人参皂苷rb1对抑郁大鼠海马5-h及5-h1a受体的影响

人参皂苷rb1对抑郁大鼠海马5-h及5-h1a受体的影响

抑郁的主要症状是抑郁、抑郁、精神疾病和运动延迟。这是一种慢性和复发的精神疾病，在严重的情况下可伴有自杀。随着人类压力的增加，患有抑郁的人数逐年增加。目前的研究热点之一是对其病机的研究。然而，其发病机制尚不清楚。中医认为,抑郁症是由于情志不舒,肝气郁结,渐致五脏不和,化火、生痰、瘀阻、耗气、伤阴等而致,属“郁证”范畴,因此中医临床上多采用疏肝理气法对其进行治疗。人参主要成分人参皂苷,具有良好的抗抑郁作用。研究表明,人参皂苷活性成分Rb1具有明显的抗抑郁作用。本研究建立抑郁症模型,观察海马5-HT及5-HT1A受体的变化,探讨人参皂苷抗抑郁症作用的理论机制。1材料和试剂1.1动物合格号清洁级健康成年雄性Wistar大鼠45只,体质量180~210g,河北联合大学实验动物中心提供,动物合格证号:SCXK京2009-0004。适应性饲养1周后用于实验。1.2多克隆5-ht1a抗体和westernbro相关试剂人参皂苷Rb1购自中国药品生物制品检定所。兔多克隆5-HT1A抗体购自SantzCruz公司,Westernblo相关试剂购自武汉博士德生物工程有限公司。其它试剂为国产分析纯。2方法2.1垫料、游泳、放养随机将实验动物分为对照组、模型组和治疗组,每组15只。模型组和治疗组给予慢性不可预见性温和应激(CUMS),应激共包括11种:鼠笼45℃倾斜24h,潮湿垫料24h,行为限制24h,4℃冰水游泳5min,42℃热水游泳5min,禁食24h,禁水24h,夹尾1min,鼠笼摇动15min,持续光照36h,天敌声音30min。将上述11种应激随即分配到21天内,每日给予1种应激,每种应激平均出现2次,同种应激不连续出现。对照组除每天抓取1次外,不作其他处理。造模同时,给予治疗组人参皂苷Rb1(40mg/kg),每日灌胃1次(每毫升药液含原生药1g,剂量1ml/100g体质量)。2.2行为测试2.2.1控制血糖偏好配比用糖水和自来水双瓶给实验大鼠供饮,通过测量剥夺饮水2.5h后大鼠1h内的糖水和自来水消耗量,计算糖水偏好百分比(糖水消耗量/总液体消耗×100%)。2.2.2活动情况分析将大鼠置于高架十字迷宫中央区,头朝开臂。通过动物行为视频分析系统记录分析5min内大鼠的活动情况。每只大鼠测试完毕后彻底清理迷宫。检测指标:开臂进入次数百分比和开臂滞留时间百分比。2.2.3学习记忆能力对各组大鼠分别进行定位航行实验,检测其学习记忆能力。从同一入水点将大鼠面向池壁放入水中,记录大鼠找到平台的时间,利用Morris水迷宫软件分析结果。2.3流动相及缓冲剂用量每组取5只大鼠,1%戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔注射麻醉,断头取脑,冰上分离海马组织。加入高氯酸提取液冰浴匀浆后离心,留取上清。取上清20μl进行分析。流动相:缓冲液(50mMKH2PO4)/甲醇(95∶5),缓冲液:3mM庚烷磺酸钠、10mM醋酸钠、85mM柠檬酸、0.2mMEDTA,pH3.7、柱温40℃、波长扫描范围210~370nm、检测波长275nm、流速1.0ml/min。以标准品峰保留时间与样品峰保留时间对照定性,标准品峰面积与内标峰面积比值进行定量分析。2.4sds-东南角电泳三组各取5只大鼠,麻醉后断头取脑,冰上快速分离海马,加入RIPA裂解液,提取组织总蛋白,定量后按照30μg蛋白量上样,进行10%SDS电泳,PVDF膜电转印,脱脂奶粉封闭,5-HT1A一抗(1∶500)4℃孵育过夜,二抗IgG(1∶5000)室温孵育1h,ECL显色。同上进行内参照β-actin的Westenblot分析。以目的条带与内参照的光密度比值表示蛋白表达。2.5统计学处理测量结果以ue0af±s表示,应用SPSS统计分析软件对数据进行单因素方差分析,两两比较采用t检验,P<0.05为差异具有统计学意义。3结果3.1行为实验的结果3.1.1c.9.9%是速度性侵权行为,少对每相线上所做的是表达义务,造成了4.37%是生长方向对照组、模型组和治疗组大鼠糖水偏好百分比分别为(92.49±8.19)%、(57.62±4.91)%和(75.49±5.36)%。模型组和治疗组明显小于对照组(P<0.05)。见表1。3.1.2开臂停留时间配比对照组、模型组和治疗组大鼠进入开臂次数百分比分别为(37.80±2.91)%、(21.30±2.18)%和(28.84±3.23)%,开臂停留时间百分比分别为(28.71±2.29)%、(17.94±2.11)%和(20.38±2.82)%,模型组和治疗组高于对照组,治疗组低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。3.1.3目标函数对照组、模型组和治疗组大鼠平均逃避潜伏期分别为(5.63±1.06)、(20.76±3.24)和(12.50±2.10)s。模型组和治疗组高于对照组,治疗组低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.210.0.0.2830.对照组、模型组和治疗组海马5-HT含量分别为(1.93±0.21)、(0.34±0.08)和(1.08±0.15)ng/g。模型组明显低于对照组,治疗组明显升高,但仍低于对照组(P<0.05)。见表2。3.3两组不同时点模型比较对照组、模型组和治疗组海马5-HTIA受体表达水平分别为(0.74±0.08)、(0.16±0.02)和(0.38±0.05)。模型组明显低于对照组,治疗组明显升高,但仍低于对照组(P<0.05)。见图1和表2。4抗抑郁作用机理及作用抑郁症是一种常见的情感、精神障碍性疾病,以显著而持久的心境低落为主要特征。临床表现除疲劳、失眠等躯体症状外,还包括情绪低落、兴趣丧失、记忆力减退等精神症状。其发病机制尚未阐明。对抑郁症的研究得益于正确动物模型的建立。给予大鼠慢性不可预见性温和应激(CUMS),能使大鼠较好地表现出抑郁的临床症状,包括情绪低落、兴趣丧失、记忆力减退等,是较理想的抑郁动物模型。本实验利用CUMS应激研究人参皂苷Rb1抗抑郁作用机理。抑郁症发病与神经内分泌失调有关。下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴为神经内分泌免疫网络中枢,抑郁症发与HPA轴失调有关。当机体受到应激时,HPA轴可以调控释放促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)。研究表明,神经递质5-羟色胺(5-HT)可以兴奋性调节CRH的释放,5-HT及其受体在HPA轴反馈调节中起重要作用。其中5-羟色胺1A受体在情绪和精神调节中具有重要作用。抑郁症属中医“郁证”范畴,病始在肝,及于心神。因情而郁,气血失调是其