血涂片染色及白细胞分类计数

关于血涂片染色及白细胞分类计数1.瑞氏染色1.1试剂成分：伊红——酸性——嗜碱性染料亚甲蓝（美蓝）——碱性——嗜酸性染料甲醇——固定溶剂磷酸缓冲液（pH:6.4-6.8）第2页,共18页，2024年2月25日，星期天1.2着色原理：化学亲和作用+物理的吸附作用伊红+细胞中的碱性物质——红色亚甲蓝+酸性物质——蓝色中性物质+伊红和亚甲蓝——淡紫色第3页,共18页，2024年2月25日，星期天1.3pH对细胞染色影响pH过低

<PI

正电荷增多——易与伊红结合——偏红pH过高>PI

负电荷增多——易与亚甲蓝结合——偏蓝最适环境：弱酸（pH6.4-6.8）第4页,共18页，2024年2月25日，星期天

血涂片：淡紫红色镜下：成熟红细胞——粉红色

白细胞——胞质呈现其特有的色彩细胞核紫红色染色质结构清楚判别方法第5页,共18页，2024年2月25日，星期天染色偏酸:

红细胞、嗜酸粒细胞颗粒偏红白细胞核淡紫红色或不着色染色偏碱：红细胞灰蓝色中性粒细胞颗粒深暗、偏粗，紫黑色嗜酸性粒细胞暗褐色或紫黑色、蓝色第6页,共18页，2024年2月25日，星期天第7页,共18页，2024年2月25日，星期天1.4器材载玻片、推玻片、洗耳球1.5试剂

瑞氏染液（商品）

I液：瑞特染料、纯甲醇、甘油

I液：磷酸盐缓冲液（KH2PO4Na2HPO4）

第8页,共18页，2024年2月25日，星期天1.6操作制备血涂片（待完全晾干）

加I液数滴覆盖整个血膜0.5-1min

滴加等量或稍多的II液（洗耳球混匀）5-10min

冲洗（注意）

干燥第9页,共18页，2024年2月25日，星期天注意事项1.血涂片干后方可染色2.加染液不能过少3.冲洗时应以流水冲洗4.染色过淡可复染，先加缓冲液再加染液5.染色过深可用水冲洗或浸泡一定时间，也可用甲醇脱色6.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。应在具体实践中摸索合适的时间。

第10页,共18页，2024年2月25日，星期天2.WBC分类计数2.1原理2.2器材:显微镜、香柏油、拭镜纸、清洁剂2.3操作步骤

1.采末梢血——染色

2.低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好的域，滴香柏油一滴

3.油镜下分类，分类时要有秩序的连续进行（“几”字形），避免主观选择视野。通常分类100个白细胞，计数并报告各种白细胞所占百分比。

4.计算

5.报告方式：XX细胞：XX%第11页,共18页，2024年2月25日，星期天2.4外周血正常白细胞形态特征:中性粒细胞：杆+分10-15

μm圆形胞质粉红胞质内颗粒量多、细小、均匀、紫红色核弯曲呈杆、带状染色质粗糙，紫红色分叶核：核分2-5叶第12页,共18页，2024年2月25日，星期天13-15

μm圆形胞质着色不清胞质内颗粒粗大、整齐、均匀、充满胞质、桔红色核多分2叶染色质粗糙，紫红色嗜酸性粒细胞+淋巴细胞第13页,共18页，2024年2月25日，星期天10-12

μm圆形胞质着色不清胞质内颗粒量少、大小不匀、排列零乱、紫黑色，可盖核上核形不清染色质粗糙，紫红色嗜碱性粒细胞第14页,共18页，2024年2月25日，星期天6-15

μm圆形/椭圆形胞质透明、淡蓝色胞质内多无颗粒核形圆/椭圆/肾形染色质粗紧成块，深紫红色，核外缘光滑淋巴细胞第15页,共18页，2024年2月25日，星期天12-15

μm圆/椭圆/不规则胞质半透明、灰蓝色或灰红色胞质内有细小、尘土样紫红色颗粒核形不规则/山字/肾/马碲形，扭曲折叠染色质疏松网状，淡紫红色，有膨胀感和立体起伏感第16页,共18页，2024年2月25日，星期天2.5注意事项：1.分类最佳区域为体、尾交界处2.分类时要有秩序地连续进行3.白细胞总数与分类个数4.分类中如见幼红细胞，不计入100个细胞内，以分类100个白细胞过程中见到幼红细胞多少个来报告，并应注明其所属阶段。5.分类中应注意观察成熟红细胞、