16 第十六章 螺旋体、衣原体、支原体、立克次体 (1)讲解

第十六章螺旋体、支原体、衣原体、立克次体主讲人：×××螺旋体支原体衣原体立克次体目录教学要求掌握螺旋体、支原体、衣原体、立克次体的概念、特点及生物学特性。熟悉螺旋体、支原体、衣原体、立克次体的主要检验方法。123了解常见螺旋体、支原体、衣原体、立克次体的临床意义。PART01螺旋体螺旋体螺旋体（spirochete）是一类细长、柔软、弯曲、运动活泼、革兰染色阴性的原核细胞型微生物。引起人类致病的主要有钩端螺旋体属、密螺旋体属、疏螺旋体属。

一、钩端螺旋体（一）生物学性状

1.形态与染色

大小为（6.0～12.0）μm×（0.1～0.2）μm，螺旋排列细密而规则，常呈S或C型常用Fontana镀银染色’。螺旋体（一）生物学性状2.培养特性需氧或微需氧；Korthof培养基；最适温度28℃～30℃；pH值为7.2～7.4；液体培养基：半透明云雾状；固体培养基：透明、不规则的扁平菌落。3.抗原构造与分类

主要有属特异性抗原、群特异性抗原和型特异性抗原。4.抵抗力

弱，对热、常用消毒剂、青霉素等敏感，对酸、碱敏感，在中性的湿土或水中可存活数月。（一）生物学性状钩端螺旋体病为人兽共患性疾病，鼠类和猪为主要储存宿主。临床表现：发热、头痛、乏力、全身肌肉酸痛、眼结膜充血、浅表淋巴结肿大、腓肠肌压痛等典型症状。（二）临床意义（三）微生物学检验标本采集

患者发病1周内采取血液；1周以后取尿液；有脑膜刺激症状者取脑脊液。（三）微生物学检验直接镜检暗视野显微镜直接观察；Fontana镀银染。分离培养标本接种至Korthof培养基，培养2周～4周，30天未生长者，可报告结果为阴性。123血清学检查取双份血清，检测抗体的效价的变化。动物试验4二、梅毒螺旋体（一）生物学性状形态与染色：大小为（6.0～15.0）μm×（0.1～0.2）μm，暗视野显微镜观察下呈移行、屈伸、滚动等方式运动。Fontana镀银染色成棕褐色培养特性：不能在无生命的培养基中生长繁殖。123抵抗力：抵抗力很弱，对热、冷、干燥及一般消毒剂敏感。50℃5min、4℃3d、干燥环境中1～2h即可死亡。故血液4℃存放3d以上可避免传染梅毒的危险。（二）临床意义人是唯一的传染源。主要通过性接触传播引起获得性梅毒；也可经胎盘垂直传播，引起胎儿先天性梅毒。获得性梅毒具有反复、潜伏和再发的特点。临床过程可分为三期：下疳期、梅毒疹期、慢性肉芽肿样期。12（二）临床意义主要出现生殖器无痛性硬下疳，溃疡渗出液中有大量病原体，感染性强，可自愈；下疳期梅毒疹期慢性肉芽肿样期全身皮肤、黏膜出现梅毒疹，疹内和淋巴结中存在大量螺旋体，传染性强；病变波及全身组织和器官，引起缺血坏死，侵入中枢神经系统和心血管，可危及生命。（二）临床意义（二）临床意义先天梅毒可致胎儿全身感染，造成流产或死胎、马鞍鼻、间质性角膜炎、先天梅毒心肌炎、耳聋等。（三）微生物学检验1.标本采集

可采取硬下疳渗出液、梅毒疹渗出液或局部淋巴结穿刺液等标本做直接检查；血清学试验可采集血液，分离血清送检。

2.检验方法与鉴定（1）直接镜检：暗视野显微镜检查运动情况；标本进行镀银染色，镜下可见棕褐色密螺旋体；（三）微生物学检验

2.检验方法与鉴定（2）血清学检查：测定特异性抗体。有非特异性和特异性两类试验。非特异性为非密螺旋体抗原试验（以牛心肌的心脂质作为抗原，测定患者血清中反应素）常用于初筛，常用的方法VDRL、RPR、TRUST等。特异性为密螺旋体抗原试验(以密螺旋体抗原检测患者血清中特异性抗体)用于梅毒确认，常用的方法有FTA-ABS、MHA-TP、TPPA、ELISA等。（三）微生物学检验梅毒螺旋体的血清学试验：非螺旋体抗原试验、密螺旋体抗原试验Ⅰ期梅毒阳性率70％；Ⅱ期可达100％，Ⅲ期较低，先天梅毒阳性率80～100％。三、其他常见螺旋体（一）伯氏疏螺旋体

是莱姆病的病原体，主要传播媒介为硬蜱。微生物学检查：采用血清学试验和分子生物学技术。蜱Ixodes体虱吸回归热病人血后三、其他常见螺旋体（二）回归热疏螺旋体

是引起人类虱传回归热（流行性回归热）的病原体，以体虱为传播媒介。取外周血制成厚血片，用暗视野显微镜或Giemsa染色后镜检，可见形似卷曲毛发的螺旋体。三、其他常见螺旋体（三）奋森疏螺旋体常与梭杆菌共同寄居于人类口腔牙龈协同引起溃疡性牙龈炎、咽峡炎、溃疡性口腔炎等。微生物学检查可用棉拭取牙垢或口腔分泌物制成涂片，革兰染色镜检可见革兰阴性螺旋体；镀银染色镜检可见棕褐色或黑褐色螺旋体。PART02支原体支原体支原体(mycoplasma)是一类没有细胞壁、呈高度多形性、能通过细菌滤器、可在无生命培养基中生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。对人类致病的主要有肺炎支原体、人型支原体、生殖道支原体和解脲脲原体等。（一）生物学特性1.形态与染色

大小为0.2μm～0.3μm。无细胞壁，呈高度多形态性革兰染色为阴性。常用Giemsa染色，呈淡紫色。（一）生物学特性培养特性营养要求较高，需加入10～20%灭活马血清。最适pH7.6～8.0（解脲脲原体最适pH为6.0～6.5),最适生长温度37℃。需氧或兼性厌氧。以二分裂繁殖，生长慢。固体培养基中，呈典型的“油煎蛋”样。肉汤培养基培养时，呈极浅淡的混浊。（一）生物学特性支原体与L型细菌的区别

生物学特性支原体L型细菌存在条件广泛分布于自然界多见实验条件下诱导产生培养条件在培养基中稳定，需加胆固醇需高渗培养，不需要胆固醇菌落性状油煎蛋样菌落、较小、直径为0.1～0.3mm油煎蛋样菌落、稍大、直径为0.5～1mm液体培养基中混浊度较低有一定混浊度其他遗传上与细菌无关，天然无细胞壁可回复变为有细胞壁的细菌（一）生物学特性

3.生化反应

根据分解葡萄糖、利用精氨酸、水解尿素等，可初步鉴定支原体。支原体种类葡萄糖精氨酸尿素肺炎支原体＋－－人型支原体－＋－生殖器支原体＋－－穿透支原体＋＋－解脲脲原体－－＋各种支原体的主要生化反应（一）生物学特性4.抵抗力抵抗力比细菌弱，对热、干燥、低渗及多种消毒剂敏感，但对醋酸铊、结晶紫和亚碲酸盐有较强耐受性。（二）临床意义主要引起人类口腔、呼吸道、泌尿生殖道感染等。肺炎支原体

可引起人类原发性非典型肺炎，大多发生于夏末秋初，以儿童和青少年感染多见，主要通过呼吸道飞沫传播。解脲脲原体、人型支原体和生殖道支原体可通过性接触传播，引起人类非淋球菌性和非衣原体性泌尿生殖道感染。（三）微生物学检验

1.标本采集采集患者的痰、咽拭子、鼻咽洗液、支气管分泌物、穿刺液、尿道和子宫颈拭子及各种分泌物等，宜采用拭子标本。标本即采即种；或置于蔗糖磷酸缓冲液中。（三）微生物学检验2、支原体鉴定要点（1）肺炎支原体：二步培养法；固体培养基上，长出致密圆形的油煎蛋样菌落①溶血试验：8%的豚鼠红细胞②生长抑制试验：特异性高（三）微生物学检验2、支原体鉴定要点（2）解脲脲原体：接种于液体培养基中（内含尿素和酚红指示剂，pH值为6.0±0.5）①代谢抑制试验：②生长抑制试验：PART03衣原体衣原体是一类严格细胞内寄生、有独特发育周期、能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。能引起人类疾病的衣原体主要有沙眼衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体，其中最常见的是沙眼衣原体衣原体(chlamydia)衣原体性状沙眼衣原体肺炎衣原体鹦鹉热衣原体所致疾病沙眼、性传播疾病、肺炎（幼儿为主）肺炎（少儿为主）、呼吸道感染肺炎（青少年为主）、呼吸道感染自然宿主人和小鼠人禽类和低等哺乳动物原体形态圆形、椭圆形梨形圆形、椭圆形对磺胺类药物的敏感性敏感不敏感不敏感（一）生物学特性1.形态染色与生活周期（如下图）（一）生物学特性胞质内形成的包涵体（一）生物学特性2.培养特性

衣原体为专性细胞内寄生；细胞培养法，是衣原体诊断的金标准。3.抵抗力抵抗力较弱，对热和常用消毒剂敏感。（二）临床意义沙眼衣原体可分为沙眼生物亚种、性病淋巴肉芽肿亚种和鼠亚种三种，对人致病的为前两个亚种。沙眼生物亚种：引起沙眼、包涵体性结膜炎；泌尿生殖道感染（如宫颈炎、输卵管炎、附睾炎等)、某些沙眼生物亚种的血清型还可引起婴幼儿肺炎。性病淋巴肉芽肿亚种：通过性接触传播，可引起性病淋巴肉芽肿。

1、沙眼衣原体（二）临床意义主要经飞沫和呼吸道分泌物传播引起急性呼吸道疾病，如肺炎、支气管炎、咽炎等。也可引起如慢性支气管炎、哮喘等慢性感染。2、肺炎衣原体人多因与家禽或家畜接触而感染，可表现为非典型肺炎，称为鹦鹉热。3、鹦鹉热衣原体（三）微生物学检验根据不同疾病采取不同标本。1.标本采集沙眼或包涵体性结膜炎患者泌尿生殖道感染者眼穹窿眼结膜分泌物眼结膜刮片精液宫颈刮片泌尿生殖道拭子尿液标本（三）微生物学检验性病淋巴肉芽肿患者肺炎衣原体感染直肠拭子淋巴结脓液生殖道上皮细胞刮片活检材料送检痰液、鼻咽部拭子支气管肺泡灌洗液耳或鼻咽部的吸取物血液标本鹦鹉热衣原体感染咽喉洗漱液痰液和血液（三）微生物学检验Giemsa染色：包涵体染色：直接免疫荧光染色(DFA)法直接涂片染色镜检血清学检查分子生物学检查用PCR检测技术、核酸杂交技术，提高检测的敏感性和特异性。2.检验方法与鉴定PART04立克次体立克次体立克次体（rickettsia）是一类严格细胞内寄生、以节肢动物为传播媒介、革兰阴性的原核细胞型微生物。常见的立克次体有普氏立克次体、莫氏立克次体、恙虫病立克次体、Q热立克次体。（一）生物学特性

1.形态与染色大多呈杆状或球杆状，大小为（0.8～2.0）μm×（0.3～0.6）μm，革兰染色阴性，Giemsa染色呈紫蓝色。2.培养特性只能在活的真核细胞内生长，二分裂繁殖。培养立克次体常用的方法有动物接种、鸡胚培养和细胞培养。（一）生物学特性3.抗原结构用变形杆菌OX19、OX2、OXK菌株代替相应的立克次体进行非特异性凝集反应，以检测人体血清中有无相应抗体，此反应称为外斐反应（Weil-Felixreaction），可用于立克次体病的辅助诊断。4.抵抗力不耐热，对常用消毒剂敏感，对低温、干燥抵抗力较强。（一）生物学特性立克次体变形杆菌OX19OX2OXK普氏立克次体＋＋＋＋－莫氏立克次体＋＋＋＋－恙虫病立克次体－－＋＋＋Q热立克次体－－－主要立克次体与变形杆菌菌株抗原交叉现象（二）临床意义普氏立克次体流行性斑疹伤寒病原体。患者是唯一的传染源，人体虱是主要传播媒介，经虱﹣人﹣虱方式传播。莫氏立克次体地方性斑疹伤寒的病原体。鼠是主要贮存宿主，经鼠蚤或鼠虱传播。当鼠蚤叮吮人体时，把立克次体传染给人。恙虫病次体恙虫病的病原体，为自然疫源性传染病，传染源是鼠类，恙螨既是传播媒介，又是贮存宿主。（三）微生物学检验1.标本采集主要是采集患者急性期血液以供病原体的分离；也可采集病程早期和恢复期双份血清来检测患者体内抗体滴度的变化。（三）微生物学检验1直接镜检通常采用Gimenez染色法，立克次体为红色，背景呈绿色。3血清学检查取患者双份血清做外斐反应，效价升高4倍以上可作为新近感染立克次体的指标。单份血清凝集效价超过1﹕160时才有诊断意义。2分离培养豚鼠、小白鼠和鸡胚卵黄囊对多数立克次体敏感，可将标本接种于其中进行分离培养4分子生物学检测应用PCR和核酸探针技术检测。2.检验方法与鉴定目标检测1.梅毒血清学试验的非密螺旋体抗原试验，所用的抗原为A.疏螺旋体抗原

B.雅司螺旋体C.梅毒螺旋体D.牛心类脂质

E.病损处组织2.通过接触疫水致病的是A.梅毒螺旋体

B.雅司螺旋体C.钩端螺旋体D.回归热螺旋体

E.奋森螺旋体3.下列属于梅毒确证试验的检验方法是A.VDRLB.RPRC.USRD.TRUSTE.MHA-TP目标检测4.易引起儿童、青年呼吸道感染的病原体是A.沙眼衣原体B.斑疹伤寒立克次体C.伯氏疏螺旋体D.肺炎衣原体E.肺炎支原体5.分离培养解脲脲原体的气体环境是A.85%N2、10%O2、5%CO2B.90%N2、10%O2C.