高考生物总复习生物技术实践专题12传统发酵技术的应用微生物的培养与应用选修全国公开课一等奖百校联赛示

选修1专题1、2

生物技术实践传统发酵技术应用、微生物培养与应用第1页考纲内容能力要求命题分析试验：(1)利用发酵加工食品基本方法(2)测定食品加工中可能产生有害物质(3)微生物分离和培养(4)某种微生物数量测定(5)培养基对微生物选择作用(6)利用微生物发酵来生产特定产物以及微生物在其它方面应用试验与探究能力试验与探究能力试验与探究能力试验与探究能力试验与探究能力试验与探究能力1.新课标卷以综合题形式考查了传统发酵技术(泡菜制作)、微生物分离、计数和筛选等。在本部分内容中，微生物培养、分离及计数考查较多，属于高频考点，考查了微生物培养、分离及发酵相关内容。2.命题趋势：以生活实践为背景，以综合题形式考查发酵及微生物培养相关知识。[考纲导读]第2页项目果酒果醋腐乳泡菜微生物酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌制作原理在无氧条件下，酵母菌将葡萄糖分解为酒精等物质在有氧条件下，醋酸菌将葡萄汁中糖分解成醋酸；缺乏糖源时，醋酸菌可将乙醇(酒精)变为乙醛，再将乙醛变为醋酸毛霉等微生物产生蛋白酶和脂肪酶将豆腐中蛋白质和脂肪分解为小分子物质在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸气体条件①______有氧③________无氧温度18～25℃②________15～18℃④______一、传统发酵技术应用无氧30～35℃有氧1.果酒、果醋、腐乳和泡菜制作原理常温第3页2.酒精检测重铬酸钾灰绿(1)方法：可用______________检测酒精。(2)原理：在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应展现______色。对氨基苯磺酸玫瑰红标准显色液

3.亚硝酸盐含量测定原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与______________发生重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合，形成______________色染料。将显色后样品与________________进行目测比较，可大致估算出泡菜中亚硝酸盐含量。第4页二、微生物培养与应用1.培养基(1)培养基是人们按照微生物对营养物质不一样要求，配制出供其____________营养物质。生长繁殖(2)依据物理状态不一样分为半液体培养基、液体培养基和________培养基。固体选择(3)依据培养基功效可分为基础培养基、________培养基和判别培养基。碳源氮源pH

(4)每种培养基普通都含有水、________、________、无机盐。另外要满足微生物对________、特殊营养物质及氧气要求。第5页2.无菌技术70～7515

(1)巴氏消毒法在________℃煮30min或者在80℃煮________min，能够杀死牛奶中微生物，而且使牛奶营养成份不被破坏。灼烧干热芽孢和孢子

(2)接种环惯用________灭菌；需要干燥且耐高温物品可采取________灭菌，另外还能够用高压蒸汽灭菌。

(3)灭菌和消毒最主要区分是是否杀死____________。第6页3.微生物培养基本技术接种环涂布器

(1)配制培养基：计算→称量→溶化→调pH→分装→包扎。

(2)灭菌：高压蒸汽灭菌锅加水→将培养基放入锅内→密封→排冷气→维持压力→取出倒平板(或搁置斜面)。(3)接种平板划线法稀释涂布平板法①接种过程：洗净双手→点燃酒精灯→接种→贴标签。②接种工具：包含____________、____________。③接种方法：______________、____________________。(4)培养：接种后培养皿放入恒温箱内培养。第7页4.土壤中分解尿素细菌分离与计数(1)种菌筛选尿素稀释涂布平板法①培养基：选择培养基。显微镜直接计数法

②特点：________是唯一氮源。

(2)统计菌落数目标方法：________________________、____________________________。

(3)设置对照主要目标：排除试验组中_____________对试验结果影响。非测试原因第8页5.分解纤维素微生物分离——纤维素分解菌筛选(1)试验原理透明圈①纤维素酶催化原理②筛选纤维素分解菌原理即可依据是否产生____________来筛选纤维素分解菌。第9页

(2)过程 土壤取样：选择富含纤维素环境中土壤。 ↓ 选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌数量。 ↓ 梯度稀释 ↓ ↓微生物倒平板第10页挑选产生透明圈菌落↓葡萄糖第11页[判断正误]1.在家庭中用鲜葡萄制作果酒时，应向发酵罐中连续通入空气。()2.腐乳制作利用了毛霉等微生物产生蛋白酶和脂肪酶。()3.用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，普通就能在培养基表面形成单个菌落。()答案：1.×2.√3.√第12页菌种酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物分类真核生物原核生物真核生物原核生物代谢类型异养兼性厌氧异养需氧异养需氧异养厌氧繁殖方式适宜条件下 出芽生殖二分裂孢子生殖二分裂生产应用酿酒、发面酿醋制作腐乳

制作泡菜、酸奶发酵条件前期需氧、后期不需氧一直需氧一直需氧一直无氧考点一微生物与发酵原理

[考点梳理]1.与传统发酵相关几个微生物比较第13页2.果酒、果醋、腐乳、泡菜制作过程及注意事项(1)果酒、果醋①制作过程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒；挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→醋酸发酵→果醋。②注意事项a.材料选择与处理：选择新鲜葡萄，榨汁前，先将葡萄洗洁净再去除枝梗。

b.预防发酵液被污染：榨汁机要清洗洁净并晾干；发酵瓶要清洗洁净，并用体积分数为70%酒精消毒，或用洗涤剂洗涤；装入葡萄汁后，封闭充气口。第14页

c.控制好发酵条件：葡萄汁装入发酵瓶时，要留有1/3空间，其目标是先让酵母菌进行有氧呼吸快速繁殖，增加菌种，耗尽氧气再进行酒精发酵；控制好温度：果酒制作时，温度控制在18～25℃，果醋制作时，温度严格控制在30～35℃；注意是否需要通气：果醋发酵时，需要适时经过充气口充气。(2)腐乳①制作过程：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。第15页②注意事项

a.控制好材料中盐、酒用量：盐和酒精过少，不足以抑制微生物生长；酒精含量过多，则会延长腐乳成熟时间。

b.预防杂菌污染：用来腌制腐乳玻璃瓶要洗涮洁净并用沸水消毒；装瓶时，操作要快速小心，封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯火焰，预防瓶口被污染。c.注意发酵时温度。第16页(3)泡菜

①制作过程：选择原料→修整、洗涤、晾晒、切分成条状或片状→配制泡菜盐水→把处理后原料、盐水等其它调味料装入瓶中→发酵→成品。②注意事项a.泡菜坛选择：选取无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合好泡菜坛。

b.材料选择及用量：蔬菜应新鲜，若放置时间过长，蔬菜中硝酸盐易被还原成亚硝酸盐；清水与盐质量比是4∶1，盐水要煮沸后冷却待用，煮沸盐水可到达杀菌和去除氧气作用。

c.氧气控制：坛盖边缘水槽中要注满水，发酵过程中，要及时补充蒸发掉水分，以确保乳酸菌发酵无氧环境。第17页[高考探究]考向微生物与发酵原理[典例1](年江苏卷)以下关于“腐乳制作”试验叙述，正确是()A.控制发酵温度主要目标是腐乳调味B.腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用C.毛霉主要作用是分解脂肪和淀粉D.成品腐乳表面黏性物质主要由细菌产生第18页

[解析]温度通过影响酶活性影响腐乳发酵，控制发酵温度主要有利于毛霉等微生物生长和腐乳发酵，A错误；香辛料和料酒都能抑制微生物生长，含有防腐作用，B正确；毛霉主要作用是产生蛋白酶和脂肪酶，将蛋白质和脂肪分解成小分子化合物，C错误；成品腐乳表面黏性物质主要是毛霉产生，毛霉属于真菌，D错误。[答案]B第19页[考向预测]

1.(年新课标Ⅱ卷)豆豉是大豆经过发酵制成一个食品。为了研究影响豆豉发酵效果原因，某小组将等量甲、乙两菌种分别接入等量A、B两桶煮熟大豆中并混匀，再将二者置于适宜条件下进行发酵，并在32h内定时取样观察发酵效果。回答以下问题：(1)该试验自变量是____________、____________。(2)假如发觉发酵容器内上层大豆发酵效果比底层好，说明该发酵菌是____________。第20页

(3)假如在试验后，发觉32h内发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵最正确时间；若要确定最正确发酵时间，还需要做事情是_______________________________________________。

(4)从大豆到豆豉，大豆中成份会发生一定改变，其中，蛋白质转变为_________________________，脂肪转变为__________________________。第21页

解析：(1)该试验自变量是菌种、发酵时间。(2)假如发觉发酵容器内上层大豆发酵效果比底层好，说明该发酵菌是好氧菌。(3)假如在试验后，发觉32h内发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵最正确时间；若要确定最正确发酵时间，还需要做事情是延长发酵时间，观测发酵效果，最好发酵效果所对应时间即为最正确发酵时间。(4)从大豆到豆豉，大豆中成份会发生一定改变，其中，蛋白质转变为氨基酸和多肽，脂肪转变为脂肪酸和甘油。答案：(1)菌种发酵时间(2)好氧菌

(3)延长发酵时间，观察发酵效果，最好发酵效果所对应时间即为最正确发酵时间(4)氨基酸和多肽脂肪酸和甘油第22页2.乙醇等“绿色能源”开发备受世界关注，利用玉米秸秆生产燃料酒精大致流程为：

(1)玉米秸秆预处理后，应该选取________酶和________酶形成纤维二糖，再使用__________酶使之转化为发酵所需葡萄糖。(2)从以下哪些微生物中能够提取上述酶？_______(多项选择)。A.酿制果醋醋酸菌B.生长在腐木上霉菌C.制作酸奶乳酸菌D.反刍动物瘤胃中生存一些微生物第23页

(3)若从土壤中分离产生这种酶微生物，所需要培养基为____________(按功效分)，培养基中碳源为________，微生物在纯化培养时惯用方法是__________和_______________。

(4)发酵阶段需要菌种是________，生产酒精时要控制必要条件是________。答案：(1)C1CX葡萄糖苷(2)BD(3)选择培养基纤维素平板划线法稀释涂布平板法(4)酵母菌无氧(密封或密闭)第24页3.下列图是泡菜制作及测定亚硝酸盐含量试验流程示意图，请据图分析，回答以下问题：

(1)制作泡菜宜选取新鲜蔬菜或其它原料，原因是_______________________________________________________。第25页

(2)制备泡菜盐水中，清水与盐质量比为________，盐水煮沸目标是为了杀灭杂菌，冷却后再使用目标是为了保证________等微生物生命活动不受影响。

(3)泡菜制作方法不妥，很轻易造成泡菜变质，甚至发霉变味，发霉主要与________相关。

(4)测定亚硝酸盐含量方法是_____________________。(2)4∶1乳酸菌答案：(1)亚硝酸盐含量低(3)霉菌

(4)比色法第26页考点二微生物试验室培养

[考点梳理] 1.微生物营养物质及功效：微生物营养物质主要有碳源、氮源、无机盐和水这四大类。另外还要满足不一样微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气需求。第27页营养物质定义作用主要起源碳源能提供所需碳元素物质组成生物体细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物能源物质无机化合物(CO2、NaHCO3)，有机化合物(糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等)氮源能提供所需氮元素物质合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物无机化合物(N2、NH3、铵盐、硝酸盐)，有机化合物

(尿素、牛肉膏、蛋白胨等)第28页(1)微生物最常利用碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用氮源是铵盐、硝酸盐。(2)对异养微生物来说，含C、H、O、N化合物既是碳源又是氮源、能源。

(3)有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成一些维生素作为特殊营养物质。第29页划分标准培养基 种类特点和用途化学成份天然培 养基利用动、植物或微生物体(包含用其提取物)制成培养基。优点是营养丰富、种类多样、配制方便、价格低廉，缺点是化学成份不清楚、不稳定。主要用于微生物学试验培养或发酵工业合成培 养基按微生物营养要求准确设计，用各种高纯化学试剂配制成培养基。优点是成份及量确切可知，缺点是价格较贵、配制复杂，且微生物生长比较普通。主要用于微生物分类和判定2.培养基种类第30页划分标准培养基 种类特点和用途化学成份半合成培养基主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天然成份培养基。特点是配制方便，成本低，微生物生长良好。主要用于工业生产物理状态液体培 养基呈液体状态培养基，用于微生物学试验和生产固体培 养基呈固体状态培养基，用于菌种分离、判定、菌落计数、检测杂菌、育种、菌种保藏等半固体培养基在液体培养基中加入少许凝固剂(如0.2%～0.5%琼脂)而制成半固体状态培养基。可用于观察细菌运动能力，进行厌氧菌培养及菌种保藏等(续表)第31页划分标准培养基 种类特点和用途功效选择性培养基依据某微生物特殊营养要求或其对一些物理、化学原因抗性而设计培养基，含有使混合菌样中劣势菌变成优势菌功效。可用于菌种筛选判别培 养基一类加有能与目标菌无色代谢产物发生显色反应指示剂，从而抵达只需用肉眼区分颜色就能方便地从近似菌落中找到目标菌菌落培养基。可用于菌种判别、计数(续表)第32页(1)加入培养基中凝固剂(如琼脂)，普通不能被微生物利用，只起到凝固作用。

(2)选择培养基普通只生长含有特定目标微生物，判别培养基中能够存在其它微生物，而且能判别特定微生物。第33页项目概念惯用方法应用范围消毒使用较为温和物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害微生物(不包含芽孢或孢子)煮沸消毒法：在100℃煮沸5～6min普通物品巴氏消毒法：70～75℃煮30min或在80℃煮15min一些不耐高温液体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等紫外线消毒法：30W紫外灯照射30min接种室3.消毒与灭菌第34页项目概念惯用方法应用范围灭菌使用强烈理化原因杀死物体内外全部微生物(包含芽孢和孢子)灼烧灭菌，用酒精灯火焰充分燃烧层灼烧接种工具灭菌干热灭菌：160～170℃下灭菌1～2h玻璃器皿、金属工具灭菌高压蒸汽灭菌：121℃条件下，灭菌15～30min培养基及容器灭菌(续表)注：消毒与灭菌最大区分是芽孢和孢子是否存活。第35页接种方法操作过程注意事项平板划 线法接种环灭菌→取菌液→在培养液上划线→培养皿倒置培养(1)接种环灼烧：①第一次灼烧：防止接种环上可能存在微生物污染培养物；②每次划线之前灼烧：杀死上次划线结束后残留在接种环上菌种，使每次划线菌种均来自上次划线末端；③划线结束灼烧：杀死接种环上残留菌种，防止污染环境和感染操作人员(2)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高而杀死菌种(3)划线时最终一区域不要与第一区域相连(4)划线用力大小要适当，预防用力过大将培养基划破4.惯用微生物接种方法(1)接种方法比较第36页接种方法操作过程注意事项稀释涂布平板法稀释菌液→取菌液于培养基表面→涂布器灭菌→均匀涂布菌液→培养皿倒置培养稀释操作：每支试管及其中9mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2cm处涂布器灭菌：①涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时多出酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精涂布器在火焰上引燃后冷却；②不要将过热涂布器放在盛放酒精烧杯中，以免引燃其中酒精(续表)第37页(2)倒平板注意事项①培养基灭菌后，需冷却至50℃左右，才能用来倒平板。②整个操作过程需在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌污染。③平板冷凝后要倒置原因：预防皿盖上冷凝水珠落入培养基，造成污染。第38页[高考探究]考向微生物培养

[典例2](年四川卷)有机农药苯磺隆是一个除草剂，长期使用会污染环境。研究发觉，苯磺隆能被土壤中一些微生物降解。分离降解苯磺隆菌株和探索其降解机制试验过程如下列图甲、乙所表示：甲乙第39页

(1)微生物生长繁殖所需主要营养物质有碳源、水、________________四类，该试验所用选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_____________________________。

(2)与微生物培养基相比，植物组织培养培养基常需添加生长素和______________，这些植物激素普通需要事先单独配置成________保留备用。

(3)纯化菌株时，通常使用划线工具是________。划线某个平板培养后，第一划线区域划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能操作失误有________________________________________________。第40页

(4)为探究苯磺隆降解机制，将该菌种培养液过滤离心，取上清液做图乙所表示试验。该试验假设是________________________________________________，该试验设计是否合理？为何？______________________。

[解析](1)微生物生长所需要主要营养物质包含碳源、氮源、水和无机盐。使用选择培养基是因为其允许特定微生物生长，同时又能抑制或阻止其它微生物生长。(2)植物组织培养常需要添加植物激素有生长素和细胞分裂素。MS培养基成份普通先分别配制成母液备用。(3)平板划线法接种时通常第41页用接种环划线。第二区域只有第一条线无菌落，而其它划线都有菌落，很可能是因为接种环在灼烧后未冷却，第一次划线时将菌种烫死，而后接种环冷却，能正常划线，也可能是第一次划线时划线未从第一区域末端开始，使接种环上无菌种。(4)题中试验为取得菌种培养液过滤离心后取上清液，加入蛋白酶处理后，测得其对苯磺隆降解率。由此可判定试验假设是目标菌株经过分泌某种蛋白质来降解苯磺隆。但因为缺乏空白对照，不能比较蛋白酶处理是否降低苯磺隆降解率，该试验不能得出对应结论。第42页[答案](1)氮源和无机盐确保只有能利用苯磺隆微生物能正常生长和繁殖(2)细胞分裂素母液①接种环灼烧后未冷却；②划线未从第一区域

(3)接种环末端开始不合理，缺乏空

(4)目标菌株能分泌降解苯磺隆蛋白质白对照第43页

(1)每次划线前和划线后，接种环都要进行灼烧灭菌，所以需要灼烧接种环6次。其中第一次灼烧是为了预防杂菌污染；每次划线前灼烧是为了杀死残留菌种，确保每次划线菌种来自上次划线末端；最终一次灼烧是为了预防接种微生物扩散，造成新污染。

(2)下一次划线菌种起源是上一次划线最末端，所以前几次划线都是上一次尾和下一次首相连，不过第五次划线不与第一次划线相连。(3)在第五次划线上菌落往往是由一个细菌繁殖形成。(4)实际上菌落数都要小于细菌数，因为有菌落是两个或多个细菌形成。第44页成份蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4指示剂琼脂含量/g10.05.05.02.00.212.0将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL[考向预测]

4.(年江西赣中南五校联考)下表是某企业研发一个培养大肠杆菌菌群培养基配方，请依据表格和所学知识回答以下相关问题：

(1)从生态系统成份上看，大肠杆菌属于____________。

(2)若依据用途划分，该培养基属于________(填“选择”或“判别”)培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中尿素分解菌，培养基营养成份必需怎样更改？____________，并用____________作为指示剂。第45页

(3)在微生物培养过程中，为预防杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行____________；操作者双手需要进行清洗和________。

(4)图1和图2是培养某细菌结果图，其对应接种方法分别是________________和________________，这两种方法接种后培养基上都能够得到由单个细胞繁殖所形成________。图1所用接种方法可用来对活菌进行计数。另外，测定微生物数目标另一个方法是________________。第46页图1图2

(5)以下过程中所利用主要微生物细胞结构与大肠杆菌较相同有________。A.制作果酒C.制作泡菜B.由果酒制作果醋D.制作腐乳第47页

解析：(1)大肠杆菌只能从环境中摄取有机物，不能自己合成有机物，属于分解者。(2)该培养基中含有指示剂，属于判别培养基。尿素分解菌能够分解尿素，而其它微生物不能，所以可将培养基中蛋白胨改为尿素用于筛选土壤中尿素分解菌，并用酚红作为指示剂，尿素分解菌分解尿素产生NH3可使酚红变红。(3)培养微生物时，培养基和培养皿需要灭菌，操作者双手需要进行消毒。(4)图1采取是稀释涂布平板法，图2采取是平板划线法。单个微生物细胞繁殖所形成细胞群叫菌落。(5)A、B、C、D中所用到主要微生物分别是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、毛霉，醋酸菌、大肠杆菌和乳酸菌都是原核细胞，结构相同。答案：(1)分解者(2)判别将蛋白胨改成尿素酚红(3)灭菌消毒(4)稀释涂布平板法平板划线法菌落显微镜直接计数法(或“血球计数板计数法”)(5)BC第48页

5.无菌操作是微生物接种技术关键。传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。回答以下相关问题：

(1)消毒和灭菌是两个不一样概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖能力。消毒指仅杀死一部分对人体有害病原菌而对被消毒物体基本无害。以下哪些事物适用于消毒处理？________。①皮肤②饮用水③牛奶④注射器⑤培养皿⑥接种环⑦培养基⑧果汁⑨酱油⑩手术刀A.①②③⑧⑨C.①②③④⑤⑥⑧B.④⑤⑥⑦⑩D.以上全部第49页

(2)配制培养基时各种成份在溶化后分装前必须进行__________________，接种前要进行________________，在整个微生物分离和培养中，一定注意要在无菌条件下进行。第50页

(3)在微生物试验室培养中，取得纯净培养物关键是____________________。上图是利用____________法进行大肠杆菌接种，把聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面。为达到这一目标，操作上应注意：①每次划线前要________________。②冷却后从上一区划线末端开始划。③首尾区____________。

(4)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对固体培养基应采取检测方法是______________________________________________________，观察培养基上是否有菌落产生。第51页

(5)利用培养基不但能够分离培养大肠杆菌，也能够进行植物组织培养。与大肠杆菌培养显著不一样是，用于组织培养培养基中还需要加入______________。

(6)有位同学在家制作泡菜时，为防止杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是___________________________________。第52页

解析：(1)①②③⑧⑨应采取消毒，④⑤⑥⑦⑩应采取灭菌，故选A。(2)配制培养基时各种成份在溶化后分装前必须调整pH，培养基接种前要进行高压蒸汽灭菌，再进行倒平板。(3)微生物试验室培养关键在于预防杂菌污染，采取平板划线法接种，需要注意是连续划线时，每次划线前要灼烧接种环，同时划线结束首尾区不能相连。(4)检测培养基是否被污染，对固体培养基应采取检测方法是将未接种(或接种等量无菌水)培养基在适宜温度下放置适当初间，观察培养基上是否有菌落产生。(5)植物组织培养MS培养基中需要加入植物激素(生长素和细胞分裂素)。(6)制作泡菜时，为防止杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是青霉素杀死了乳酸菌。第53页答案：(1)A(2)调整pH高压蒸汽灭菌(3)预防外来杂菌入侵平板划线①灼烧接种环③不连接(不重合) (4)将未接种(或接种等量无菌水)培养基在适宜温度下放置适当初间

(5)植物激素(或生长素和细胞分裂素) (6)青霉素杀死了乳酸菌第54页项目分离分解尿素细菌分离分解纤维素微生物原理提供有利于目标菌株生长条件(如营养、温度、pH等)，同时抑制其它微生物生长，惯用选择培养基筛选刚果红能够与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心透明圈，能够经过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌考点三微生物分离与计数

[考点梳理] 1.分离土壤中分解尿素细菌与分离分解纤维素微生物比较第55页项目分离分解尿素细菌分离分解纤维素微生物过程土壤取样→样品稀释→培养与观察土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布于含刚果红(CR)判别纤维素分解菌培养基上→挑选产生透明圈菌落→发酵培养判定酚红指示剂(变红)刚果红(产生透明圈)

选择培养基固体培养基，尿素为唯一氮源液体培养基，纤维素为唯一碳源 判别培养基液体固体(续表)第56页2.统计菌落数目标方法(1)稀释涂布平板法

①原理：当样品稀释浓度足够高时，培养基表面生长一个菌落起源于样品稀释液中一个活菌。经过统计平板上菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作a.设置重复组，增强试验说服力与准确性。b.为了确保结果准确，普通选择菌落数在30～300平板进行计数。第57页

③计算公式：每克样品中菌株数＝(C/V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长平均菌落数，V代表涂布平板时所用稀释液体积(mL)，M代表稀释倍数。(2)显微镜直接计数法：①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积样品中微生物数量。②方法：用计数板计数。③缺点：不能区分死菌与活菌。第58页[高考探究]考向微生物分离与纯化

[典例3](年新课标Ⅲ卷)某同学用新鲜泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生乳酸能溶解培养基中碳酸钙。回答以下问题：

(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用________________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释理由是_________________________________________________________________