苗期甘蔗氮高效基因型评估技术规程

1苗期甘蔗氮高效基因型评估技术规程本文件确立了苗期甘蔗氮高效基因型评估技术的样品准备、评价等程序。本文件适用于苗期甘蔗氮高效基因型的评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T2017植物中氮、磷、钾的测定3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4样品准备4.1催芽将待评价的甘蔗品种种茎切成5cm的单芽茎段，在催芽室35℃~38℃温度条件下沙培催芽1d～3d，萌芽后转至温室中继续培养，每天定期淋水，保持沙子湿润，培养温度22℃~36℃,光照为自然光照，待长至1片真叶后准备移栽。4.2移栽培养选择生长一致的1叶苗移栽至基质为珍珠岩和沙子（1:3）的PVC培养盆(14cm×22cm)中，每盆定植1株，重复12组，种植于温室大棚，培养温度22℃~36℃,光照为自然光照。移栽后每隔1d浇水1次，直至长出3片真叶，开始浇含氮营养液。4.3氮处理设正常氮（Normal-N:4mmol/L纯N）和低氮（low-N：0.4mmol/L纯N）两个处理，各重复6组，氮源为NH4NO3，营养液和清水每隔一天交替浇淋，清水和营养液每次施用量为100mL，培养130d～140d后收获。4.4取样保存收获时，按根、茎、叶分别取样，称取鲜重，然后分别装入牛皮信封中，带回实验室于105℃杀青30min，再于60℃~80℃下烘干至恒重后，记录干重并保存备用。5评价5.1评价指标叶干重、叶氮利用率。25.2指标测定及计算方法5.2.1叶干重采用称重法测定：用天平称取甘蔗烘干至恒重样品的叶干重并记录，计算获得株平均叶干重作为试验的叶干重。5.2.2叶氮利用率计算5.2.2.1叶氮累积量计算方法为：叶氮含量测定采用凯氏定氮法进行测定，测定方法应符合NY/T2017的规定；叶氮累积量计算见公式（1）：N=cn×W 式中：N——叶氮累积量,单位为克每株（g/株）；Cn——叶含氮量，单位为百分比(%);W——叶干重，单位为克每株（g/株）。5.2.2.2叶氮利用率计算见公式（2）：NUE=w÷N 式中：NUE——叶氮利用率,单位为克每克（g/gW——叶干重，单位为克每株（g/株）；N——叶氮累积量,单位为克每株（g/株）。5.3评价方法5.3.1评价类型甘蔗种质氮效率类型分为氮高效类型(Ⅰ型）、偏氮高效类型(Ⅱ型）、偏氮低效类型(Ⅲ型）、氮低效类型(Ⅳ型）5.3.2氮效率类型初评5.3.2.1低氮条件下氮利用效率评价指标采用低氮条件下获得的各项指标对待评价种质进行初评，具体指标见表1。表1低氮条件下评价类型指标要求5.3.2.2氮效率类型的初步判定采集所评价种质的叶干重后，测定各种质氮含量，通过5.2公式计算评价的各指标值，根据低氮条件下筛选后评价类型指标要求（见表1）进行评价，如果叶干重范围值、叶氮利用率范围值这两项指标值同时达到相对应氮效率类型指标要求，则该种质为对应的氮效率类型。35.3.3复筛5.3.3.1将评价为氮高效类型(Ⅰ型）、偏氮高效类型(Ⅱ型）的种质继续在正常氮压力水平下进行复筛，采集各种质的叶干重，测定各种质叶氮含量，通过5.2公式计算评价的各指标值，根据正常氮条件下复筛后评价类型指标要求（见表2）进行评价，如果叶干重范围值、叶氮利用率范围值这两项指标值同时达到氮高效类型(Ⅰ型）指标要求，则该种质为典型氮高效种质。5.3.3.2如需筛选典型氮低效种质，则将评价为偏氮低效类型(Ⅲ型）、氮低效类型(Ⅳ型）的种质继续在正常氮压力水平下进行复筛，采集各种质的叶干重，测定各种质叶氮含量，通过5.2公式计算评价的各指标值，根据表2的筛选指标进行评价，如果叶干重范围值、叶氮利用率范围值这两项指标值同时达到氮低效类型(Ⅳ型）指标要求，则该种质为典型氮低效种质。表2正常氮条件下复筛后评价类型指标要求4参考文献[1]RobinsonNN,FletcherAA,WhanAA,etal.Sugarcanegenotypesdifferininternalnitrogenuseefficiency[J].FunctionalPlantBiology,2007,34(12):1122-1129.[2]ZhaoD,GlazB,ComstockJC.Physiologicalandgrowthresponsesofsugarcanegenotypestonitrogenrateonasandsoil.JAgroCropSci,2014,200(4),290-301.[3]杨柳,廖芬,MuhammadANAS,李强,彭李顺,黄东亮,李杨瑞.苗期甘蔗氮高效基因型评价指标的筛选[J].热带作物学报,2020,41(11):2205-2218.