抗原抗体反应的原理

关于抗原抗体反应的原理绪言第2页,共50页，2024年2月25日，星期天

第一节免疫学技术的范畴与应用一、免疫学技术的范畴二、免疫学技术的应用特点第3页,共50页，2024年2月25日，星期天免疫学技术的范畴1、对具有免疫活性物质的定性、定量测定2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定第4页,共50页，2024年2月25日，星期天

免疫学技术的应用特点1、对象——“包罗万象”2、方法——“兼容并蓄”第5页,共50页，2024年2月25日，星期天

第二节有关免疫学基本概念一、抗原的概念与属性二、免疫细胞的概念与分类三、免疫应答的概念与过程第6页,共50页，2024年2月25日，星期天免疫原性——可识别、可反应性（诱导机体产生免疫应答的特性）免疫反应性

——选择结合性（和免疫应答产物特异性结合的特性）抗原的概念与属性第7页,共50页，2024年2月25日，星期天免疫细胞的概念与分类免疫细胞（Immunecells）泛指所有参与免疫应答及与免疫应答活动相关的细胞。免疫活性细胞（Immunecompetentcell，ICC）能够接受抗原刺激、产生特异性的活化、增殖、分化并形成效应产物的淋巴细胞。第8页,共50页，2024年2月25日，星期天

免疫细胞的类型

红细胞血小板肥大细胞中性粒细胞巨噬细胞树突状细胞浆细胞T细胞NK细胞第9页,共50页，2024年2月25日，星期天免疫应答的概念与过程免疫应答（immuneresponse）免疫系统接触抗原后，免疫细胞对抗原进行识别；并使特异性淋巴细胞活化、增殖；表现出免疫效应的过程。免疫应答的阶段1、抗原识别阶段（antigen-recognizingphase）2、淋巴细胞活化阶段（lymphocyte-activatingphase）

3、抗原清除阶段（antigen-eliminatingphase）第10页,共50页，2024年2月25日，星期天

第三节抗原抗体反应的基本原理一、抗原抗体反应的原理二、抗原抗体反应的特点三、影响抗原抗体反应的因素第11页,共50页，2024年2月25日，星期天抗原抗体反应的原理1、抗原抗体结合的作用力2、抗原抗体结合物析出原因第12页,共50页，2024年2月25日，星期天引起抗原抗体结合的作用力1、电荷引力（库仑引力）2、电子云引力（VanderWaals力）3、氢键结合力4、疏水作用力第13页,共50页，2024年2月25日，星期天抗原抗体结合物析出的原因析出+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—电解质+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—第14页,共50页，2024年2月25日，星期天

抗原抗体反应的特点1、特异性2、可逆性3、适合比例性第15页,共50页，2024年2月25日，星期天特异性抗原A抗原C抗原B特异性反应交叉反应无反应第16页,共50页，2024年2月25日，星期天可逆性K（亲和常数）=Ag+AbAgAb第17页,共50页，2024年2月25日，星期天适合比例性抗体含量抗原含量前带后带等价带第18页,共50页，2024年2月25日，星期天网格学说（latticetheory）抗体过剩抗原过剩抗体抗体比例合适第19页,共50页，2024年2月25日，星期天

抗原抗体反应的影响因素1、电解质2、酸碱度（pH值6-8）3、温度（37-42。C）第20页,共50页，2024年2月25日，星期天

第四节免疫学检测技术的评价一、评价标准

二、特异性与敏感性的关系第21页,共50页，2024年2月25日，星期天评价标准Specificity（特异）Sensitivity（敏感）Simplicity（简便）Safety（安全）Saving（节约）第22页,共50页，2024年2月25日，星期天特异性与敏感性的关系特异性高、敏感性低

敏感性高、特异性低第23页,共50页，2024年2月25日，星期天抗原的提取与制备第24页,共50页，2024年2月25日，星期天

第一节抗原/免疫原制备的基本概念一、抗原制备的目的二、抗原的“纯度”三、抗原制备的主要技术途径第25页,共50页，2024年2月25日，星期天抗原制备的目的免疫原：激活T、B细胞半抗原：检测相应抗体第26页,共50页，2024年2月25日，星期天抗原的“纯度”免疫原：保留足够的可被T、B细胞识别的抗原决定簇半抗原：尽可能减少影响反应特异性的抗原决定簇第27页,共50页，2024年2月25日，星期天抗原制备的主要技术途径天然抗原——分离、纯化半抗原——人工合成、载体联接抗原肽——合成、基因工程制备第28页,共50页，2024年2月25日，星期天

第二节完全抗原/免疫原的制备方法一、颗粒性抗原的制备二、可溶性抗原的制备第29页,共50页，2024年2月25日，星期天颗粒性抗原的制备1、采集、分离抗原2、无害化处理第30页,共50页，2024年2月25日，星期天可溶性抗原的制备与纯化1、处理与粉碎2、蛋白质分离3、单一组分提取4、抗原纯度鉴定

第31页,共50页，2024年2月25日，星期天处理与粉碎组织粉碎：机械、生物

细胞破碎：物理、化学、生物

第32页,共50页，2024年2月25日，星期天蛋白质分离选择性沉淀：盐析有机溶剂沉淀水溶性非离子型聚合物沉淀

透析技术：超滤技术：

第33页,共50页，2024年2月25日，星期天单一组分提取层析技术：凝胶过滤离子交换亲和层析

离心技术：差速离心密度梯度离心电泳技术：电泳洗脱等电聚焦第34页,共50页，2024年2月25日，星期天凝胶层析（分子筛）第35页,共50页，2024年2月25日，星期天离子交换层析+++———————++++++++——+++——++第36页,共50页，2024年2月25日，星期天亲和层析第37页,共50页，2024年2月25日，星期天抗原纯度鉴定方法：层析性质测定电泳法免疫法指标：电泳纯免疫纯第38页,共50页，2024年2月25日，星期天

第三节半抗原免疫原制备的方法一、载体的选择二、半抗原与载体的联接第39页,共50页，2024年2月25日，星期天载体的选择蛋白质载体：BSA、HAS、OVA、KLH聚合多肽载体：多聚赖氨酸高分子聚合物载体：PVP、羧甲基纤维素第40页,共50页，2024年2月25日，星期天半抗原与载体的联接1、连接方式：物理法（吸附）化学法2、化学连接方法：直接联接法：间接联接法：第41页,共50页，2024年2月25日，星期天半抗原与载体直接联接碳化二亚胺法蛋白质-COO—+R-N+=CN-R`

H-N+-R蛋白质-COO-C-NH-R`+半抗原-NH2

O蛋白质-C-NH-半抗原+R-NH-CO-NHR`第42页,共50页，2024年2月25日，星期天半抗原与载体直接联接

戊二醛法蛋白质-NH2

+半抗原-NH2+COH-（CH2）

3-

COH蛋白质-N=CH-（CH2）

3–

CH=N-半抗原第43页,共50页，2024年2月25日，星期天半抗原与载体直接联接

氯甲酸异丁酯法半抗原-COOH

+Cl-COO-CH2CH（CH3）2

OO半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2+蛋白质-NH2

半抗原-CO-NH-蛋白质+HO-CH2CH（CH3）2

第44页,共50页，2024年2月25日，星期天半抗原与载体间接联接琥珀酸酐法

OO半抗原-CH2–OH+C-O-CCH3CH3O半抗原-CH2–O-C-(CH2)2-COOH第45页,共50页，2024年2月25日，星期天半抗原与载体间接联接O-（羟甲基）羟胺法半抗原-C=O

+H2N-O-CH2-COOH

半抗原-C=N-O-CH2-COOH