核酸化学-核酸的提取、分离和含量测定

DNA的粗提取与鉴定1.

NaCl的物质的量浓度为0.14mol／L时,DNA的溶解度最低。2.DNA不溶于酒精溶液。3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。1、胀破细胞，得DNA溶液（1）鸡血细胞液5-10ml，加入蒸馏水20ml，使血细胞加速破裂，过滤，取其滤液。(2)溶解细胞核内的DNA

将物质的量浓度为2mol/l的氯化钠溶液40ml加入到滤液中，搅拌使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。2、析出含DNA的黏稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时轻轻搅拌，这时会有丝状物出现，随着蒸馏水的加入逐渐增多，一直到氯化钠浓度约为0.14mol/l时，不再继续增加。实验步骤3、第二次析出DNA的黏稠物（1）所得DNA加入2mol/l的氯化钠溶液20ml，使其溶解。（2）过滤，取其滤液，DNA溶于滤液中（3）加入冷却的酒精溶液50ml，溶液中出现杂质较少的丝状物，它的主要成分就是DNA。DNA的鉴定

用二苯胺（沸水浴）鉴定，DNA遇二苯胺会变蓝色。两次加入蒸馏水的作用一样吗？DNA的直径约为2nm，实验中出现的丝状物的粗细是否就表示一个DNA分子直径的大小？1、DNA分子结构主要特点DNA分子是有

条链组成，

盘旋成

结构。

交替连接，排列在外侧，构成基本骨架；

排列在内侧。碱基通过

连接成碱基对，并遵循

原则。反向平行双螺旋脱氧核糖和磷酸碱基对氢键碱基互补配对2二、DNA模型分析2、DNA的多样性AAATTTGGGGCCCATCDNA分子结构主要特点AAATTTGGGGCCCATC两条长链上的脱氧核糖与磷酸交替排列的顺序是稳定不变的。长链中的碱基对的排列顺序是千变万化的。两条长链上的脱氧核糖与磷酸交替排列的顺序是稳定不变的。长链中的碱基对的排列顺序是千变万化的。DNA分子的特异性就体现在特定的碱基（对）排列顺序中。

思考：研究表明：DNA结构的稳定性与四种碱基的含量有关：G和C的含量越多，DNA的结构就越稳定。基本骨架为磷酸和脱氧核糖交替排列；两链反向平行；有两个游离的磷酸基团；具有稳定性、多样性、特异性二、核酸的组成成分核酸nucleicacid核苷酸nucleotide核苷nucleoside磷酸phosphate嘌呤碱purinebase或嘧啶碱pyrimidinebase（碱基base）核糖ribose

或脱氧核糖deoxyribose

（戊糖amylsugar）

组成核酸的戊糖有两种。DNA所含的糖为β-D-2-脱氧核糖；RNA所含的糖则为β-D-核糖。（一）戊糖PentoseRiboseDeoxyribose（二）碱基（Base）核酸中的碱基分为两类：嘌呤碱：腺嘌呤A、鸟嘌呤G

嘧啶碱：胞嘧啶C、胸腺嘧啶T、尿嘧啶U

嘌呤（Purine）123456978腺嘌呤AdenineA鸟嘌呤guanineG

嘧啶（Pyrimidine）123456尿嘧啶uracilU胞嘧啶cytosineC胸腺嘧啶thymineTDNA中的四种碱基及它们间的氢键胞嘧啶胸腺嘧啶鸟嘌呤腺嘌呤TCAG－CH3RNA分子中的四个碱基腺嘌呤A、鸟嘌呤G、胞嘧啶C、尿嘧啶U稀有碱基：又叫微量碱基或修饰碱基，是主要碱基的衍生物。如次黄嘌呤、1-甲基次黄嘌呤、二氢尿嘧啶。（三）磷酸

OOO‖‖解离 ‖HO—P—OHHO—P—

—P—O－

|||OHOHO－磷酸磷酰基（四）核苷戊糖与碱基结合物nucleoside

1、核苷的形成

核苷由戊糖和碱基缩合而成，嘌呤的N9或嘧啶的N1与戊糖C-1’-OH以C-N糖苷键相连接。dANNNNNH2OHHOHOCH2HHHH9NONOOHOCH2HHHHOHOHU1核苷戊糖+碱基

糖与碱基之间的C-N键，称为C-N糖苷键1’2’3’4’5’(OH)1’2’3’4’5’(OH)

核苷OHOH2COHOHOH1′2′3′4′5′核糖NNNNHHHH9腺嘌呤腺苷

AGCU

dAdGdCdT核酸长链记录方式之演进PRB3’2’5’1’ATCGATCGPOH5’3’5’

pApTpCpGpApTpCpG-OH

3’5’

pATCGATCG-OH

3’ATCGATCGDNA一级结构的表示方法：（1）结构式表示法：（2）线条式表示法：（3）字母式表示法：书与文献中（五）核苷酸(nucleotide)——

核苷与磷酸结合物

1、核苷酸是形成核酸大分子的基本单元。可以将核苷酸看作核苷的磷酸酯。HHHHHHHHHAMPdAMP2、核糖分子中除了C1

位—OH成苷外，还有C2、C3和C5

位三个自由羟基，可以分别生成相应位的核苷酸。脱氧核糖分子中除了C1

位—OH成苷外，则只有C3和C5位两个自由羟基，能分别生成相应位核苷酸。

RiboseDeoxyribose2’，3’，5’一核糖核苷酸(2´-AMP)(3´-AMP)(5´-AMP)3’，5’一脱氧核糖核苷酸Deoxyadenosine3’-monphosphate(3’-dAMP)Deoxyadenosine5’-monphosphate(5’-dAMP)脱氧（核糖）核苷酸（deoxyribonucleotide）：

3、核苷酸的名称

某苷—（酯化位）—磷酸或（酯化位）—某苷酸如：腺苷-（5′）-磷酸或（5′）—腺苷酸

4、核苷酸的代号一般以核苷号加“MP”形成，如5′—AMP。常见核苷酸多为5′—核苷酸，通常不写出酯化位置（5′略去）。如5′—AMP写成AMP。

DNA和RNA分别有四种基本核苷酸。

二、DNA的二级结构