素不仅在自然界中广泛分布,其药理作用也很广泛,它具有抗氧化及清除自由基的作用,还具有抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降糖降压、免疫调节及心血管保护作用等。本文就近年来国内外学者对槲皮素的研究进展作以综述。15-羟色胺的药理作用1.1抗癫痫药物槲皮素对多种恶性肿瘤细胞如人卵巢癌、乳腺癌、胃肠肿瘤细胞、白血病等均具有抑制其生长的作用,并对恶性肿瘤细胞凋亡产生影响。1.1.1槲皮素对vegf-c和vegfr-3表达的影响于志君等在研究槲皮素抑制胃癌MGC-803细胞淋巴转移的作用时发现,槲皮素处理48h后VEGF-C和VEGFR-3表达水平均有下调,槲皮素可能通过下调二者的表达,抑制肿瘤细胞的增殖,近而在抑制肿瘤淋巴结转移中发挥作用。1.1.2t49d细胞间的mcf-7细胞增殖沈丽霞等发现槲皮素可影响人乳腺癌T47D细胞两种受体亚型的表达,当槲皮素浓度在10μmol/L中可明显诱导T47D细胞ERαmRNA和蛋白表达,而对ERβ表达没有影响;并可使MCF-7细胞增殖指数明显升高,增加S期细胞的比例。当与ICI182、780共孵育T47D细胞时,ERα表达被拮抗。槲皮素产生的促进ER阳性细胞增殖的雌激素样作用是通过增加ERα表达实现的,槲皮素通过其雌激素样的作用,从而抑制乳腺癌细胞的增生。1.1.3槲皮素作用马建勋在研究槲皮素对肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制和诱导凋亡作用时,通过实验证实了槲皮素体外抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长是能呈现量效和时效关系,槲皮素作用48h后,AO染色图片可见细胞膜呈泡状膨出和凋亡小体等,凋亡过程中线粒体膜电位下降,从而抑制肝癌细胞的增殖。除此之外,槲皮素还可对人肝癌细胞耐长春新碱(VCR)耐药株(SMMC7721/VCR)逆转产生影响,槲皮素能够部分逆转SMMC7721/VCR细胞的耐药性,能够降低肝癌细胞耐药株SMMC7721/VCR对VCR的IC50值,它可作为有效的多药耐药逆转剂,与其它化疗药物联合应用于肿瘤的化学治疗。1.1.4槲皮素联合x射线对睾丸hela细胞增殖的抑制作用梁晓芳等观察槲皮素对人宫颈癌细胞HeLa增殖及其放射敏感性的影响时发现槲皮素能明显抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖,并存在剂量依赖和时间依赖性,槲皮素联合x射线照射能著显降低照射后Hela细胞的存活率,达到抑制癌细胞增殖的目的。1.1.5诱导rko细胞凋亡槲皮素对结肠癌细胞SW480增殖及RKO生长有明显的抑制作用,槲皮素可能通过上调p21和p27表达使RKO细胞周期阻滞于Go/G期,可能通过上调促凋亡蛋白p53表达诱导RKo细胞发生凋亡;槲皮素还可能通过上调P53依赖途径中p53基因表达使Gadd45a表达增高,从而影响结肠癌细胞的生长。1.1.6诱导细胞凋亡槲皮素在体外能抑制卵巢癌HO-8910细胞的生长,阻止细胞由G1/G0期向S期和G2/M期移行并诱导细胞凋亡,其诱导HO-8910细胞凋亡的机制可能与上调促调亡蛋白p53表达和下调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达有关。1.1.7阿霉素对gbc-sd细胞生存率和平均抑癌浓度值的影响王力等发现槲皮素对先天性多药耐药胆囊癌细胞株GBC-SD多药耐药性(MDR)具有逆转作用,研究分别以10个浓度阿霉素(3.33~33.28μg/mL)及其与不同浓度槲皮素(0.1、0.05、0.025μmol/L)混合液培养GBC-SD,观察细胞生存率及半数抑癌浓度值(IC50)。结果发现单用阿霉素培养时IC50为16.65μg/mL,细胞生存率分别为80.58%~26.18%。加用槲皮素培养后IC50分别为6.66、9.99和13.32μg/mL,两两比较,P均<0.05,且均显著低于单用阿霉素者(P均<0.05);细胞生存率均显著低于单用阿霉素者,且逆转能力呈浓度依赖性。1.2体外ldl和cu2+诱导体外氧化修饰时间效应自由基是生物体内的正常代谢产物,当体内自由基过量和失衡时,则可能导致衰老、炎症、癌症和心脑血管疾病等。实验证明,黄酮类化合物对自由基、超氧阴离子均有良好的清除作用。槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。刘瑞等通过一次性密度梯度超速离心法分离人血清LDL,并在其中分别加入5.0μmol/L槲皮素、芦丁及葛根素与LDL温育3h,然后利用Cu2+介导体外氧化修饰脂蛋白的方法,观察LDL氧化修饰不同时间,其A234,相对电泳迁移率(REM),硫代巴比妥酸反应物质(TSARS)及载脂蛋白羰基含量的动力学改变,并与对照组比较。结果发现槲皮素、芦丁及葛根素均可抑制Cu2+诱导的LDL的氧化修饰,且槲皮素的抗氧化作用较芦丁及葛根素强。赵丽婷在研究饲料补充槲皮素对大鼠外周血抗氧化体系的影响时发现,经饲料补充槲皮素后,不仅可显著提高动物外周血抗氧化力,而且尚有节约保护维生素C和维生素E的作用,表明槲皮素经肠吸收后在体内可直接或间接地发挥抗氧化作用。1.3槲皮素和中性红细胞槲皮素具有抗氧化作用,可防治氧化应激诱导的细胞损伤、槲皮素可有效抑制环氧化酶2促进子的转录活性,后者能催化花生四烯酸生成前列腺素类(PGs)等致炎物质,刺激细胞增殖。槲皮素具有一定抗炎活性,其抗炎作用与其强氧化作用有关。通过体内代谢,槲皮素生成的代谢产物,在抗炎作用方面有着重要的活性。中性粒细胞是机体早期炎症反应中最重要的炎症细胞,它在炎症反应中处于核心位置。炎症部位老化的中性粒细胞通过自发性凋亡的形式逐渐丧失其生物学功能,最终被周围吞噬细胞吞噬清除掉。槲皮素对中性粒细胞自发性凋亡无明显的影响,然而它可以抑制由炎症因子LPS所引起的中性粒细胞自发性凋亡的延迟;同时槲皮素也降低中性粒细胞对炎症因子的敏感性,从而达到抗炎的目的。1.4种抗菌药物抗菌效果秦晓蓉等以大肠杆菌、金黄色葡萄球茵等为实验菌株,采用药敏纸片法考察槲皮素的抗菌活性。结果表明槲皮素对金黄色葡萄球菌的抗菌效果最好,最低杀菌浓度小于0.0061μmol/mL;对胶质芽孢杆菌抗菌效果次之,最低抑菌浓度小于0.0061μmol/mL;对大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌也有较为明显的抗菌效果,最低抑菌浓度分别为0.0242、0.0061、0.0485、0.0121μmol/mL;最低杀菌浓度分别为1.5522、6.2086、3.1043、1.5522μmol/mL;对人仓白杆菌无抗菌效果。槲皮素具有广谱抗菌性,并且对革兰氏阴性菌的抗菌作用强于革兰氏阳性菌。1.5对鸡皮素的作用在研究槲皮素对豚鼠表皮中黑素细胞的影响时,朱宇等发现用槲皮素乙醇提取液外涂豚鼠背部皮肤并予红外线照射,并于5周后对涂药皮肤和对照皮肤进行活检,用不同的染色方法分别制备病理切片,豚鼠表皮外用槲皮素后黑素细胞数目明显增加,槲皮素实验组多巴阳性黑素细胞数及含黑素颗粒细胞数均较空白对照组显著增多,与阳性对照组8-甲氧补骨脂素差异无显著性,槲皮素对棕黄色豚鼠背部皮肤有增色作用,具有促进黑素细胞增殖和黑素合成的功能。除此之外,槲皮素还可在mRNA水平干扰了胶原蛋白的转录,并联合放射线显著减少体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原合成。因此,槲皮素有可能成为新的瘢痕疙瘩治疗药物,与放疗联合应用,可减少放疗剂量,从而减轻放疗对正常皮肤损害。1.6对心肌细胞的影响吴扬等通过建立血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞肥大模型,观察槲皮素对心肌细胞肥大的防治作用及该作用与氧化应激的关系和对血管紧张素Ⅱ诱导肥大的心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶通路不同信号转导途径和原癌基因c-fos表达的影响,结果发现槲皮素能明显抑制血管紧张素Ⅱ引起的心肌细胞总蛋白质含量的增加,可显著提高SOD活性,降低MDA含量,而血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞p-ERK1/2、p-JNK和p-P38表达明显增强,对心肌细胞肥大有明显的防治作用。槲皮素还对多种抗生素所致的大鼠心肌细胞损伤有保护作用,槲皮素可拮抗使用抗生素如阿霉素所导致的小鼠心律失常和心肌超微结构损伤;NO、iNOS、MDA和LDH的水平升高,SOD的水平降低;p53蛋白表达增强等引起的变化。MachhaAjay等发现槲皮素能增强自发性高血压大鼠(SHR)离体主动脉环对乙酰胆碱的舒张效应和降低对苯肾上腺素(PE)的收缩效应,具有比维生素C更好的内皮依赖性舒血管作用。ChiemiKamada等对新西兰白兔喂以胆固醇饮食,发现槲皮素不但能降低高脂血症,还能减少硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)和过氧化胆固醇酯(CEOOH)的含量。1.7槲皮素对k-ras基因连锁的抑制作用槲皮素具有多种生物学活性,除具有以上的药理作用外,还具有降糖、止泻、抗病毒、抗血栓、抗肥胖、抗抑郁等作用。王莉娟等通过探讨抑郁症的病理机制发现以槲皮素预处理人支气管上皮细胞16h后,以香烟烟雾提取物(CSE)刺激不同时间,倒置显微镜下观察细胞形态,以MTT法及Westernblot分别检测细胞活力和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达,发现槲皮素可明显减少CSE诱导的Beas-2b细胞死亡,并对CSE处理后细胞活力的降低具有明显的抑制作用,其机制可能是通过提高细胞中CSE诱导的HO-1蛋白表达水平。2脉冲场质谱测量目前槲皮素的测定方法主要有:高效液相色谱法、毛细管电泳法、荧光光度法、薄层扫描法、脉冲极谱、示波极谱法等。其中,高效液相色谱法与毛细管电泳法由于其高效准确普遍的优点,被广泛应用于各类药材中槲皮素的含量测定。2.1不同药物中槲皮素含量的检测以HPLC法进行各类含槲皮素药材的含量检测时,固定相常选用C18色谱柱,流动相常选用含有酸的甲醇-水或乙腈-水系统,检测波长常选择在358~372nm之间。梁臣艳等建立的HPLC法测定广西余甘子叶中槲皮素含量测定的方法中,采用ThermoHypersilODSC18柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸(30:70)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为371nm,柱温30℃,线性范围为0.1196~0.5980μg。顾瑶华在研究不同生长期及不同药用部位槲皮素含量时,采用了高效液相色谱法,流动相为乙腈-0.35%三氟乙酸(33:67),检测波长为370nm,柱温为30℃,流速为0.8mL/min。结果表明在0.1992~l.992g范围内,槲皮素线性关系良好。杨玲娟等建立HPLC法测定旋复花中槲皮素含量的方法,采用ZORBAXeclipseXDBC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(65:35),检测波长为370nm。线性范围为5.0~100.0μg/mL。平均加样回收率为97.1%,可用该成分的质量控制。2.2最佳条件确定HPCE法是样品中各组分以高压电场为驱动力,在毛细管中按其淌度和分配系数不同进行高效快速分离分析的一种新技术。刘菁等采用高效毛细管电泳法对绞股蓝中的有效成分芦丁和槲皮素同时进行含量测定。采用未涂层熔融石英毛细管柱(57cm×75μm,有效长度50cm)为分离通道,以12mmoI/L硼砂-甲醇(80:20)为电泳介质,分离电压30kV,毛细管温度30℃,捡测波长360nm。结果显示芦丁和槲皮素在20min内得到很好的分离,分别在0.054~1.070、0.009~0.180mg/mL与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为99.0%、98.8%。王敬鹏等采用毛细管电泳-化学发光法测定槐米中芦丁和槲皮素的含量,电泳缓冲溶液为20mmol/L硼砂-硼酸缓冲溶液(pH9.0);进样电压18kV;进样时间为10s;分离电压18kV;毛细管规格55cm×75μmi.d.,毛细管使用前用0.10mol/LNaOH溶液、水和电泳缓冲溶液各清洗10min,每次电泳后分别用水、0.10mol/LNaOH溶液、水和电泳缓冲溶液清洗5min,以保持迁移时间和峰面积良好的重现性。在选定的最佳条件下,槲皮素的线性范围为0.050~0.600g/L。陈兴国等、建立了反向迁移胶束毛细管电泳法同时分离测定鱼腥草和山楂果实中槲皮素、芸香苷和绿原酸的新方法。运行缓冲溶液为70mmol/L十二烷基硫酸钠和30mmol/LNaH2PO4溶液(pH2