DB2306T 183-2023 美国红枫“秋火焰”组培快繁技术规程

ICS65.020.40CCSICS65.020.40CCSB64黑 龙 江 省 大 庆 市 地 方 标 准DB2306/T183—2023美国红枫"秋火焰"组培快繁技术规程2023-12-31发布 2024-01-31实施大庆市场监理局 发布DB2306/T183—2023DB2306/T183—2023PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II1范引文件 1语定义 1织养境 1养基 1培基制（分子使度mg/L） 1培基灭菌 2菌系建立 2取时间 2外体毒理 2外体养 2芽殖养 2苗养 3根养 3培驯和栽 3驯化 3移栽 3产案 3前 言本文按GB/T1.1—2020《准工导则 第部分标化件结和起规》起草。本文件由黑龙江省大庆市林草局提出。志敏、徐亮、冯满、翟晶、杨扬DB2306/T183—2023DB2306/T183—2023PAGEPAGE1美国红枫"秋火焰"组培快繁技术规程范围本文件规定了美国红枫（Acerrubrum'RedMaple'）组培快繁的组织培养环境、培养基、无菌体系的建立、茎芽增殖培养、壮苗培养、生根培养、组培苗驯化与移栽以及生产档案。本文件适用于大庆地区美国红枫组培快繁育苗。（LY/T1882 本文件没有需要界定的术语和定义。组织培养环境参照LY/T1882相关规定准备。培养基mg/L）MSΙ（10）每升培养基用量：NH4NO313000mg；KNO319000mg；CaCl2·2H2O400mg；MgSO4·7H2O7400mg；KH2PO41700mg。MSΠ（100）MnSO4·4H2O2230mg；ZnSO4·7H2O860mg；CoCl2·6H2O2.5mg；CuSO4·5H2O25mg；H3BO3620mg；Na2MO4·2H2O25mg；KI83mg；FeSO4·7H2O2780mg；Na2-EDTA3730mg。MSШ（50）烟酸25mg；盐酸吡哆醇25mg；盐酸硫胺素5mg。MSⅣ（100）10000mg。MSⅤ（100）50mg。0.1mg/mL～2mg/mL。Ι100Π10mLШ20mL10mL液Ⅴ10mL1000mL30g5g1000mLPH5.8～6.0。培养基配制后，趁热分装，240mL的组培瓶装入30mL-40mL培养基，封口并标明种类。置于高压灭菌锅中121℃下灭菌30min。配制好的培养基放到2℃～25℃避光无菌室中避光存放，时间不超过1周。生长季均可取材，5-6月且取一年生半木质化带芽枝条为最佳。将枝条剪成小段，用肥皂水清洗枝条并用流水冲洗1h后，转入超净工作台中，用75%酒精浸泡30s后再用2%次氯酸钠浸泡5min。无菌水冲洗3次～5次后，将消毒后的枝条放入烧杯中，切去3cm～5cm1个～2（。初代培养基组成：改良MS培养基+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LTDZ+0.1mg/LGA3（pH6.0。初代培养条件：组培室温度（24℃±2℃，光照时长14h/d，光照强度1200Lux。初代培养方法：将外植体避光培养3d～5d再进行光暗周期培养。培养30d转移到新鲜培养基上。植株长度≥10cm时，取植株的顶端茎段进行增殖培养。植株截成带2个～4个芽点、长度为2cm～3cm的茎段接种到增殖培养基中。+0.005mg/LTDZ+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LGA3+0.1mg/LIBA（pH6.0。增殖培养条件：同初代培养条件。继代周期：每隔40d～50d转移到新配制的培养基上。植株长度≥2cm时，去除下部1/3叶片，去除基部愈伤，将处理后的植株顶芽向上垂直接种到壮苗培养基上。+1.0mgLG3+10mgL-BA+.2mg/LIBpH6.0继代周期：培养30d后转移到生根培养基上。植株度≥4 cm下部1/3片去基伤处后植顶向上直种生根培养上。生根培养基组成：1/2MS培养基+2.0mg/LIBA+1.0mg/LGA3+30g/L蔗糖+1.0g/L活性炭（pH6.0）。1/2MS培养基组成：MS培养基中大量元素减半，其他成分同MS培养基。生根培养条件：同初代培养条件。培养周期：20d。驯化取根长1cm～3cm的组培苗进行炼苗驯化，将培养瓶放置到日光充足但不直射，温度17℃～25℃50%～70%的温室中5d～7d1d～20.3%的KMnO42min20℃～30移栽用蛭石、草炭土按照体积比1:2的混合基质，装入育苗盘中。将苗盘浸入多菌灵溶液中消毒。将驯化后的组培苗栽种到基质中后浇透水，室温下遮阴培养5d～7d。待缓苗后再逐渐接受正