221动物细胞培养和核移植技术新-1

2.2.1动物细胞培养和核移植技术

2.2.1动物细胞培养和核移植技术1那么动物细胞工程常用的技术手段呢？植物组织培养,

植物体细胞杂交

回忆：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？

动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础那么动物细胞工程常用的技术手段呢？植物组织培养,植物2

从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。原理：细胞增殖动物细胞培养目的：获得细胞或细胞产物

原理：细胞增殖动物细胞培养目的：获得细胞或细胞3动物细胞培养的条件：1、无菌、无毒的环境（无菌处理、添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子、动物血清、血浆等。）3、温度和PH温度为36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。4、气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2）补充合成培养基中缺乏的物质作用作用动物细胞培养的条件：1、无菌、无毒的环境补充合成培养基中缺乏4

注意关键词:

细胞贴壁接触抑制原代培养传代培养阅读课本44—46页内容注意关键词:阅读课本44—46页内容51、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？如何分散？2、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？3、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？4、如果此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？5、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？6、归纳动物细胞培养的过程？讨论1、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞讨论6动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬液10代细胞50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液稀释（分解弹性纤维）原代培养胰蛋白酶剪碎过程：细胞株细胞系动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。遗传物质未改变遗传物质已改变动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬液10代细胞50代细胞传72、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基2、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞分化程度低，分裂能力强成块组织中的细胞，彼此接触抑制了细胞的生长和增殖；使细胞与培养液充分接触不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体练一练2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材8（1）生产有重要价值的生物制品：如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。（2）动物细胞是基因工程技术中常用的受体细胞。（3）用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据动物细胞培养技术的应用：（1）生产有重要价值的生物制品：如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗9细胞的全能性细胞株、细胞系植物体或组织培养结果获得细胞或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目试一试细胞的全能性细胞株、细胞系植物体或组织培养结果获得细胞或细胞10动物细胞工程常用的技术手段有哪些？动物细胞培养的概念？动物细胞培养的过程？动物细胞培养的条件？动物细胞培养的应用？动物细胞工程常用的技术手段有哪些？11

动物细胞特点分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性看一看

动物细胞特点看一看12

根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达?

想一想利用动物体细胞核移植技术想一想利用动物体细胞核移植技术13卵细胞C母绵羊子宫Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵细胞细胞拆合技术妊娠多莉羊的培育过程无性生殖卵细胞C母绵羊子宫Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核141.名词解释：细胞贴壁、接触抑制、原代培养、传代培养2.动物细胞工程常用的技术手段有哪些？其中哪项是其它技术手段的基础？3.简述动物细胞培养的取材部位是什么？理由是什么？所需的酶是什么？

4.目前使用或冷冻的细胞通常为几代以内的细胞？原因是？5.动物细胞培养的过程中如何创造无菌、无毒的环境？动物细胞培养基中应加入的天然成分是？其作用是什么？气体环境是？作用分别是什么？1.名词解释：细胞贴壁、接触抑制、156.为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？如何分散？7.动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？8.培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？9.如果此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？10.人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？11.归纳动物细胞培养的过程？6.为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞16

例题：上海某医院病理室为确诊一患者的肿瘤是良性还是恶性，切取了一小块肿瘤组织进行培养。请回答下列问题：

（1）培养之前，肿瘤组织必须先用

等处理成单个细胞。

（2）若开始培养时取一滴培养液观察有100个肿瘤细胞，经24h培养后，取一滴稀释50倍后再取一滴(设三次的“一滴”等量)观察，发现有32个肿瘤细胞，此肿瘤的细胞周期约为

h。

（3）与正常细胞相比，在光学显微镜下可见明显增多的

细胞器是

。

（4）如果通过电子设备和其他生化手段已经初步判断是恶性的可能性很小，在肿瘤组织进行培养了60代后，发现有恶性肿瘤细胞存在，那么你能否判断该肿瘤组织是恶性肿瘤吗？。

说明理由：

。

（5）某科研单位研制出一种新型药物X，据说对此类肿瘤有较好的疗效，请你设计一个方案加以验证。写出你所设计的实验步骤：

a．

；

b．

；

c．

。

胰蛋白酶

6

线粒体不能

因为细胞传代培养超过10－50代后，部分细胞会在细胞培养过程中获得不死性而发生癌变。将相同的培养液分为相等的两份，一份加入药物X，另一份不加将等数量的肿瘤细胞置于两份培养基中放在相同且适宜条件下培养，定期取样观察肿瘤细胞数目变化情况

例题：上海某医院病理室为确诊一患者的肿瘤是良性还是恶性，切17将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植(易恢复其全能性)(难恢复其全能性)记一记

动物体细胞核移植：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵18供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质）去核无核卵母细胞显微操作注入细胞融合重组细胞构建重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体奶牛遗传物质基本相同的犊牛核移植过程（显微操作法）（电刺激）物理或化学方法供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵巢卵母细胞去核无核卵19供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质）去核无核卵母细胞注入细胞融合重组细胞构建重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛归纳:1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植2.取卵细胞作受体细胞的原因是:细胞大,易操作,含有促使细胞核全能性表达的物质和营养3.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状核移植过程供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质）20思考题１、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的遗传物质几乎全部来自有利用价值的动物提供的细胞。２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未突变3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞思考题１、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核21分子水平：PCR技术进行DNA扩增细胞水平：动物细胞培养个体水平：营养生殖（扦插、嫁接）植物组织培养动物个体的克隆（体细胞核移植和胚胎移植）哪些生物技术属于“克隆”？克隆概念：是指从一个共同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一