2.2.2动物细胞融合技术和单克隆抗体课件高二下学期生物人教版选择性必修3

动物细胞工程-----------动物细胞融合技术和单克隆抗体类风湿性关节炎（RA）是由免疫细胞的激活引起，释放出一系列细胞因子，通过增加组织蛋白酶的产生和激活破骨细胞而引发关节滑膜炎症的慢性自身免疫性疾病，主要病症为关节软组织肿胀、关节骨损伤。这一实验结果说明了

？为研究RA的发生与细胞因子的关系，研究人员分别测定了多例健康志愿者和RA患者血清中细胞因子的平均含量，结果如下图。注：肿瘤坏死因子（TNF）：由活化的巨噬细胞、T淋巴细胞等产生的细胞分子（小分子多肽）白细胞介素--4/10（IL-4/IL-10）：由肥大细胞、嗜碱性粒细胞产生的细胞因子对照组症状期缓解期资料1：作为炎症因子的代表—TNF，

能够激活滑膜成纤维细胞过表达组织蛋白酶，分解骨骼和软骨中的胶原蛋白，进而导致软骨和骨骼破坏关节侵蚀。另外TNF也能激活破骨细胞形成，进而溶解骨质。

请研发一种治疗药物，为患者带来希望。TNF受体TNF受体抗TNF抗体二、传统的血清抗体制备抗原缺陷：产量低、纯度低、且特异性差反复注射动物体内B淋巴细胞浆细胞抗体Q：如何解决上述缺陷呢？单一的B淋巴细胞克隆B淋巴细胞群产生化学性质单一、特异性强、灵敏度高的抗体（单克隆抗体）单个B淋巴细胞寿命有限，大约为3~5天，在体外不能无限增殖Q:能否培养出一种既能分泌特异抗体，又能在体外大量增殖的细胞？英国米尔斯坦美国科勒1975年成功获得单克隆抗体1984年诺贝尔生理学/医学奖任务:小组合作，请尝试建构制备抗TNF单克隆抗体的流程三、抗TNF单克隆抗体的制备多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞纯化TNF作为抗原注射小鼠体内Q：诱导动物细胞融合的常用方法有哪些呢？物理方法（离心、振动、电激）化学方法（聚乙二醇）生物方法（灭活的病毒）Q:如何筛选杂交瘤细胞?Q:诱导融合后的细胞，是否都是杂交瘤细胞？未融合的B淋巴细胞未融合的骨髓瘤细胞B—B杂交细胞瘤—瘤杂交细胞B—瘤杂交瘤细胞B细胞骨髓瘤细胞诱导融合免疫小鼠三、抗TNF单克隆抗体的制备资料2：已知细胞合成DNA有D(全合成途径)和S（补救合成途径）两条途径，其中D途径能被氨基喋呤（A）阻断。B淋巴细胞中这两种DNA的合成途径都有，但B淋巴细胞不能无限增殖。而鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，

但它能不断分裂增殖。

任务：请根据以上信息，设计一种方法，从培养液中筛选出杂交瘤细胞。注：次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（T）筛选杂交瘤细胞Q:如何筛选能产生抗TNF抗体的杂交瘤细胞？B细胞骨髓瘤细胞诱导融合免疫小鼠特定的选择培养基三、抗TNF单克隆抗体的制备筛选产生抗TNF抗体的杂交瘤细胞Q：分泌的抗体都是抗TNF的吗？如何检测？杂交瘤细胞抗原—抗体杂交技术TNF筛选杂交瘤细胞筛选产生抗TNF抗体的杂交瘤细胞B细胞骨髓瘤细胞诱导融合免疫小鼠Q:如何获得大量的单克隆抗体？特定的选择培养基抗原-抗体杂交技术三、抗TNF单克隆抗体的制备体内培养（注射小鼠腹腔内）体外培养抗TNF单克隆抗体抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞三、抗TNF单克隆抗体的制备M:GAPDH(广泛分布于各种细胞的一种酶)1.裸鼠单核细胞全细胞裂解物2.纯化的TNF蛋白3.牛单核细胞全细胞裂解物4.人单核细胞全细胞裂解物资料3：研究人员从扩大培养的培养液中，提取抗TNF单克隆抗体与不同抗原进行杂交检测，结果如下图。实验结果表明，抗TNF单克隆抗体不能与1、3结合，具有

，可以用于后续TNF所引发类风湿性关节炎等相关疾病的研究.特异性资料3：为验证抗TNF单克隆抗体作为治疗药物的效果，研究人员以小鼠为实验对象进行研究。由上述实验结果分析，抗TNF单克隆抗体是否可以作为治疗RA的一种候选药物_____________，判断依据是_____________。时间/天数关节肿胀增加体积正常鼠+生理盐水RA模型鼠+抗TNFRA模型鼠+