高效液相色谱法测定枸酸的含量

高效液相色谱法测定枸酸的含量

反胃酸口服是湖北京医院附属太和医院的一种开发药物。它由茄子软膏、胃蛋白酶、姜汁、山楂提取物、羟色胺和纯度水组成。缓解胃部的抗炎作用，缓解胃肠道疾病引起的胃肠道痉挛和恶心呕吐，缓解胃蛋白酶缺乏，降低疾病后消化机的消化不良等。石油。制剂中的莨菪碱类、羟苯乙酯等分别可用分光光度法、高效液相色谱法测定含量［3-7］。山楂提取液具有健胃消食作用,主要药理成分是枸橼酸。为确保制剂质量和用药安全,本实验采用高效液相色谱法对颠胃酸口服液中的枸橼酸进行含量测定。1药品制品检定所戴安3000型高效液相色谱仪(美国戴安公司);枸橼酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110836-201034);颠胃酸口服液(湖北医药学院附属太和医院自制,批号20130410、20130412、20130415);磷酸二氢铵和磷酸为分析纯;水为纯化水和超纯水。2方法和结果2.1流动相ph色谱柱:Diamonsil-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:磷酸二氢铵-磷酸缓冲液(pH3.0),检测波长210nm,进样量20μL,流速1.0mL/min,柱温25℃。2.2对照品溶液和供试品溶液制备2.2.1对照品溶液精密称取枸橼酸对照品适量,加纯化水配制成浓度为0.5mg/mL的对照品储备液,取该储备液1.0mL于10mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,得50.0μg/mL的对照品溶液,使用前用0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。2.2.2供试品溶液精密吸取颠胃酸口服液2.0mL于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。2.2.3阴性样品溶液精密吸取不含山楂提取液的“颠胃酸口服液”2.0mL于100mL容量瓶中,按“2.2.2”供试品溶液方法制备,即得。2.3样品的制备及测定分别取“2.2”项下的各溶液在“2.1”色谱条件下进样,记录色谱图,结果除阴性样品溶液外,对照品溶液、供试品溶液在同一时间均有相同色谱峰出现,说明制剂中的其他成分对枸橼酸含量测定无干扰。见图1。2.4枸杞酸标准品溶液的线性回归分析分别取“2.2.1”项下浓度为0.5mg/mL的对照品储备溶液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL置10mL容量瓶中,加水稀释至刻度,即得分别含枸橼酸5.0、25.0、50.0、75.0、100.0、125.0、150.0μg/mL的溶液,用0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液在“2.1”色谱条件下进样,重复操作3次,以峰面积(Y)为纵坐标,浓度(X)为横坐标进行线性回归,得回归方程为Y=0.5913X+0.5236(r=0.9997),枸橼酸在5.0~150.0μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.5精密度实验取“2.2.1”项下的对照品溶液,在“2.1”色谱条件下分别进样5次,记录枸橼酸的峰面积值,结果见表1。2.6枸杞酸峰面积值的测定取“2.2.2”项下的供试品溶液,在“2.1”色谱条件下分别于0、3、6、12、24h进样,测定枸橼酸的峰面积值,结果见表2。2.7枸杞酸溶液测定取同一批号(20130410)的颠胃酸口服液样品,按“2.2.2”项供试品溶液方法制备,共5份,在“2.1”色谱条件下进样,测定枸橼酸平均含量,结果见表3。2.8枸杞酸含量测定精密吸取不含山楂提取液的颠胃酸口服液样品2.0mL于100mL容量瓶中,共9份,每3份为1组,按高、中、低3个浓度水平分别精密加入浓度为0.5mg/mL的对照品储备液12.0、10.0、8.0mL,按“2.2.2”项下供试品溶液方法制备,在“2.1”色谱条件下进样,测定样品峰面积,按外标法计算枸橼酸的含量,结果见表4。2.9枸杞酸含量测定取颠胃酸口服液样品3批,各精密吸取2.0mL于100mL容量瓶中,按“2.2.2”项下供试品溶液方法制备,在“2.1”色谱条件下进样,按外标法计算枸橼酸的含量,结果见表5。3主要化学成分的提取率颠胃酸口服液以颠茄酊、胃蛋白酶、姜汁、山楂提取液、羟苯乙酯和纯化水组方而成。山楂提取液主要含有水溶性脂肪酸(苹果酸、枸橼酸、琥珀酸)、脂溶性三萜酸(熊果酸)、芳香酸(齐墩果酸、咖啡酸、绿原酸),其中水溶性脂肪酸以枸橼酸含量最高。枸橼酸不仅具有助消化作用,其与姜汁中的6-姜辣素按一定比例配合,还对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌具有良好的抑制作用［10］,但含量过低则达不到应有的药理作用。枸橼酸是山楂中含量最高的酸类成分,2010年中国药典(一部)规定以枸橼酸为指标测定山楂活性成分含量,故本实验选择枸橼酸作为测定指标。枸橼酸易溶于水。本实验在制备供试品溶液时曾考察了醇提、水提和碱水提条件下枸橼酸的提取率,结果分别为84.1%、98.0%、78.4%,以水提法效果最好。实验时分别考察了以甲醇-0.02mol/mL磷酸二氢钾、乙腈-0.02mol/mL磷酸二氢钾(含0.2%辛烷磺酸钠)、磷酸二氢铵-磷酸缓冲液(pH3.0