生物制品的生产基础-生物制品生产基本技术

项目三

灭活剂、佐剂和保护剂

（inactivation、protector、adjuvant）任务一

灭活剂灭活是生物制品中的一项非常基本技术！！！提高生物制品的安全性防止病原体扩散一、灭活与灭活剂（一）什么是灭活？微生物学意义上灭活有两层含义：1、是指破坏或杀死微生物使其成为没有生命物质的过程。2、生物制品上的灭活还有灭能的含义，是指将一些活性物质（微生物及其代谢产物、激素、酶、血清因子和抗体等）丧失活力的过程。例如：经过56度加热30分钟处理，可破坏诊断血清和待检血清中的补体活性，从而避免补体对诊断的干扰作用。生物制品意义上灭活的含义：是利用物理或化学的方法，破坏微生物的生物学活性，破坏病原微生物的繁殖能力和致病能力，但仍然保留反应原性和免疫原性的过程。（二）灭活的类型按照灭活作用的性质可分为两类：1.物理灭活2.化学灭活1、物理灭活热灭活：容易发生菌体蛋白质变性超声波灭活：应放在冰浴中间断进行紫外线灭活：不够好射线照射灭活：根据被照射物的容量大小选择照射距离和照射强度。1Gy（戈瑞）就是lkg物质吸收lJ（焦尔）的能量50～150Gy是抑制发芽的照射剂量；100～1500Gy是杀死害虫的照射剂量；1～5kGy是抑制部分微生物的照射剂量；3～7kGy是脱水蔬菜的照射剂量；15～60kGy是辐射完全杀菌的照射剂量2、化学灭活利用化学药品等使微生物、活性物质的某些某些结构位点发生改变，从而丧失生命力、感染性、毒性或活性。效能常受灭火剂种类、剂量和作用温度、pH、时间等因素的影响，使用时必须筛选最佳的灭活条件。方法简单、效果确实、最为常用。（三）灭活剂用于灭活微生物的化学试剂或药物1911年，LowensteinDH用甲醛处理破伤风毒素而制成类毒素1924年，Puntoni以苯酚或甲醛处理制成犬瘟灭活苗1934年，MorionDorset等用结晶紫灭活猪瘟病毒制成猪瘟结晶紫疫苗。是最古典、使用最广泛的灭活剂《兽医生物制品制造及检验规程》（2000）中的26种灭活疫苗，均以甲醛作为灭火剂。二、常用灭活剂的灭活机理与应用1、甲醛甲醛的水溶液——福尔马林(含甲醛36~40%)

灭活机理：还原作用

氨基甲基胺

羧基亚甲基二醇单酯

巯基亚甲基二醇

甲醛醛基

羟基羟基甲酚灭活浓度：需氧细菌0.1％～0.2％，厌氧细菌0.4％～0.5％，病毒0.05％～0.4％。

灭活原则：低浓度、短时间而又能达到彻底灭活目的。必要时可在灭活后加入焦亚硫酸钠，以中断其反应。N-乙酰乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI)、缩水甘油醛（GDA）灭活机制：

1.烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂或双螺旋链交联，因改变DNA的结构而破坏其功能，妨碍RNA的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。

2.与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。2.烷化剂（Alkylatingagent）优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而不损害其蛋白衣壳，保留其保护性抗原。

（1）N-乙酰乙烯亚胺（AEI）淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。0～4℃可保存1年，在-20℃可保存2年。AEI功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。口蹄疫病毒液:终浓度0.05％，30℃8h,加2％硫代硫酸钠阻断（2）二乙烯亚胺（BEI）市购商品为0.2％的BEI溶液，在0～4℃可保存1个月;口蹄疫病毒悬液：终浓度0.02%,加入2％硫代硫酸钠中断灭活。大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。0～4℃保存3个月后含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存10d。

（3）缩水甘油醛（GDA）由口蹄疫病毒所引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。主要侵害偶蹄兽，偶见于人和其他动物。其临诊特征为口腔粘膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱。3.苯酚又称石碳酸。有腐蚀性，而且有毒！易溶于水及有机溶剂。灭活机制：使微生物蛋白质变性和抑制如脱氨酶、氧化酶等酶系统的活性，从而导致微生物死亡。通常：生物制品的常用量为0.3%-0.5%,另外，芽孢、真菌和病毒对苯酚的耐受性很强。4.结晶紫是甲基紫、龙胆紫的纯品。灭活机制：是结晶紫阳离子与微生物蛋白质带阴性电荷的羧基形成弱电离的化合物，从而干扰微生物正常代谢和氧化还原作用，主要干扰细胞壁肽聚糖的合成，导致革兰氏阳性菌生长繁殖受阻。5.β-丙内酯又名丙内酯。灭活机制：破坏病毒的核酸芯，但不损坏衣壳蛋白，因此保护性抗原成分得以保留，主要用于狂犬病灭活苗的制备。然而研究表明，丙内酯是一种潜在的致癌因子。6.硫柳汞常用做生物制品的防霉和消毒剂，对霉菌、细菌和病毒都有一定的灭活作用，百日咳菌苗作为灭活剂。常用浓度为0.01%-0.02%。1、灭活剂特异性：如石炭酸对真菌和病毒效果差，但对细菌效果好。结晶紫能杀死多种革兰氏阳性菌和阴性菌，但对绿脓杆菌和细胞芽孢作用弱。2、微生物种类和特性：三、影响灭活作用的因素3、灭活剂浓度（一定要适合）4、灭活温度：通常同一浓度的灭活剂在不同温度的灭活速度与温度成正比，但温度太高，对微生物的抗原性将有不利影响。（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和温度不一致）。5、灭活时间：一般采用低浓度、低温和短时间处理为最佳。6、灭活pH值：7、微生物含氮量：一般微生物或毒素的总氮量和氨基氮含量越高，灭活剂的消耗量就越大、灭活脱毒越慢。8、有机物存在：任务二

佐剂佐剂是免疫学和生物制品学中的一个重要内容对增强机体对抗原的免疫应答，提高生物制品的免疫效应发挥着重要作用什么是“佐剂”呢？1.佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物质均称为佐剂。

佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质。也称免疫佐剂、抗原佐剂。一、佐剂概念与作用特点①明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生特异性免疫应答。②用最少的抗原和最少的接种次数，产生足够的免疫应答。作用特点：二、研究历史1、起始阶段1916年Moignar最早用羊毛脂与石蜡油制成伤寒沙门氏菌乳剂苗；继后Prevet用羊毛脂加琼脂为佐剂制出炭疽菌苗。1925年，GastonRamon证明了明矾的佐剂作用。2、1950年代为提高兽医生物制品的免疫效果，在兽医领域对佐剂进行了广泛的研究。用氢氧化铝胶吸附再加油佐剂制成的猪丹毒菌苗，免疫乳猪后的免疫力可持续9个月，比铝胶佐剂苗提高1倍。3、1960年代以后矿物油佐剂的研究发展迅速布氏杆菌油佐剂苗（1966）魏氏梭菌油佐剂苗（1966）流感油乳剂苗（1977））禽支原体+新城疫油乳剂二联（1978）链球菌+葡萄球菌乳剂二联苗（1984）4、我国的佐剂的研究佐剂的研究和佐剂苗的生产，始于1950年代。1958年曾用羊毛脂和液体石蜡油制造猪丹毒油乳剂苗，但效果不理想。1980年代以来，对白油佐剂的研究和应用发展极快，尤以禽病白油佐剂疫苗的种类更多，使用效果也比较满意。各种佐剂的作用机理不尽相同，但概括起来有如下方面1．对抗原的作用

(1)增加抗原分子的表面积某些佐剂颗粒表面可以吸附许多抗原，使抗原表面积明显增加，特别是可溶性抗原或半抗原，经胶体颗粒吸附后，抗原性增强，抗体滴度明显提高。(2)延长抗原在体内的存留时间

抗原与某些佐剂混合后形成凝胶状，延长抗原在体内的贮存时间，使其徐徐释放，因而提高抗原物质的免疫原性。三、免疫佐剂作用条件2．对机体的作用对单核巨噬细胞的作用

佐剂能引起细胞浸润，出现巨噬细胞、淋巴细胞及浆细胞聚集，促进这些细胞增殖发挥更大作用。有些佐剂，如短小棒状杆菌、百日咳杆菌和葡聚糖等，主要作用于巨噬细胞，使之激活，大量增殖分化，释放白细胞介素-1等细胞因子，再去活化T细胞和B细胞。被激活的T细胞进一步分泌各种细胞因子，进而促进B细胞和巨噬细胞功能。

对T细胞的作用

一些佐剂的主要作用对象是T细胞，通过T细胞的介导，增强各种免疫功能。胸腺素、分枝杆菌及其有关成分如卡介苗及MDP等、香菇多糖、异丙肌昔、左旋咪吐、二乙胺基二硫代甲酸钠（DTC）等均为T细胞增强剂。它们作用于胸腺细胞系统，诱导T细胞前体细胞的产生，T细胞大量增殖分化，形成效应淋巴细胞，产生淋巴因子。

B细胞的作用

某些佐剂可以直接作用于B细胞，如细菌脂多糖，以B细胞为主要靶细胞，使之多克隆增殖，并诱导B细胞对T细胞的敏感性，从而增强对TD抗原的免疫应答，提高抗体水平。非特异性免疫增强作用

佐剂效应，除加强抗原引起免疫应答能力以外，还能对各种感染和肿瘤具有非特异性免疫增强作用，主要是加强NK细胞和K细胞的活性。这种非特异性的免疫作用，至少有一部分是通过诱导干扰素生成而造成的。香菇多糖、葡聚糖、云芝多糖、果聚糖等多糖在体内都能诱生干扰素。①抗原递呈（antigenpresentation）②抗原寻的（antigentargeting）③免疫调节（immunemodulation）

作用机理①抗原递呈：指抗原分子递呈给T细胞的方法。佐剂与疫苗联合使用，有助于抗原性物质在胞内被加工，被MHC分子特异性的结合、保护、运输并递呈给效应细胞。②抗原寻的（antigentargeting）指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原与细胞受体的结合等。③免疫调节（immunemodulation）

是指任何可以修饰的免疫效应细胞对抗原或表位进行加工的机制。通过这种机制，可以改变特异性免疫应答的本质或强度。T细胞有Th1和Th2两个亚类。同一抗原和不同佐剂一起使用能够引起不同的免疫反应。因此，通过筛选特定的佐剂，可以达到诱导正确的免疫应答的目的。WHO认为佐剂除具有免疫增强效应外，尚必须具备下列标准，否则不得用作佐剂。四、佐剂标准1、无致癌或辅助致癌性不能诱导或促进肿瘤形成。2、安全无毒性通过肌肉、皮下、静脉、腹腔、滴鼻、口服等各种途径进入动物体后无任何副作用。3、纯度高、杂质少杂质往往是副作用的诱发物。因此，佐剂必需符合质量标准。4、应有一定的吸附力最好吸附力强5、在动物体内易降解不宜长时期留存而诱发组织损伤6、不含与动物有交叉的抗原以避免诱发自身免疫反应，防止发生自身免疫性疾病。7、不应诱发自身超敏性也不应与抗体结合形成有害的免疫复合物。8、应性质稳定佐剂抗原混合物储存1年以上，必须不分解、不变质和不产生不良物质。1.按佐剂物理性质颗粒型佐剂非颗粒型佐剂2.按佐剂的生物学性质（即Ballanti分类法）微生物及其组分佐剂非微生物物质佐剂3.按佐剂在体内存留的时间贮存型佐剂（depottypeadjuvant）非贮存型佐剂（non-depottypeadjuvant）五、佐剂的分类佐剂分类—物理性质分（一）颗粒性佐剂

1.盐类佐剂

2.油水乳剂佐剂

3.免疫刺激复合物佐剂

4.蜂胶佐剂

5.脂质体佐剂

6.其他

（二）非颗粒性佐剂

1.肽类佐剂：如胞壁酰二肽（MDP)及其延伸物、免疫调节多肽。

2.表面活性分子类佐剂：如非离子阻断共聚物表面活性剂等

3.核酸及其衍生物类佐剂：如合成核苷酸聚合体、CpG寡聚脱氧核苷酸等。

4.含硫复合物类佐剂：如左旋咪唑。

5.碳水化合物高分子类佐剂：如香菇多糖、DEAE葡聚糖。

6.细胞因子类佐剂：白介素、干扰素

7.脂质分子佐剂：如脂多糖。

8.其他：包括一些蛋白毒素如霍乱毒素、百日咳毒素等。根据佐剂的性质分类—是否微生物来源

(1)微生物及其组分微生物微生物如有结核杆菌、卡介苗、短小棒状杆菌、沙门氏菌、乳杆菌、双岐杆菌、葡萄球菌、链球菌、副粘病毒及细小病毒等。微生物组分：如有分枝杆菌细胞壁的胞壁酰二肽、乳酸菌及粪链球菌的细胞壁肽聚精、短小榨状杆菌的细胞壁骨架成分、耻垢分枝杆菌等提取的水溶性佐剂、分枝杆菌提取的高分子多肽糖酯(即腊质I)、革兰氏阴性菌的脂多糖、肺炎杆菌的糖蛋白、酵母菌提取的酵母多糖及香菇的香菇多糖等。(2)非微生物物质A.高分子物质例如DNA、RNA、聚丙烯酸、聚乙烯吡啶烷酮。B.低分子物质例如硫酸铝、氢氧化铝、磷酸钙、钾明矾等。C.油类包括矿物油(如白油)、植物油(如花生油)等。D.药物类例如吡喃、丙胺肌苷、左旋嘧啶等。E.中草药类如冬虫夏草、天麻、黄芪、苦参等也有佐剂作用。F.表面活性剂能降低液体表面张力的物质，包括：①阴离子表面活性剂，如硬酯酸铝、单硬酯酸甘油酯等；②阳离于表面活性剂，如十二烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十八烷基酪氨酸盐酸盐等；③非离子性表面沽性剂，如Span-80、Span-85、Tween-80等。

根据佐剂在体内存留时间分类

(1)贮存型佐剂（depottypeadjuvant）佐剂与抗原混合成悬浊状态，使其尽可能存留于注射局部较长时间，以使抗原缓慢地释放，持续刺激机体免疫系统，使之产生较强免疫应答。(2)非贮存型佐剂（non-depottypeadjuvant）多属细胞毒性物质，又称为细胞毒型佐剂(cytotoxictypeadjuvant)。这类佐剂不同抗原混合，两者在相互隔开的部位分别注射也可出现效果。非贮存型佐剂又可分为生物佐剂和非生物佐剂两类。六、常见的兽用免疫佐剂1、矿物质类佐剂矿物质佐剂是传统佐剂中的一类。

在兽用疫苗的制备中广泛使用。氢氧化铝胶磷酸铝胶不溶性盐类胶体佐剂

疫苗中的灭活苗和类毒素，需用佐剂来加强它的免疫效应，铝佐剂是最常用的佐剂之一。它们性质稳定，便于贮存，接种后只在局部产生小的肉芽肿，对肉的品质没有严重影响。

这些佐剂的作用机理是：将佐剂与抗原混合，形成凝胶状态，注入动物体内后形成“抗原贮存库”，这些不溶性颗粒能吸附、分散抗原物质，增加抗原表面积，在组织中形成一个富含巨噬细胞的肉芽肿，延缓吸收。此外，铝化合物能激活补体，引起过敏毒素的产生，在注射部位形成慢性炎症，并可在记忆性B细胞产生过程中起促进作用，促进体液免疫。特点

•主要诱导体液免疫应答，可刺激机体迅速产生持久的高抗体水平。•比较安全。缺点

•皮下注射时常有肿胀或结块；•不能有效刺激保护性T细胞免疫。

1.氢氧化铝胶佐剂

取5%硫酸铝溶液250ml，在强烈搅拌下加入5%氢氧化钠溶液100ml，用生理盐水离心洗涤沉淀2次，再悬入生理盐水中使达250ml。免疫接种时，取适量氢氧化铝佐剂加等体积抗原即可免疫。铝盐佐剂主要促进体液免疫应答，而对细胞免疫应答几乎无作用，适用于以抗体提供保护性免疫的疾病疫苗。（猪细小病毒、传染性牛鼻气管炎病毒）2.明矾佐剂

钾铝矾(硫酸铝钾)在一定pH条件下产生氢氧化铝胶体吸附抗原而产生佐剂效应。制备方法是用生理盐水溶解蛋白质抗原，在搅拌下缓慢滴入一定量1%硫酸铝钾溶液，用NaOH调pH到6．5，此时溶液变成乳状悬液，离心后去掉上清液，沉淀用生理盐水洗涤二次，加入硫柳汞防腐，4℃保存备用。明矾佐剂的疫苗一般用于肌肉注射，皮下注射容易引起肉芽肿和脓肿。

3.磷酸三钙佐剂2、油类佐剂主要有弗氏佐剂弗氏不完全佐剂弗氏完全佐剂白油佐剂是指一类由油类物质、水溶液和乳化剂按一定比例混合形成的佐剂。该类佐剂主要在抗原寻的过程中起作用，使抗原在注射部位保持稳定，为抗原在淋巴系统中转运提供载体，增加单核细胞的形成和积聚。油乳剂疫苗的免疫效力高低，直接与乳化作用的好坏及油、乳化剂质量有关。

油乳佐剂一种液体或粉末微粒（分散相或内相）借助乳化剂、机械力的作用，分散悬浮于另一种不相溶的液体（连续相或外相）中从而形成稳定的分散体系。油乳佐剂原理乳化剂

指油乳剂中内相与外相间的界面活性物质，具有促进和稳定两种互不相溶物形成乳剂。如羊毛脂、Span-80、Arlacel-80、Tween-80、AtlsG-1471等。乳化剂种类：①

天然乳化剂：多来源于动植物，如阿拉伯胶、海藻酸钠、卵黄、炼乳等。②

合成乳化剂：如阴离子型的碱肥皂、月桂酸钠、十二烷基磺酸钠、硬脂酸等，多用于一般药剂乳化；阳离子型的氯化苯甲烃铵、溴化十六烷三甲基铵、氯化十六烷铵代毗啶等，多用于油乳佐剂；非离子型的多元醇或聚合多元醇的脂肪酸脂类、醚类物，如月桂酸聚甘油脂、山梨醇酯、单油酸酯等，均具有一定的亲水性和亲油性基，多用于医药，化妆品乳化。

乳化剂的选择

通常可根据用途依据乳化剂的HLB值（亲水亲油平衡值）进行选择。乳化剂的HLB值与其在水中的溶解度相关，亲水性强的在水中溶解度大，HLB值高，容易形成水包油型油乳剂。

HLB值为4-6的乳化剂，适用于制造W/O型油乳剂；HLB值为8-18的乳化剂，适用于制造O/W型油乳剂。常用的司本80，HLB为4.3，在水中溶解度低，不易在水中分散，溶于多种有机溶剂，性质稳定，易形成W/O型油乳剂；而吐温80，其HLB为15.0，易形成O/W型油乳剂。乳化原理降低分散物的表面张力，在微滴表面上形成薄膜或双片层，以阻止微滴(粒)的相互凝结。分为单相乳化佐剂双相乳化佐剂单相乳化佐剂（1）油包水（

W/O）较粘稠，在机体内不易分散；但佐剂活性优良，为生物制品所采用的主要剂型（2）水包油（O/W）较稀薄，在机体内易于分散；但佐剂活性很低，生物制品中不采用。双相乳化佐剂又分为水包油包水和油包水包油型粘度小，注射局部反应轻微，易吸收和佐剂效应高弗氏不完全佐剂

是由低引力和低粘度的矿物油及乳化剂组成的一种贮藏型佐剂。弗氏完全佐剂在不完全佐剂的基础上加一定量的分枝杆菌或卡介苗而成。虽然具有一定的副作用，但其佐剂活性是其它物质难于相比的。弗氏佐剂的特点可使在正常状态下缺乏免疫原性的物质成为免疫原。先作用于Th1细胞，后是Th2细胞，并能启动细胞免疫而发挥作用。国外常用白油：Drakocel-6VR、Marcol-52和Lipolul-4国内常用白油：7号或10号白油质量标准:

无色无味；

50℃运动粘度7m2／s左右；紫外吸收值（250-350）＜0.1％，紫外消光系数＜12×108；单环芳烃与双环芳烃含量低于0.5％，无多环芳烃；小鼠腹腔注射0.5ml观察160d或家免皮下注射2.0ml白油观察60d，表现正常。白油佐剂（1）剂在水中法：将乳化剂直接溶于水中，在激烈搅拌下将油加入，可直接生成O/W乳剂。若欲得W/O型，可继续加入油，直到发生变型。该法通常用匀浆器或胶体磨，高速搅拌而得到较好的乳剂。油乳佐剂乳化方法（2）剂在油中法：将乳化剂溶于油相，将油相直接加入水相中得O/W，如水相直接加入油相，得到W/O型，如欲得O/W，继续加入至变型。该法制成的乳剂，一般均匀颗粒直径在0.5µm左右，比较稳定。免疫实验动物用的佐剂配制:

(1)弗氏佐剂：矿物油75%~85％，乳化剂15％~25%，混合后经除菌过滤而成为FIA；如向其中加入0.5mg／m1死结核杆菌即为FCA。使用时，将含抗原的水相，与上述任一佐剂等量混合，用力振摇即可成为均匀的乳剂。(2)白油佐剂：9份油和1份Span-80混合后加2％Tween-80和1％~2%硬脂酸铝，经高压灭菌后备用，注射前将配好的油佐剂与抗原水相1：1混合，强力振摇，可配制成性状良好的乳剂疫苗。（1）粘度测定：流出法、Saybolt粘度计法吸管内口直径为1.2mm，室温下吸满lml乳剂，垂直放出0.4ml所需时间作为粘度单位。以2-6S为合格，不得多于10-15S。（2）乳剂稳定性测定：①加速老化法：疫苗于37℃贮存10-30d不破乳。②离心加速分层法：于半径10cm离心管装油乳剂，3000rpm离心15min不分层，相当于保存1年以上不破乳。油乳佐剂检验3、蜂胶佐剂

是一种优良的天然药物；具有广泛的生物活性和药理作用（抗菌、抗病毒、抗肿瘤、消炎）；具有免疫增强作用：能保持抗原特性，增强巨噬细胞的吞噬能力，促进抗体的产生，提高机体的特异性和非特异性免疫力。

（1）蜂胶的处理：蜂胶（4℃以下贮存）粉碎过筛按1：4（W/V）加95％乙醇室温浸泡24～48h冷却过滤或离心取上清透明栗色纯净蜂胶浸液4℃以下保存备用除去干渣计算出浸液中含蜂胶量。（2）蜂胶佐剂疫苗的制备：灭活菌液或病毒液，加入蜂胶乙醇浸液，使每毫升菌液中含蜂胶10mg，边加边摇荡，成为乳浊状，即可。蜂胶佐剂疫苗制备方法：1、细胞因子类佐剂

细胞因子的概念

是机体的各种细胞在其生命周期中所释放的具有不同生物学效应的物质，是免疫细胞间相互作用的调节信号。该类物质相互诱生，相互影响，构成一个巨大的细胞因子网络（cytokinenetwork）系统，各种细胞借助自己所释放的细胞因子完成各自的功能，在免疫应答中发挥作用。七、新型佐剂细胞因子的分类（根据生物活性）经典的细胞因子：淋巴毒素（LT）、肿瘤坏死因子（TNF）、干扰素（INF）2.对体液免疫和细胞免疫具有调节作用的因子：白细胞介素（IL）和集落刺激因子（CSF）1．作为免疫佐剂，提高疫苗的免疫效果2．作为免疫治疗剂，预防和治疗某些病原感染3．通过基因重组，构建新型基因工程疫苗

IL-2-AIV-HA重组痘病毒细胞因子的应用几种重要的细胞因子

白细胞介素-2（IL-2）白细胞介素-4（IL-4）白细胞介素-12（IL-12）

γ-干扰素（IFN-γ）2、CpGDNA

CpGDNA：指含有非甲基化CpG（胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸）基序的脱氧核糖核酸DNA。

引起B细胞分化并阻止B细胞的凋亡。直接激活单核细胞、巨噬细胞和树突细胞在IL-12协同下激活NK细胞协同刺激抗原特异性B细胞和T细胞分化

霍乱毒素（CT）大肠杆菌不耐热毒素（LT）破伤风类毒素（TT）3、基因工程减毒素

ISCOM由抗原物质与由皂树皮提取的一种糖苷QuilA和胆固醇按1:1:1混合后自发形成的一种具有较高免疫活性的脂质小泡。

ISCOM直径40nm，每个ISCOM约含10～12分子的蛋白质。

ISCOM应用于多种细菌、病毒和寄生虫病的疫苗，具有产生“全面”免疫应答的效力，可长期增强特异性抗体应答。

ISCOM能有效地通过粘膜给药，从而可以用于抗呼吸道感染。目前，兽用ISCOM疫苗已在国